制备型高效液相色谱法从积雪草提取物中分离纯化积雪草甙和羟基积雪草甙对照品

积雪草甙和羟基积雪草甙是积雪草及其相关制品质量控制的两个指标成分,本研究利用制备型高效液相色谱从积雪草提取物中同 时分离纯化得到这两个成分。对制备色谱的流动相组成、流速、进样量和检测波长等制备参数进行了优化。采用的色谱柱为C18柱(50 mm×200 mm,5 μm);流动相为甲醇-水(体积比为60∶40),流速100 mL/min;二极管阵列检测器在220 nm检测;进样体积为1.5 mL。在20 min的运行时间内,积雪草甙和羟基积雪草甙与干扰成分得到很好的分离,产品纯度达到98%以上。此方法具有快速高效、产品纯度高的 特点,可以用于制备积雪草甙和羟基积雪草甙对照品。     

女贞子中红景天苷的HPLC制备分离

研究了制备型高效液相色谱分离纯化女贞子中红景天苷的方法。制备色谱的参数为:色谱柱为C18柱(50 mm×200 mm,5μm),流动相为甲醇-水(体积比为7.5∶92.5),流速100 mL·min-1,二级管阵列检测器在278 nm检测,进样体积为2.2 mL。在18 min的运行时间内,红景天苷与干扰成分得到很好的分离,经HPLC检测纯度均达到98%以上。此方法具有快速高效、分离组分纯度高的特点,可用于制备红景天苷。     

高速逆流色谱法从秦艽地上部分制备分离龙胆苦苷

采用高速逆流色谱法分离纯化秦艽地上部分中的龙胆苦苷。溶剂系统为V(氯仿)∶V(甲醇)∶V(水)=4∶4∶2,上相为固定相,下相为流动相,转速为800r/min,流速为2mL/min。所得产物经LC-MS分析为龙胆苦苷,纯度经高效液相色谱分析为94.0%(峰面积归一化法)。在保证分离效果的前提下,增大进样量,摸索制备分离龙胆苦苷的高速逆流色谱条件,为用高速逆流色谱法大量制备龙胆苦苷提供了一个可行方法。     

高效液相色谱法制备胡黄连中胡黄连甙Ⅱ的对照品

运用高效液相色谱法(HPLC)制备了胡黄连中胡黄连甙Ⅱ的对照品,色谱条件为C 18制备柱(300 mmX20 mm i.d., 10 μm),流动相为甲醇-水(体积比为1∶1),流速8 mL/min,265　nm紫外检测,进样量100　μL。用HPLC和毛细管区带电泳法(CZE)测定了自制对照品的纯度,结果表明,自制对照品的纯度在99.0%以上,稳定性好, 且2种方法测定的结果具有可比性。此制备方法克服了以前用经典柱色谱方法分离 纯化过程中,胡黄连甙Ⅱ不稳定,操作繁琐和纯度低的缺点。     

青藏高原龙胆属中10种野生药材的4种主要活性成分的测定分析

建立反相高效液相色谱法同时测定青藏高原龙胆属中10种常用野生药材的獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷、异荭草苷的含量.方法:采用反相高效液相色谱法.乙腈-水(0.1%的H3PO4)为流动相,梯度洗脱,洗脱条件为0.01 min→20.00 min→20.01 min→40.00 min→40.01 min→50.00 min,乙腈:12%→12%→15%→33%→100%→100%,体积流量1.0 mL/min,检测波长为240 nm,柱温25 ℃.4种成分均达到基线分离,线性良好.     

高效液相色谱法制备罗汉果甜甙Ⅴ标准品

为深入研究罗汉果中功能成分的药理药效,进一步开发罗汉果中的有效成分,将罗汉果鲜果的水提物以AB 8吸附树脂分离、D 280离子交换树脂脱色后,利用半制备高效液相色谱法得到三萜皂甙类化合物罗汉果甜甙Ⅴ标准品,纯度达98 5%。色谱柱为AlltechEconosphereNH2柱;流动相为乙腈 水(体积比为68∶32)溶液,流速5mL/min;检测波长203nm;柱温40℃。此方法具有操作简便、重现性好、产品纯度高等优点。     

HPLC法测定青海不同地区云雾龙胆花中两种活性成分的含量

建立了云雾龙胆花中龙胆苦苷和獐牙菜苦苷含量测定的HPLC方法。采用微波辅助动态回流法进行提取,色谱条件:Fusion-RP80 AC18柱(150×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-0.2%磷酸溶液梯度洗脱(0~25 min:15%~30%);流速:1 mL/min;柱温:30℃r=;检测波长240 nm。云雾龙胆花中獐牙菜苦苷和龙胆苦苷的色谱峰与共存组分完全达到基线分离,线性范围分别为0.105~0.945μg(r=0.9999),0.3~0.7μg(r=0.9999),平均加样回收率分别为95.7%(RSD=1.1%),98.1%(RSD=1.5%)。     

固相萃取/超高效液相色谱法测定龙胆泻肝丸中栀子苷、龙胆苦苷与黄芩苷

建立了一种快速测定龙胆泻肝丸中栀子苷、龙胆苦苷和黄芩苷3种有效成分的超高效液相色谱方法。样品经50%甲醇提取,C18固相萃取(SPE)小柱净化后,采用Ultimate XB-C18色谱柱(4.6 mm×50 mm,1.8μm)进行分离,以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱。考察了不同规格色谱柱、流动相梯度比例、进样体积、柱温和流速对分离效果的影响,并对SPE柱流出液的平衡体积进一步考察,在最佳分析条件下进行液相色谱分析,该方法显示了良好的线性关系(r≥0.999 8),其定量下限(LOQ)为0.24～0.44 mg/L,加标回收率为95%～99%。该方法快速、准确,可满足实际检测需要。     

应用制备高效液相色谱同时制备6种大豆异黄酮单体的方法研究

经大孔吸附树脂纯化大豆异黄酮粗提物后,以制备型高效液相色谱法(PHPLC)分离得到高纯度的大豆异黄酮单体。以SHIM-pack PRC-ODS(20 mm×250 mm,5μm)制备柱,考察了流动相组成及流速、进样量对分离度的影响,确定了最佳色谱条件为乙腈-水流动相梯度洗脱,进样量800μL,流速10 mL/min,在120 min内实现了6种异黄酮单体的基线分离及制备。经超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)鉴定,6种异黄酮单体依次为大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、大豆素、黄豆黄素、染料木素。6种产品的纯度分别为95.54%、90.14%、100%、100%、96.27%、100%。方法具有简便易行、稳定性好、产品纯度高等特点,适用于大豆异黄酮标准品的制备。     

应用制备高效液相色谱同时制备6种大豆异黄酮单体的方法研究

经大孔吸附树脂纯化大豆异黄酮粗提物后,以制备型高效液相色谱法(PHPLC)分离得到高纯度的大豆异黄酮单体。以SHIM-pack PRC-ODS(20 mm×250 mm,5 μm)制备柱,考察了流动相组成及流速、进样量对分离度的影响,确定了最佳色谱条件为乙腈-水流动相梯度洗脱,进样量800 μL,流速10 mL/min,在120 min内实现了6种异黄酮单体的基线分离及制备。经超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)鉴定,6种异黄酮单体依次为大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、大豆素、黄豆黄素、染料木素。6种产品的纯度分别为95.54%、90.14%、100%、100%、96.27%、100%。方法具有简便易行、稳定性好、产品纯度高等特点,适用于大豆异黄酮标准品的制备。     

野生与种植青海川西獐牙菜中微量元素的测定

为了对比野生与种植青海川西獐牙菜中微量元素的变化,分别采集野生川西獐牙菜与种植青海川西獐牙菜种子采收前后的全植株,采用原子吸收光谱仪测定了其铜、锌、铁、锰、钴等微量元素含量。结果表明,野生川西獐牙菜较种植青海川西獐牙菜中微量元素含量高,种植川西獐牙菜在成熟种子采收后较采收前(花果期)铁、锰、钴、锌等元素含量高。     

野生与种植青海川西獐牙菜中矿物质元素含量特征

青海地道中藏药材川西獐牙菜人工种植试验初见成效。为了对比野生与种植青海川西獐牙菜中矿物质元素的变化,分别采集野生与种植青海川西獐牙菜种子采收前后的全植株,采用原子吸收光谱仪分析测定了其钾、钠、钙、镁等矿物质元素含量。结果表明,野生川西獐牙菜中,青海玉树较四川川西地区的钠、磷元素含量高,钙、钾、镁元素含量低。种植青海川西獐牙菜在成熟种子采收后较采收前钠、镁、钙、磷等显著增加,且种植青海川西獐牙菜与青海玉树地区野生川西獐牙菜中矿物质元素含量较为接近。     

人工栽培与野生种川西獐牙菜矿物元素和氨基酸对比分析

川西獐牙菜是传统的藏药材,被广泛的应用于肝胆疾病的治疗。近年来,其需求量日益增加,自然资源远不能满足需求,发展人工栽培川西獐牙菜替代野生川西獐牙菜成为必然。研究比较人工栽培与野生川西獐牙菜之间的各种成分含量,对指导人工栽培川西獐牙菜替代野生川西獐牙菜用药有关键意义。对人工栽培及野生川西獐牙菜的20种矿物元素及18种氨基酸进行测定比较发现,人工栽培川西獐牙菜的矿物元素绝大多数比野生川西獐牙菜含量低,人工栽培川西獐牙菜氨基酸则比野生川西獐牙菜含量高。     

野生与施肥种植川西獐牙菜中矿物质元素含量的季节变化

为对比野生与施肥（尿素和磷酸二铵）种植青海川西獐牙菜中元素含量的变化,分别采集野生和6～10月施肥种植川西獐牙菜全植株,采用原子吸收光谱仪分析测定了其钾、钠、钙、镁等矿物质元素含量和铜、锌、铁、锰、钴等微量元素含量。结果表明,施肥种植川西獐牙菜中矿物质元素、微量元素含量除钾外,均高于野生种,并在9～10月份达到最高水平,可替代野生种人药,按需适时采收,以解决资源匮乏。     

川西獐牙菜及制剂中齐墩果酸的高效液相色谱测定

中药及制剂中齐墩果酸分离测定的色谱方法的色谱条件是：ＯＤＳ柱，甲醇一水（９０：１０Ｖ／Ｖ）为流动相，紫外检测器检测波长２０７ｎｍ。本研究为中药资源开发制剂的质量控制提供了简便、灵敏、准确、快速的分离测定方法。     

Purification of folic acid candidate reference material by preparative high-performance liquid chromatography

An effective process for the purification of folic acid candidate reference material with preparative high-performance liquid chromatography (Pre-HPLC) was developed in this study. During the process of experimental operation, parameters including the influences of mobile phase, flow rate, and injection volume on the purity and yield were investigated, and the optimized conditions were as follows: the mobile phase was acetonitrile and water in a gradient mode with flow rate of 16?mL/min and injection volume of 2.0?mL at concentration of 10?mg/mL. Under the conditions, the purity and yield of folic acid product were up to 99.4% and 21.0%, respectively, whereas the purity of folic acid raw material was 95.2%. The purified folic acid product was characterized by LC–MS, HPLC, Karl Fischer coulometer, and quantitative nuclear magnetic resonance (qNMR). Results proved that the main component of the product was folic acid and the purities determined by HPLC and qNMR were consistent. Two impurities including N-(4-aminobenzoyl)-L-glutamic acid and pteroic acid were further quantified by LC–MS. Compared with the recrystallization approach, the purity of folic acid obtained by Pre-HPLC increased from 98.2% to 99.4%.     

川西獐牙菜与抱茎獐牙菜中GFDA2酮的高效液相色谱分析

采用反相高效液相色谱法同时分离和测定了龙胆科獐牙菜属的川西獐牙菜和抱茎獐牙菜中几种GFDA2酮的含量。色谱柱为Kromasil C 18 （250 mm×4.60 mm i.d., 5 μ m）,流动相为甲醇 0.1%的磷酸水溶液（体积比为 73∶27 ）,流速1 mL/min ,检测波长260 nm,柱温20 ℃。实验结果表明,该方法具有很好的线性关系与精密度,方法简单、准确、实用性强。     

液相色谱-串联质谱法同时测定棉花中乙烯利、噻苯隆和敌草隆药物的残留量

建立了液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定棉花中乙烯利、噻苯隆和敌草隆等植物生长调节剂残留的方法。用甲醇-水振摇提取棉花中的这3种农药,液相色谱-串联质谱测定,负离子扫描方式,多反应监测(MRM),每种农药各两对离子进行定性、定量分析。乙烯利和敌草隆在0~10 μg/L、噻苯隆在0~1 μg/L范围内相关系数(r)均大于0.999。乙烯利和敌草隆的定量限(LOQ)均为40 μg/kg,噻苯隆为4 μg/kg。分别以各个药物的LOQ、2LOQ和4LOQ浓度水平进行加标回收试验,回收率范围为89.4%~100.2%,相对标准偏差(RSD)为5.7%~11.5%。该方法简便、快速、准确,各项技术指标满足国内外法规的要求,可用于棉花样品中乙烯利、噻苯隆和敌草隆的定性、定量检测。     

制备型高效液相色谱法制备纯化3种辣椒素单体

利用制备型反相高效液相色谱法从辣椒素类物质中制备了3种辣椒素单体。在PRC-ODS色谱柱(250 mm×21.5 mm,13 μm)上,以甲 醇-水(体积比为70∶30)为流动相,流速为15 mL/min,采用等度洗脱方式,从80%的辣椒素类物质中制备了3种辣椒素单体。经核磁共振 氢谱(1H NMR)及电子轰击离子源质谱(EI-MS)分析,确认它们分别为降二氢辣椒素、辣椒素和二氢辣椒素,收率分别为60.1%,58.9%和 72.3%。高效液相色谱分析表明所制备的3种化合物的纯度分别达到了98.12%,99.93%及100.7%。     

亲水作用色谱法测定组织中全基因组DNA甲基化水平

建立了亲水作用色谱(HILIC)测定组织中全基因组DNA甲基化水平的方法。采用苯酚-氯仿提取组织中的DNA,提取的DNA用88%甲酸在140 ℃下裂解,经N2吹干后,加乙腈-水(9:1, v/v)溶解,用Waters BEH HILIC柱进行分离,在277 nm波长下检测胞嘧啶(Cyt)及5-甲基胞嘧啶(5-mCyt)含量。结果表明,以乙腈-10 mmol/L甲酸铵溶液(94:6, v/v)为流动相,流速为0.5 mL/min, Cyt与5-mCyt分离较好,保留时间分别为2.6与3.1 min。胞嘧啶的线性范围为1～900 μmol/L,相关系数为0.9999; 5-甲基胞嘧啶的线性范围为1～64 μmol/L,相关系数为0.9998。胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的检出限为54 nmol/L(柱中为0.54 pmol),定量限为250 nmol/L(柱中为2.5 pmol);在5～900 μmol/L的添加水平下,胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的平均加标回收率为94.7%～100.5%,相对标准偏差小于1.48%。用该方法检测了结肠癌组织中DNA甲基化水平,结果显示该癌组织中全基因组的DNA甲基化均值为4.0%。该方法快速、简单,稳定性好,灵敏度较高,能满足全基因组DNA甲基化的检测要求。