4-羟基苯乙烯基吡啶为辣根过氧化物酶底物的酶荧光免疫传感体系测定布氏杆菌抗体

合成了一种新型辣根过氧化物酶(HRP)荧光底物-4-羟基苯乙基吡啶(pHSP),并首次将它运用于酶联荧光免疫传感体系.对pHSP化学性质的研究证实,pHSP在空气中较稳定,对HRP,H2O2的荧光响应性能优于传统HRP荧光底物,如对羟苯乙酸、Amplex Red和佳昧醇等.在pH 5.8的Britton-Robinson缓冲溶液中,pHSP本身只有极弱的荧光,在HRP-IgG催化下可被H2O2氧化成二聚体产物,该二聚体在300 nm的激发光下能发射波长为437 nm的强荧光,并且反应体系的荧光增加与HRP量在一定浓度范围内成线性相关.根据此原理,建立了兔布氏杆菌抗体的酶联荧光传感分析新方法.运用制备的传感装置测定兔布氏杆菌抗体的线性范围为6.3×10-11～1×10-8mol·L-1,抗体检出限为6.3×10-11mol·L-1,相对标准偏差为4.1%(n=11).pHSP的二聚体产物水溶性很低,利用设计的装置较好地解决了传统测定溶液体系方法灵敏度不高的问题.     

4-羟基苯乙烯基吡啶为HRP底物的酶荧光免疫传感体系测定布氏杆菌抗体

本文合成了一种新型辣根过氧化物酶（HRP）荧光底物—4-羟基苯乙基吡啶（pHSP）,并首次将它运用于酶联荧光免疫传感体系。对pHSP化学性质的研究证实,pHSP在空气中较稳定,对HRP、H2O2的荧光响应性能优于传统HRP荧光底物如对羟苯乙酸、Amplex Red和佳味醇等。pHSP本身只有极弱的荧光,在HRP催化下可被 H2O2氧化成二聚体产物,该二聚体在300 nm的激发光下能发射波长为437 nm的强荧光,并且反应体系的荧光增加与HRP量在一定浓度范围内成线形相关。根据此原理,建立了兔布氏杆菌抗体的酶联荧光传感分析新方法。运用制备的传感装置测定兔布氏杆菌抗体的线形范围为110-5 1.6 10-3 g/L,抗体检出限为110-5 g/L,相对标准偏差为4.1%（n=11）。 pHSP的二聚体产物水溶性很低,利用设计的装置较好地解决了传统测定溶液体系方法灵敏度打折的问题。     

白藜芦醇作辣根过氧化物酶底物的布氏杆菌抗体酶联免疫传感器研究

一种纯天然产物白藜芦醇用作辣根过氧化物酶(HRP)底物。对其化学性质的研究证实,白藜芦醇在空气中较稳定,对HRP、H2O2的电化学响应性能优于传统HRP底物,对人体无毒害。白藜芦醇在HRP催化下可被H2O2氧化成醌,产物醌在电极上于-376 mV处可被还原,其电流的大小与HRP的浓试在一定浓度范围内呈线性相关。将兔布氏杆菌抗原包埋在石墨-石蜡基质中制备了测定兔布氏杆菌抗体的电化学酶联免疫传感器,该传感器测定兔布氏杆菌抗体的线性范围为3×10-4~1.65×10-2g/L;检出限为1×10-4g/L;RSD为4.6%。本方法制备免疫传感器的电化学性能稳定,抗原活性保持良好。     

基于新型HRP底物白藜芦醇和Ag/SiO_2纳米粒子的酶联荧光免疫传感体系

以一种纯天然产物——白藜芦醇(resveratrol,RST)作为辣根过氧化物酶(HRP)荧光底物运用于酶联荧光免疫传感体系.RST对HRP,H2O2的荧光响应性能优于传统HRP荧光底物,诸如对羟苯丙酸、AmplexRed和佳味醇.RST本身只有极弱的荧光,在HRP催化下可被H2O2氧化成二聚体产物,该二聚体在315nm的激发光下能发射波长为462nm的强荧光,并且反应体系的荧光强度增加值与HRP量在一定浓度范围内成线性相关.根据此关系和竞争型免疫定量原理,以日本血吸虫抗体(SjAb)为模型分析对象,建立了基于新HRP荧光底物的酶联荧光传感分析新方法.运用制备的传感装置测定SjAb的线性范围为1.5×10-6～7.3×10-4g/L,检出限为1.5×10-6g/L,测定浓度为5×10-6g/LSjAb的相对标准偏差为4.7%(n=10).RST的二聚体产物水溶性很低,通过该装置可将酶反应产物沉积在具Ag/SiO2纳米粒子的传感界面上,利用纳米Ag/SiO2对产物吸附富集作用,不仅解决了传统方法不便于测定低水溶性的产物的问题,而且提高了分析灵敏性.     

MAP-H2O2-HRP伏安酶联免疫分析测定南方菜豆花叶病毒

提出间氨基酚(MAP)-H₂O₂-辣根过氧化物酶(HRP)伏安酶联免疫分析新体系,并用于南方菜豆花叶病毒(SBMV)的测定.以线性扫描二阶导数伏安法检测HRP催化H₂O₂氧化MAP的产物,用于游离HRP及SBMV的测定,灵敏度均高于经典的ELISA显色光度法.本法对HRP测定的线性范围为1.0×10^-8～1.0×10^-6g/L,检测限为3.8×10^-9g/L;对SBMV测定的线性范围为4.0～5000ng/mL,检测限为4.0ng/mL.用所建立的方法测定病毒感染病叶澄清液的最高稀释比为1∶1.5×10⁵,并与现行的ELISA显色光度法进行对照,二者相关性很好.     

辣根过氧化物酶的电化学固定化及其对H2O2的生物电催化还原作用

利用电化学固定化方法制备了聚吡咯/辣根过氧化物酶(PP/HRP)膜电极,并研究了其电化学行为。在除氧的磷酸盐缓冲液介质中,PP/HRP电极加速H₂O₂的还原,归因于酶加成物的直接电子传递。探索HRP与电子传递体K₄Fe(CN)₆在聚吡咯(PP)膜中的同时固定化条件及其膜电极的电化学行为,实验证实,K₄Fe(CN)₆在酶膜中的存在使得H₂O₂的还原电位强烈正移,在-0.05V的工作电位下能对H₂O₂进行检测,相应的电极过程可用间接氧化还原催化机理解释。     

基于氧化石墨烯信号放大的化学发光法联合检测甲胎蛋白和癌胚抗原

提出了一种基于信号放大技术的流动注射化学发光免疫传感器, 用于联合检测人血清中甲胎蛋白(AFP)和癌胚抗原(CEA)的含量. 该传感器首先用表面接枝羧基的氧化石墨烯来吸附固定辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗, 制得信号放大型免疫探针. 然后用合成的磁性介孔材料Fe₃O₄/SiO₂来吸附固定AFP和CEA的单克隆抗体, 用磁铁将其吸附在两个检测池内壁. 当待检样品和信号放大型免疫探针陆续注射进入相应检测池, 发生夹心式免疫反应, 形成的免疫复合物被磁条吸附在检测池内壁. 随后加入鲁米诺和H₂O₂发光底物, 与酶标记物发生酶促增强的化学发光反应, 并通过控制设在两个管路上的开关来控制鲁米诺和H₂O₂的流通, 相继检测两个检测池中的化学发光信号, 从而实现两种待测物的同时检测.     

具有过氧化物酶活性的Imm-Fe3+-IL的制备及用于比色法测定H2O2和葡萄糖

通过溶胶-凝胶法制备的Imm-Fe³⁺-IL纳米材料具有类过氧化物酶的活性,能够催化过氧化氢(H₂O₂)快速氧化3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB)产生相应的颜色变化。 稳态动力学分析表明,Imm-Fe³⁺-IL纳米材料遵循典型的Michaelis-Menten模型和乒乓机理。 辣根过氧化物酶(HRP)相比,Imm-Fe³⁺-IL纳米材料纳米材料具有更强的亲和性。 联合葡萄糖氧化酶建立了H₂O₂和葡萄糖的比色检测方法。 结果显示:H₂O₂和葡萄糖的浓度与反应体系的吸光度呈良好的线性关系,H₂O₂的线性范围为1~200 μmol/L,葡萄糖的线性范围为10~200 μmol/L,最低检出限(LOD)分别为0.35和3.31 μmol/L。     

基于新型HRP底物白藜芦醇和Ag／SiO2纳米粒子的酶联荧光免疫传感体系

以一种纯天然产物——白藜芦醇（resveratrol,RST）作为辣根过氧化物酶（HRP）荧光底物运用于酶联荧光免疫传感体系．RST对HRP,H2O2的荧光响应性能优于传统HRP荧光底物,诸如对羟苯丙酸、Amplex Red和佳味醇．RST本身只有极弱的荧光,在HRP催化下可被H2O2氧化成二聚体产物,该二聚体在315nm的激发光下能发射波长为462nm的强荧光,并且反应体系的荧光强度增加值与HRP量在一定浓度范围内成线性相关．根据此关系和竞争型免疫定量原理,以日本血吸虫抗体（SjAb）为模型分析对象,建立了基于新HRP荧光底物的酶联荧光传感分析新方法．运用制备的传感装置测定SjAb的线性范围为1．5×10^-6～7．3×10^-4g／L,检出限为1．5×10^-6g／L,测定浓度为5×10^-6g／L SjAb的相对标准偏差为4．7％（n=10）．RST的二聚体产物水溶性很低,通过该装置可将酶反应产物沉积在具Ag／SiO2纳米粒子的传感界面上,利用纳米Ag／SiO2对产物吸附富集作用,不仅解决了传统方法不便于测定低水溶性的产物的问题,而且提高了分析灵敏性．     

过渡金属-联咪唑-Dawson型钨磷酸盐杂化化合物的酶固定化性能

利用水热法和直接沉淀法, 设计合成了5例由过渡金属(TM)-联咪唑配阳离子与Dawson型钨磷酸阴离子构成的多金属氧酸盐(POM)基有机-无机杂化化合物[Ni(H₂biim)₃]₄[Ni(H₂biim)₂(P₂W₁₈O₆₂)₂]·2H₂O(1), [Co^III(H₂biim)₃]₂[P₂W₁₈O₆₂]·8H₂O(2), [Cu(H₂biim)₂]₃[P₂W₁₈O₆₂]·4H₂O(3), [Co^II(H₂biim)₃]₂H₂[P₂W₁₈O₆₂]·9H₂O(4)和 [Ni(H₂biim)₃]₃[P₂W₁₈O₆₂]·2H₂O(5); 并利用X射线单晶衍射分析(SC-XRD)、 红外光谱(IR)和热重-差热分析 (TG-DTA)等对其进行了表征. 化合物1~5作为载体用于固定辣根过氧化物酶(HRP)时, 显示出了较高的酶固定化能力. 另外, 利用圆二色光谱(CD)和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)等方法评价了固定化酶HRP/1~HRP/5的重复使用性、 储存稳定性和检测过氧化氢(H₂O₂)的性能. 由于该类POMs与HRP间存在强的相互作用, 利用简单的物理吸附法即可实现POMs对HRP的固载. POMs对酶的固定不但提高了HRP对使用及储存环境的耐受性, 同时也拓展了POMs在酶固定化领域的应用.     

Kinetic Spectrophotometric Determination of Trace Amounts of Nitrite by Catalytic Reaction between Methylthymol Blue and Bromate

A kinetic spectrophotometric method for determination of trace nitrite in two dynamic ranges (2–100 and 100–500 ng/mL) based on its catalytic effect on the reaction between methylthymol blue and potassium bromate in acidic (sulfuric acid) media is described. The reaction was monitored spectrophotometrically by measuring the decreasing color of methylthymol blue at 437 nm by the fixed‐time method of 4.0 min at 30°C. The detection limit is 0.6 ng/mL, and the relative standard deviations for 50.0 and 250.0 ng/mL nitrite are 1.6% and 1.3%, respectively. The method was used for the determination of nitrite in water samples.     

OAP-H~2O~2-HRP伏安酶联免疫分析新体系测定人血清铁蛋白

首次提出邻氨基酚(OAP)-H~2O~2-辣根过氧化物酶(HRP)伏安酶联免疫分析新体系并用于人血清中铁蛋白的测定.本方法以线性扫描二阶导数伏安法栓测HRP催化H~2O~2氧化OAP的产物,用于游离HRP和各种HRP标记物的测定,灵敏度均高于经典的ELISA显色光度法.测定游HPR的线性范围为1.0x10^-^1^2-4.0x10^-^9g/mL,检测限达6.0x10^-^1^3g/mL.本法对铁蛋白测定的线性范围为0.2-320ng/mL,用所建立的方法对人血清样品进行了测定,并与现行的ELISA显色光度法进行对照,二者相关性很好.对此伏安酶联免疫分析新体系的电极还原过程也进行了详细的研究.     

季胺-辣根过氧化物酶-过氧化氢显色新体系及其在酶活性检测中的应用

建立了光度法测定辣根过氧化物酶(HRP)活性的季胺-过氧化氢-HRP新体系, 探讨了反应机理. 该方法基于含KI的pH 4.5 PBS介质中, HRP催化H₂O₂氧化季胺[二(4–二甲氨基苯基)甲烷]的显色反应在462 nm处的吸光度. 吸光度与HRP活性呈线性关系. 该可溶性的季胺比目前临床常用显色剂3,3',5,5'-四甲基联苯胺更稳定, 克服了后者的缺点. 在选定的实验条件下, 测定HRP的线性范围为2.0×10^－9～2.5×10^－7 g/mL, 检出限为3×10^－10 g/mL. 应用于HRP标记马抗人甲胎蛋白免疫标记物的测定, 结果满意. 该方法操作简便, 灵敏度高, 在临床上有较好的应用前景.     

PAP-H2O2-HRP伏安酶联免疫分析新体系测定人血清总甲状腺素

目前临床检测中测定总甲状腺素(T₄)的常用方法有间接血凝试验、琼脂双扩散及ELISA等方法^[1].其中ELISA法是目前较为流行的检测方法,但灵敏度不高.伏安酶联免疫分析法具有广阔的应用前景^[2,3].     

十二烷基苯磺酸钠共振瑞利散射和共振非线性散射光谱法测定亚甲蓝

在0.05 mol/L（pH 1.3）的 HCl 介质中,十二烷基苯磺酸钠（SDBS）与亚甲蓝（MB）借静电引力和疏水作用力形成 2︰1 的离子缔合物,导致溶液共振瑞利散射(RRS)、二级散射(SOS)和倍频散射(FDS)急剧增强,并产生新的 RRS,SOS 和 FDS 光谱。最大 RRS, SOS 和 FDS 分别位于 310, 647 和 341 nm, 散射强度在一定范围内与MB的浓度成正比,方法具有很高的灵敏度,对于MB的检出限(3?)分别为 1.2 ng/mL (RRS法)、1.4 ng/mL (SOS法) 和 1.7 ng/mL (FDS法)。据此发展了一种测定痕量亚甲蓝的新方法。用于人血清样品中亚甲蓝含量的检测,回收率在 94.4-103.7 ? 之间。实验优化了反应条件,考察了共存物质的影响,并结合量子化学AM1法讨论了反应机理和散射光谱产生及增强的原因。     

Determination of puerarin in rat cortex by high-performance liquid chromatography after intravenous administration of Puerariae flavonoids

In the present study, a rapid and simple high-performance liquid chromatographic (HPLC) assay for determination of puerarin in rat cortex was developed. The analysis was carried out on a Zorbax SB-C18 column with mobile phase acetonitrile-0.5% aqueous phosphoric acid (11:89, v/v). The detection was by UV at 252 nm. The calibration curve for puerarin was linear (r=0.9999) over the concentration range 0.516-206.250 microg/mL. The limit of detection was 0.206 microg/mL (signal-to-noise ratio 3) and the limit of quantification (signal-to-noise ratio 10) was 0.516 microg/mL. Stability studies showed that puerarin was stable at temperatures of 4 degrees C in methanol for at least 30 days. The intra- and inter-day assays of puerarin from rat cortex were less than 2.5% at concentration range 0.516-206.250 microg/mL and good overall recoveries (97.4-101.7%) were found at same concentrations. The method was applied to determine the pharmacokinetic parameters and the time course of puerarin in rat cortex, following a single dosage of intravenous administration of flavonoids from Puerariae radix at 32 mg/kg of puerarin to male Wistar rats.     

Comparison of Electrochemical and Spectro-Photometric Detection in Hrp-Based Elisa for Tobacco Mosaic Virus

ABSTRACT

An electrochemical method was compared with a spectrophotometric method using a horseradish peroxidase (HRP)-based indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) with direct antigen coating (DAC) technique for the determination of tobacco mosaic virus (TMV). In substrates for a spectrophotometric HRP-based ELISA method, was selected as the substrate for the electrochemical method as well as the spectrophotometric method. 2, 3-Diaminophenazine is the product of the oxidation of OPD with H₂O₂ catalyzed by HRP in the selected conditions. It is electroactive and has a sensitive voltammetric response at -0.93 V (vs. Ag/AgCl) in alkaline solution. The detection limit of free HRP, by second-order derivative linear-sweep voltammetry, is 1.1 mU/L. This method can be further used to detect TMV antigen. The peak current is linear with TMV concentration in the range of 0.25-5.0 ng/mL. The detection limit for TMV is 0.25 ng/mL and the highest dilution ratio detected for the infected leaf sap is 1:102400. Compared with the classical OPD ELISA spectrophotometric method, the detection limits of the electrochemical method for the clarified TMV and the infected leaf sap detection are about ten and four times lower, respectively.     

氯化血红素模拟过氧化物酶高效液相色谱柱后衍生法测定过氧化氢和水溶性有机过氧化物

研究了氯化血红素（Ｈｅｍｉｎ）模拟辣根过氧化物酶（ＨＲＰ），对羟基苯乙酸（ＰＨＰＡＡ）作 底物，高效液相色谱（ＨＰＬＣ）柱后衍生荧光法测定Ｈ２Ｏ２和水溶性有机过氧化物的方法。采用 Ｈｅｍｉｎ作催化剂柱后衍生反应的最佳ｐＨ值约为１１，与荧光检测ｐＨ值一致，使得以往ＨＰＬＣ 柱后衍生方法所需的高压泵从３台减少到２台，而一些不能作为ＨＲＰ底物的羟烷基过氧化 物在ｐＨ值≥１０的溶液中迅速水解为Ｈ２Ｏ２从而得到测定。优化了测定Ｈ２Ｏ２和甲基过氧化 氢（ＣＨ３ ＯＯＨ， ＭＨＰ）的条件。最佳条件下 Ｈｅｍｉｎ方法测定 Ｈ２Ｏ２的检测限为 ９．０ × １０－９ ｍｏｌ／Ｌ， 测定 ＭＨＰ的检测限为 ２．０ × １０－７ ｍｏｌ／Ｌ。     

A new dual immunoassay for tumor markers based on chemiluminescence signal amplification by magnetic mesoporous silica and enzyme modified gold nanoparticles

A sensitive dual immunoassay was proposed for the determination of carcinoembryonic antigen (CEA) and α-fetoprotein (AFP) based on signal amplification. Monoclonal antibodies immobilized on magnetic mesoporous silica particles (Fe(3)O(4)/SiO(2)) were prepared as the primary probe. Horseradish peroxidase (HRP) labeled antibodies co-coated with HRP on gold nanoparticles (AuNPs) were used as the secondary probe to achieve signal amplification. HRP tags were retained in the flow cells after a sandwich immunoassay. By controlling two switches on the two channels, chemiluminescent substrates were injected orderly man way, and then signals for CEA and AFP were sequentially detected by HRP-luminol-H(2)O(2). Due to the increased amount of HRP on AuNPs and the increased amount of monoclonal antibodies on Fe(3)O(4)/SiO(2), the signals were largely amplified. Under the optimal conditions, CEA and AFP could be detected in the linear ranges of 1.0 - 80 and 1.0 - 75 ng mL(-1) with detection limits of 0.25 and 0.5 ng mL(-1), respectively.