屎肠球菌WEFA23拮抗单核增生李斯特菌感染及免疫调节作用

阐明屎肠球菌WEFA23对单核增生李斯特菌感染的影响及免疫调节作用。通过对BALB/c小鼠连续灌胃单核增生李斯特菌4d(109 CFU·d-1)构建感染模型,再连续灌胃8d屎肠球菌WEFA23(109 CFU·d-1),分别于实验第8d和第13d取样,分析单核增生李斯特菌在小鼠体内的定植、小鼠血清指标、组织病理及炎症因子水平。屎肠球菌WEFA23能够提高小鼠存活率,显著抑制单核增生李斯特菌在小鼠肝脏、脾脏、回肠、盲肠和结肠的定植,降低血清丙氨酸氨基转移酶和血清总胆汁酸含量。病理切片分析表明,屎肠球菌WEFA23对单核增生李斯特菌感染引起的肝炎及胃粘膜损伤有明显的缓解作用。同时,屎肠球菌WEFA23能够显著抑制炎症因子IFN-γ,IL-1β的表达。屎肠球菌WEFA23能够有效抑制单核增生李斯特菌的定植,缓解肝炎,增强宿主免疫应答,具有潜在的应用价值。     

乌骨鸡黑色素的体外抗氧化活性及其对人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用

通过测定乌骨鸡黑色素对DPPH自由基、超氧自由基和羟基自由基清除率,研究乌骨鸡黑色素的体外抗氧化能力,同时建立H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞氧化损伤模型,MTT法测定HUVEC细胞存活率,试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力,研究乌骨鸡黑色素对HUVEC细胞氧化损伤的保护作用。结果表明:乌骨鸡黑色素清除DPPH自由基、超氧自由基和羟基自由基的IC50值分别为0.18,0.40,2.37 mg·mL~(-1)。乌骨鸡黑色素可降低H_2O_2诱导损伤的HUVEC细胞LDH漏出量和MDA含量,提高SOD活性,并呈一定浓度依赖性。因此,乌骨鸡黑色素具有一定的体外抗氧化活性,可保护H_2O_2诱导的HUVEC细胞氧化损伤。     

乳酸菌发酵铁皮石斛活性成分与抗氧化功能动态分析

采用植物乳杆菌(植)、嗜酸乳杆菌(嗜)、副干酪乳杆菌(副)进行两两混菌发酵制备清洁标签铁皮石斛发酵汁,比例均为1:1。分析72 h发酵过程中铁皮石斛汁的活菌数、pH、总糖、总酚、抗氧化能力的动态变化以及活性成分与抗氧化能力的相关性。结果表明,3种混菌均能在发酵铁皮石斛汁中良好生长,其中活菌数最高的一组是嗜+副,活菌数为8.72 lg(CFU/mL)。对多糖消耗最少的是嗜+副,比初始值降低了24.89%,其次是植+副40.72%和植+嗜42.31%。总酚在发酵前期随着发酵时间的增加而不断增加,在发酵后期出现下降趋势,其中嗜+副对多酚的增幅最大,提高了23.58%。经过乳酸菌发酵后,铁皮石斛汁对DPPH自由基的清除能力影响最大,嗜+副的增幅达到92.32%;同时对羟基自由基和ABTS自由基的清除能力也有较高的提升,其中植+副对ABTS自由基的清除能力提高最多(达41.42%),嗜+副对羟基自由基的清除能力提高最多(达32.73%)。相关性分析中发酵液的总酚含量与自由基清除率显著正相关,在抗氧化能力中发挥主要作用。研究表明,乳酸菌发酵能进一步提升铁皮石斛品质,提高相关活性成分和抗氧化功能。     

特色鱼肉发酵香肠的制备及功能性研究

利用分离自新疆酸马奶的发酵乳杆菌RC1、植物乳杆菌RC4制备直投式发酵剂, 制作特色风味鲫鱼发酵香肠, 测定其游离脂肪酸、游离氨基酸含量, 并对其血管紧张素转换酶(Angiotensin Converting Enzyme, ACE)抑制率、抗氧化活性、抑癌率进行了研究. 结果表明: 当发酵剂接种量为3%(V/V), 37℃发酵5h, 65℃烘烤30min, 鱼肉发酵香肠口感较佳, 表面鲜亮, 肉质细腻, 有特殊香味. 发酵香肠组织破碎液的游离脂肪酸含量为15.43mmol?hg-1, 游离氨基酸为43.94 mg?hg-1; 其ACE抑制率为78.18%, 抗氧化性能的?O2-自由基清除率、?OH自由基清除率、DPPH清除率分别为30.97%、53.24%和62.75%; 以上指标均高于自然发酵的对照组. 另外, 上述鱼肉发酵香肠组织破碎液稀释1倍后对乳腺癌细胞的抑癌率高达68.60%.     

高温胁迫下不同龙须菜品系抗氧化能力的比较

以龙须菜耐高温新材料07-2、龙须菜良种981及野生型龙须菜3个品系为材料,研究在不同温度条件下(24、28、32℃)其总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化物酶(POD)的活性变化,及抗坏血酸(维生素C)、维生素E、可溶性蛋白和丙二醛(MDA)的含量变化.结果表明:高温胁迫条件下,981和07-2的总抗氧化能力均高于野生型,28℃时981上升幅度比野生型高102.35%,07-2比野生型高18.86%;32℃时981比野生型上升幅度高17.87%,07-2则比野生型高73.52%.高温胁迫条件下,无论是酶促抗氧化系统还是非酶促抗氧化系统981和07-2都不同程度地优于野生型.可见,高温胁迫条件下981和07-2与野生型相比具有更强的清除活性氧的能力,表明抗氧化活性指标与龙须菜耐热性有相关性.     

三株乳酸菌的鉴定及益生性能

从泡菜中分离得到3株乳酸菌,经形态学、生理生化和分子生物学鉴定为:植物乳杆菌(NCU001210)、乳酸乳球菌(NCU036015)和肠膜明串珠菌(NCU018046),并对其耐酸、耐胆盐能力、抑菌能力和黏附性能进行了研究。结果表明:3株乳酸菌在pH 3.0下孵育3 h,存活率均在85%以上;胆盐浓度为0.1%时,孵育4 h后3株乳酸菌的存活率均高于83%;3株乳酸菌在pH 3.0的胃液中孵育3 h存活率均在87%以上,在pH 8.0的肠液中孵育8 h,存活率均在90%以上;3株乳酸菌的发酵上清液对7种常见病原菌有一定的抑制作用;3株乳酸菌对Caco-2细胞的黏附率分别为3.4,34.1和11.2 CFU·cell~(-1)。可见3株乳酸菌具有较好的耐酸耐胆盐、抑菌和黏附能力,可以作为潜在的益生菌在发酵食品中应用。     

罗伊氏乳杆菌NCU801对病原菌的粘附抑制性能

采用选择性平板计数法,考察罗伊氏乳杆菌NCU801活菌悬液、死菌悬液以及发酵上清液对大肠杆菌CMCC44496和金黄色葡萄球菌26003粘附Caco-2细胞的影响。结果表明:在竞争试验、排斥试验和置换试验中,罗伊氏乳杆菌NCU801活菌悬液和死菌悬液均能抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的粘附;活菌悬液比死菌悬液抑制效果更显著,其中最显著的是活菌悬液对大肠杆菌排斥抑制粘附,粘附抑制率达到(86.8±4.5)%;而发酵上清液在竞争实验中最显著,其次是置换试验,而在排斥实验中对病原菌无影响,说明发酵上清液中的细菌素能够杀死未粘附和已粘附的病原菌。更多还原     

羟丙基壳聚糖接枝丝素肽的合成及其性能

以转谷氨酰胺酶为催化剂,在水相条件下将丝素肽(SFP)接枝到羟丙基壳聚糖(HPCS)分子链上制备了一系列不同取代度的羟丙基壳聚糖-丝素肽(HPCS-SFP),采用Fourier变换红外光谱(FT-IR)表征其结构,通过单因素实验法分别探究反应温度、反应时间、反应底物质量比对HPCS-SFP取代度的影响,并考察了不同取代度HPCS-SFP的性能。实验结果表明,随着取代度的增加,HPCS-SFP清除DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)自由基和羟基自由基的能力增强,说明丝素肽的引入提高了抗氧化性能;吸湿保湿性能也随着取代度的增加而提高;同时,HPCS-SFP还具有良好的细胞相容性。     

一种池蝶蚌多糖的分离纯化、表征特性及体外抗氧化活性

首次从淡水育珠贝类池蝶蚌中得到多糖组分,探讨了相关提取工艺、理化特性以及体外抗氧化活性。Sevag工艺重复5次游离蛋白清除效果最佳,粗多糖经sevag纯化得率达到20.8%;通过离子交换树脂(DEAE-52)及葡聚糖凝胶柱层析(Sephacryl S-300)分离纯化得到池蝶蚌多糖(HSP-1),纯度达到97.5%;测定HSP-1的部分理化特性,测得其分子量为2 204Da,其单糖组成由64.8%的葡萄糖、17.4%的阿拉伯糖以及17.8%的葡糖醛酸组成;抗氧化活性测定结果表明,HSP-1对于DPPH、超氧自由基、羟自由基的最大清除率分别是62.16%,58.65%和45.21%。根据结果 HSP-1具有明显的抗氧化能力。     

胺乙基壳聚糖接枝胶原蛋白肽的制备及其性能

2-氯乙胺盐酸盐化学改性壳聚糖制备的胺乙基壳聚糖(AECS),通过转谷氨酰胺酶催化与胶原蛋白肽(COP)接枝得到胺乙基壳聚糖-胶原蛋白肽(AECS-COP).采用单因素实验法得到AECS的最优工艺条件为:反应温度为80℃,反应时间为24h,2-氯乙胺盐酸盐与壳聚糖的质量比为2;得到AECS-COP的最优工艺条件为:反应温度40℃,反应时间1.2h,COP与AECS的质量比为1.2,转谷氨酰胺酶与AECS的质量比为0.13,该条件下的最大取代度为0.648.抗氧化实验和还原能力实验显示,AECS-COP具有很好的自由基清除能力和还原能力,且自由基清除能力和还原能力随其浓度和取代度的增加而增强.细胞实验数据表明,在0~1.0mg/L浓度范围内,AECSCOP的成纤维细胞增殖率随着浓度增加先增大后减小;在取代度为0~0.648范围内,AECS-COP的成纤维细胞增殖率随着取代度的增加而增大.     

Pb2+胁迫对草鱼过氧化氢酶和髓过氧化物酶的影响

摘要:铅及其化合物是水体中常见的重金属污染源,会对鱼类产生巨大的危害.为了研究铅及其化合物对草鱼血清的抗氧化能力的影响,本文分别用不同浓度的Pb2+溶液处理草鱼,探究草鱼血清中过氧化氢(H2O2)含量的变化以及与草鱼血清中过氧化氢酶(CAT)和髓过氧化物酶(MPO)活性的关系.结果表明,低浓度的Pb2+对草鱼血清中H2O2具有刺激作用,其含量随着Pb2+浓度的增加而升高,当Pb2浓度为0.25 mmol·L-1时达到最高值.与H2O2含量变化相反,草鱼血清中CAT和MPO的活性随Pb2+浓度的增高而降低.在0.01mmol·L-1Pb2+作用时,CAT在48h时活力最强,以后逐渐衰减;而MPO的活力普遍增强,在72h最强,并在96h后维持较强的活力.在高浓度(0.25 mmol· L-1)Pb2+作用时,CAT和MPO活性是受抑制的,其中CAT在48 h最低,然后酶活逐渐恢复,96h时达到正常水平;MPO活力一直没有恢复,在72 h时活力最低.     

鸡源凝结芽孢杆菌的筛选鉴定及益生性能评价

凝结芽孢杆菌作为产芽孢的乳酸菌，其抗逆性和益生作用备受关注。为获得优良凝结芽孢杆菌菌种，本研究通过热处理从芦花鸡粪便中分离鉴定出22株潜在优良的凝结芽孢杆菌，并对其抗逆性及益生性能进行评价，结果表明：在高温(90℃)、酸(pH=2.0)和胆盐(0.5%)条件下，菌株NCUBCG003、NCUBCG004和NCUBCG014存活率达85.0%以上。通过主成分分析法可知，这三株凝结芽孢杆菌在高温和胃肠道环境下的综合耐受性强于其他凝结芽孢杆菌；其次，菌株NCUBCG003、NCUBCG004和NCUBCG014有较高的乳酸产量和胆固醇降解能力，乳酸产量达5.0 g·L-1以上，胆固醇去除率可达50.0%;最后，凝结芽孢杆菌有一定的抗氧化活力，特别是菌株NCUBCG003的羟自由基清除能力可达64.03 U·mL-1,DPPH自由基清除率可达76.57%,而菌株NCUBCG014总抗氧化能力最突出，相当于3.52mM的FeSO4溶液。综上可知，菌株NCUBCG003、NCUBCG004、NCUBCG014综合益生性能强于其他凝结芽孢杆菌，且安全可靠，具备在人和动物体内发挥益生作用的潜力，可作为优良微生物菌种资源，为凝结芽孢杆菌的工业化生产和应用奠定基础。     

氯离子介导的白藜芦醇对心肌细胞缺氧复氧损伤保护作用

以H9c2心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤为模型,从细胞水平探讨白藜芦醇抗心肌急性损伤作用与细胞内Cl-变化的关系,以进一步阐明白藜芦醇的心肌保护作用机制.实验结果显示白藜芦醇能有效减轻A/R对心肌细胞的损害,表现为乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸磷酸激酶(CPK)活性降低,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)的抗氧化活性升高和脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量减少,细胞存活率明显升高;MQAE荧光分光光度计法测定心肌细胞内Cl-浓度,发现白藜芦醇亦能显著延缓A/R引起的心肌细胞内Cl-浓度的升高.白藜芦醇对Cl-浓度动态平衡的调节在其心肌保护作用中发挥重要作用.     

靶向二肽基肽酶维药体外筛选模型的建立及应用

二肽基肽酶IV（dipeptidyl peptidaseIV,DPPIV）是治疗Ⅱ型糖尿病的新靶点,糖依赖性胰岛素释放肽和肠促胰岛素胰高血糖素样肽-1在体内有促进胰岛β细胞分泌胰岛素,胰岛素的生物合成,β细胞的生长并抑制其凋亡和抑制血糖升高等功能．二肽基肽酶Ⅳ可快速降解糖依赖性胰岛素释放肽和肠促胰岛素胰高血糖素样肽-1,使其失去生物活性．本实验利用Caco-2细胞中所得到的二肽基肽酶IV,优化酶活筛选体系．确定了二肽基肽酶Ⅳ最适底物Gly-Pro-pNA浓度为0.064 mg/mL、反应温度37℃、反应时间30 min和竞争性抑制剂Ile-Pro-Ile浓度0.68 mmol/L,从而建立了靶向二肽基肽酶Ⅳ的快速筛选体系．应用该模型,对18种维药提取物进行了筛选．本研究结果将为维药的进一步开发和利用提供了理论依据.     

虎斑乌贼喷墨对其生长及存活的影响

为探究虎斑乌贼(Sepia pharaonis)喷墨对其行为、生长、存活及酶活的影响, 采用单因子试验法, 进行了喷墨虎斑乌贼(喷墨组)和未喷墨虎斑乌贼(对照组)的养殖比较试验, 试验时间30d. 研究结果表明, 虎斑乌贼喷墨后会导致其体色泛白、活力下降, 严重的会导致死亡; 养殖30d后,对照组虎斑乌贼的存活率、增重率和特定生长率均显著高于喷墨组(P<0.05); 特定生长率和增重率在试验时间≤10d时对照组显著高于喷墨组(P<0.05), 随着养殖时间延长, 2组无显著差异(P> 0.05); 喷墨组的抗氧化能力包括超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量均显著高于对照组(P<0.05), 但过氧化氢酶(CAT)却显著低于对照组(P<0.05); 喷墨组的代谢酶包括谷丙转氨酶(GPT)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性均显著高于对照组(P<0.05), 但酸性磷酸酶(ACP)的活性却显著低于对照组(P<0.05). 试验表明, 虎斑乌贼喷墨不仅会导致其生长缓慢、存活率下降, 并且会影响其体内相关酶的活性.     

新型双功能谷胱甘肽合成酶的真核和原核表达

通过裂解无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)菌体细胞得到基因组DNA。根据GenBank上已发表的无乳链球菌(菌种编号ATCC13813)新型双功能谷胱甘肽合成酶基因(gshF)的核酸序列与2种不同表达载体多克隆位点序列,分别设计引物F₁、R₁和F₂、R₂,再以总DNA为模板,经过特异性PCR扩增出长度约为2 200 bp的目的基因。随后分别对目的基因gshF和2种表达载体进行双酶切、连接等操作,得到表达载体pPIC9K-gshF与pET-gshF。用Sal I线性化表达载体pPIC9K-gshF后电转至毕赤酵母GS115中。经MD平板筛选重组子、菌落PCR鉴定阳性菌株、G418抗性梯度平板筛选多拷贝菌株,最终在4.0 mg·mL^-1 G418抗性平板上筛选出阳性菌株。用甲醇终浓度为2%的BMMY培养基诱导该阳性菌株表达,每隔12 h取样并添加甲醇,96 h后离心收集发酵上清,经SDS-PAGE蛋白电泳显示：在85 kDa处出现1条明显蛋白带,大小与预期GshF蛋白一致。重组菌BL21-pET-gshF用IPTG诱导表达,先在37 ℃下培养90 min,再加入IPTG至1 mmol·L^-1后诱导7 h,离心收集表达产物并对重组菌进行超声破碎处理后,进行SDS-PAGE蛋白电泳,同样在85 kDa处有1条蛋白带。采用Bradford法测定2种表达产物上清的蛋白量,其中重组酵母表达上清中蛋白量为0.46 mg·mL^-1,重组大肠杆菌表达产物破壁后的蛋白量为1.46 mg·mL^-1。测定并比较2种不同表达方式所得酶活,发现GshF在毕赤酵母表达中的比酶活仅为14.15 U·mL^-1,经原核表达后比酶活可达62.15 U·mL^-1。