毛细管电泳-激光诱导荧光检测法测定抗癫痫药加巴喷丁

建立了毛细管电泳-激光诱导荧光(CE-LIF)测定抗癫痫药加巴喷丁的方法。加巴喷丁经4-氯-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑(NBD-Cl)衍生化后,采用10 mmol/L硼砂-10 mmol/L十二烷基硫酸钠(pH 9.75)的缓冲体系,加巴喷丁在6 min内实现高效基线分离。方法的线性范围为0.01～10 mg/L(r=0.9997),检出限为2 μg/L,定量限为10 μg/L。方法的平均回收率为100.2%～103.1%,相对标准偏差为0.15%～1.00%(n=3)。该方法灵敏、快速、准确和可靠,已用于加巴喷丁药物制剂的质量控制。     

咔唑-9-乙基氯甲酸酯柱前衍生氨基酸胶束电动色谱分离

采用一种新型紫外、荧光衍生试剂咔唑-9-乙基氯甲酸酯对9种氨基酸(丝氨酸、苏氨酸、甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸)进行柱前衍生,采用胶束电动色谱模式在14 min内完成分离。分离条件：以pH 9.0的 20 mmol/L硼酸盐-30 mmol/L十二烷基硫酸钠(SDS)溶液（含3%(体积分数)乙腈)为缓冲溶液,柱温25 ℃,分离电压18 kV,紫外检测波长214 nm。该方法的线性范围为0.025~0.25 mmol/L,检出限为2.15~2.46 μmol/L。     

离子对反相液相色谱-蒸发光散射检测法分析钻井液添加剂“小阳离子”的有效含量

建立了离子对反相液相色谱-蒸发光散射检测器测定钻井液添加剂“小阳离子”2,3-环氧丙基三甲基氯化铵(EPTMAC)和3-氯-2-羟丙基三甲基氯化铵(CHPTMAC)有效含量的方法。以Atlantis T3柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm)为分析柱,流动相为甲醇-5 mmol/L七氟丁酸水溶液(10:90, v/v),流速为1 mL/min。蒸发光散射检测器漂移管的温度为50 ℃,气体压力为206.7 kPa(30 psi)。样品用超纯水稀释过滤后直接进样分析,10 min内EPTMAC和CHPTMAC获得分离和检测。采用二阶方程对标准曲线进行拟合,EPTMAC和CHPTMAC校正曲线的相关系数均为0.9995,检出限(S/N=3)分别为13 mg/L和18 mg/L,定量限(S/N=10)分别为45 mg/L和61 mg/L,平均回收率分别为91.2%～98.6%和93.2%～102.3%,相对标准偏差(n=5)分别为1.7%～2.5%和1.2%～1.8%。该方法快速准确,可用于油田钻井液添加剂“小阳离子”的质量控制。     

超高效液相色谱-电喷雾三重四极杆质谱法测定中药中马兜铃酸A和B的含量

利用超高效液相色谱-电喷雾三重四极杆质谱仪建立了中药中马兜铃酸A和B的定性定量分析方法。选取柴胡、生甘草、桔梗、龙胆泻肝丸、消胖丸、减肥茶等14种代表性样品,用甲醇-水(70:30, v/v)溶液加热回流提取,经Oasis MAX固相萃取柱富集净化后,在Eclipse RP HD C18反相柱(150 mm×2.1 mm, 1.8 μm)上进行分离;流动相为5 mmol/L乙酸铵水溶液(pH 7.5)-乙腈(75:25, v/v)。采用电喷雾离子源正离子模式(ESI+)和多反应监测模式(MRM)进行质谱分析。马兜铃酸A和B的线性范围分别为0.5～200 μg/L和1～200 μg/L,相关系数(r2)均大于0.995;检出限(LODs)分别为5 μg/kg和7.5 μg/kg;定量限(LOQs)分别为12.5 μg/kg和25 μg/kg。在100 μg/kg和500 μg/kg添加水平下,马兜铃酸A和B的回收率(n=6)范围分别为60.3%～96.4%和61.3%～94.7%,相对标准偏差均不大于10.2%。该方法灵敏度高,重复性好,操作简便,适用于中药材、饮片及中成药中马兜铃酸A和B的痕量检测。     

毛细管电泳-激光诱导荧光检测法分离检测谷胱甘肽及其构成氨基酸

以4-氯-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑(NBD-Cl)为柱前衍生试剂,建立了一种毛细管电泳-激光诱导荧光直接检测氧化型和还原型谷胱甘肽及其构成氨基酸(谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸)的新方法。经过实验条件的优化,采用25 mmol/L硼砂-20 mmol/L聚氧乙烯月桂醚(Brij-35)-5%乙腈(pH 9.5)的缓冲体系,在柱温为25°C、分离电压为20 kV的条件下,压力进样3447.5 Pa(0.5 psi)×3 s,五种物质在11 min内实现高效基线分离。在该方法下,还原型谷胱甘肽、氧化型谷胱甘肽、谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸的线性范围分别为:1～50μg/mL,1～50μg/mL,0.5～25μg/mL,1～50μg/mL,0.1～20μg/mL;检测限分别为:0.1μg/mL,0.1μg/mL,0.005μg/mL,0.1μg/mL,0.001μg/mL。以还原型谷胱甘肽钠粉针剂为样品,方法的加标回收率为99.5%～110.7%,相对标准偏差为0.26%～3.272%(n=3)。该方法准确、快速、灵敏、检测限低,有望用于样品中氧化型和还原型谷胱甘肽及其构成氨基酸的含量分析。     

高效液相色谱-串联质谱法测定葡萄果实中的乙酰辅酶A

建立了高效液相色谱-三重串联四极杆质谱法(HPLC-MS/MS)测定葡萄果实中重要中间代谢产物乙酰辅酶A的分析方法。样品用纯水提取后离心,经C18固相萃取小柱净化,以5 mmol/L甲酸铵和乙腈（20:80,v/v）为流动相等度洗脱,经C18柱分离后,在电喷雾正离子化(ESI+)模式下,通过多反应监测(MRM)模式进行定性,以n-丙酰辅酶A为内标进行定量。该方法在1～2000 μg/L范围内线性关系良好,相关系数大于0.99,检出限(以信噪比(S/N)为3计)为0.1 μg/L,定量限(以S/N=10计)为0.5 μg/L;添加水平分别为50、500、1000 μg/L的3个样品的加标回收率为82.87%～89.67%,相对标准偏差均小于10%。该方法简便、快速、灵敏,可明显减少乙酰辅酶A在实验过程中的损失,适用于葡萄果实中乙酰辅酶A的检测分析。     

柱前衍生反相离子对高效液相色谱法测定Fe(Ⅱ)

建立了将PDT作为柱前衍生试剂,用反相离子对高效液相色谱法分离和测定Fe(Ⅱ)的新方法.样品经柱前衍生后,以ODS C8色谱柱进行分离,以含60%(体积分数)乙腈、60mmol/L的高氯酸钠和20mmol/L的乙酸-乙酸钠水溶液(pH 4.65)作为流动相,流速为1mL/min,检测波长为295nm,整个分离过程在14min内完成.考察了Fe(Ⅱ)在不同水样中的回收率,当Fe(Ⅱ)的添加量为20μg/L时,其回收率为99%～102%.峰高、峰面积和保留时间的相对标准偏差分别为1.06%、2.87%和0.45%.方法的检出限为0.35μg/L(S/N=3).该法成功应用于环境水样中Fe(Ⅱ)含量的测定.     

柱前衍生-超高效液相色谱法测定鱼卵中的17种氨基酸

建立了一种快速、灵敏的柱前衍生-超高效液相色谱-光电二极管阵列检测器(UPLC-PDA)测定史氏鲟(Acipenser schrenckii)、达氏鳇(Huso dauricus)和小体鲟(Acipenser ruthenus)鱼卵中17种氨基酸含量的方法。采用6.0 mol/L的盐酸水解鱼卵,提取液经低压浓缩、碱性中和,然后以6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯(AQC)为衍生试剂在pH 8.8硼酸盐缓冲溶液中衍生化。采用的色谱分离柱为Waters BEH C18柱(100 mm×2.1 mm, 1.7 μm),流动相为30 mmol/L乙酸铵水溶液(pH 3.5)和乙腈(含0.15%(v/v)甲酸及30 mmol/L乙酸铵),梯度洗脱,流速为0.7 mL/min,在260 nm波长下检测。17种氨基酸在5.0～1000 μmol/L浓度范围内,峰面积与浓度之间的线性关系良好(r2≥0.9950)。以标准加入法测定回收率和相对标准偏差(RSD),在100、500、750 μmol/L的添加水平下,17种氨基酸的平均回收率为75.4%～107.3%, RSD为2.19%～12.3%。以3倍信噪比(S/N＞3)计方法的检出限,17种氨基酸的检出限为0.94～4.04 μmol/L。应用该方法检测了3种鲟鳇鱼鱼卵中的17种氨基酸含量。结果表明,该方法简便、准确、快速、可靠。     

液相色谱-串联质谱法检测畜禽产品中维吉尼亚霉素M1和S1残留

建立了畜禽产品中维吉尼亚霉素M1和S1药物残留检测的液相色谱-串联质谱分析方法。样品以甲醇-乙腈溶液(1:1, v/v)提取,上清液经0.01 mol/L磷酸二氢铵溶液稀释后,Oasis HLB固相萃取小柱净化,Luna C18色谱柱分离,以乙腈和含0.1%(体积分数)甲酸的5 mmol/L乙酸铵水溶液作为流动相进行梯度洗脱,电喷雾正离子模式电离(ESI+),多反应监测(MRM)模式检测,外标法定量。该方法对两物质线性范围均为0.15～10.0 μg/L,相关系数r2均大于0.999;定量下限均为0.25 μg/kg。在不同基质中,0.25、0.50、2.5 μg/kg3个添加水平的平均回收率范围为71.2%～98.4%,精密度范围为3.6%～15.4%。该方法具有快速简便、灵敏度高、准确性强等特点,适用于畜禽产品中维吉尼亚霉素的检测。     

分散液液微萃取-反相液液微萃取-扫集-胶束电动色谱法测定红酒中的3种氯酚类物质

建立了分散液液微萃取（DLLME）-反相液液微萃取（RP-LLME）-扫集-胶束电动色谱富集模型,并用于红酒中五氯酚（PCP）、2,4,6-三氯酚（TCP）和2,4-二氯酚（DCP）3种氯酚的测定。实验考察了两步微萃取的萃取参数对氯酚萃取率的影响和样品分离富集的电泳条件。最佳萃取条件DLLME为：3.5 mL红酒（pH 3.0,120 g/L NaCl）,300 μL正己烷（萃取剂）;RP-LLME为：25 μL 0.16 mol/L NaOH（萃取剂）。最佳电泳条件：25 mmol/L NaH₂PO₄,100 mmol/L十二烷基硫酸钠（SDS）,30%（v/v）乙腈,pH 2.3;分离电压-15 kV;样品基质为80 mmol/L NaH₂PO₄;压力进样20 s×20.67 kPa（3 psi）。PCP和TCP的线性范围为0.5~100 μg/L（r≥0.9910）,DCP的线性范围为1.5~80 μg/L（r=0.9851）。3种分析物的检出限（S/N=3）为0.035~0.114 μg/L,加标回收率为75.2%~104.7%,相对标准偏差≤6.17%。该方法富集倍数高、灵敏度高、重现性好、分析速度快,可为不同样品基质中痕量氯酚污染物及某些弱酸性有机污染物测定提供参考。     

纳米纤维固相萃取-高效液相色谱法测定血浆中的5-羟色胺

基于纳米纤维的富集作用,建立了血浆中5-羟色胺(5-HT)的柱前衍生高效液相色谱-电化学检测(HPLC-ECD)分析方法.用10%(v/v)高氯酸溶液沉淀血浆蛋白,离心后取上清液,用0.1 mol/L 的四苯硼酸钠溶液调节pH值至8.5,加入衍生剂邻苯二甲醛溶液于30 ℃衍生4 min,经纳米纤维固相萃取柱净化富集后,...     

分子印迹固相萃取-高效液相色谱法测定饲料中莱克多巴胺

以莱克多巴胺为模板分子,丙烯酰胺为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂,合成了对莱克多巴胺具有高选择性的分子印迹聚合物。考察了甲醇、乙腈、丙酮和氯仿-甲醇与三乙胺构成致孔剂合成的聚合物性能及其形貌特征。通过正交试验优化的聚合反应配方为: 1.0 mmol莱克多巴胺,4.0 mmol丙烯酰胺,20.0 mmol乙二醇二甲基丙烯酸酯,6.0 mL乙腈-三乙胺(30:1, v/v), 50.0 mg偶氮二异丁腈。建立的基于分子印迹固相萃取-高效液相色谱测定饲料试样中莱克多巴胺的方法,在0.50～100 mg/L质量浓度范围内有良好的线性关系(r=0.9994);饲料试样中1.0、10及100 mg/kg 3个添加水平的莱克多巴胺平均回收率大于80%;批内、批间测定的相对标准偏差小于10%;检出限(信噪比为3)达到0.1 mg/kg。该方法灵敏、可靠,用于饲料等复杂基质中莱克多巴胺检测的效果优于相关标准分析方法。     

Solidified floating organic drop microextraction combined with high performance liquid chromatography for the determination of carbamazepine in human plasma and urine samples

Solidified floating organic drop microextraction (SFODME) in combination with high performance liquid chromatography was used for separation/preconcentration and determination of carbamazepine (CBZ) in human plasma and urine samples. Parameters that affect the extraction efficiency such as the type and volume of extraction solvent, ionic strength, sodium hydroxide concentration, stirring rate, sample volume and extraction time, were investigated and optimized. Under the optimum conditions (extraction solvent, 40 μL of 1-undecanol; sodium hydroxide concentration, 1 mol/L; temperature, 50 ℃; stirring speed, 400 r/min; sample volume, 8 mL; sodium chloride concentration, 3% (w/v) and extraction time, 60 min) the calibration curve was found to be linear in the mass concentration range of 0.4-700.0 μg/L. The limit of detection (LOD) was 0.1 μg/L and the relative standard deviation (RSD) for six replicate extraction and determination of carbamazepine at 100 μg/L level was found to be 4.1%. The method was successfully applied to the determination of CBZ in human plasma and urine samples.     

毛细管电泳-间接紫外检测法测定蜂蜜中的氨基酸

采用毛细管电泳-间接紫外检测法同时分离测定蜂蜜中的赖氨酸、色氨酸、谷氨酸等9种氨基酸。考察了磷酸浓度、进样方式和缓冲液pH对分离效率和重现性的影响。在分离电压为-15 kV、检测波长为220 nm条件下,以含有0.5 mmol/L十六烷基三甲基溴化铵、20 mmol/L烟酸、10%甲醇的10 mmol/L磷酸二氢钠缓冲溶液(pH 10.2)为运行缓冲液,9种组分在11 min内达到基线分离;检出限最低可达到0.3 mg/L;线性范围为1.0~1000 mg/L;日间及日内精密度为0.64%~5.83%。实际样品中除甲硫氨酸外的8种氨基酸的加标回收率为60.00%~118.37%。将该方法应用于不同蜜源植物和产地的蜂蜜样品的测定,在市售的5种蜂蜜中均检测到脯氨酸、丝氨酸和天冬氨酸,而只在荔枝蜜中检测到苏氨酸。该方法可以为蜂蜜的蜜源鉴别及质量评估提供借鉴方法。     

反相高效液相色谱法测定人肌腱中的胶原蛋白

建立了测定人肌腱中胶原蛋白含量的高效液相色谱法。动物肌腱中的胶原蛋白经酸水解后生成包括羟脯氨酸在内的氨基酸混合物,用2,4-二硝基氯苯对水解产物衍生化,然后以0.01 mol/L乙酸钠-乙酸缓冲液(pH 6.0)-乙腈(体积比为80∶20)为流动相,经反相C18柱分离,紫外检测器于360 nm波长处检测来测定羟脯氨酸的含量。羟脯氨酸是胶原蛋白的特异性氨基酸且含量稳定,因而可通过样品中羟脯氨酸的含量来计算胶原蛋白的含量。该方法对羟脯氨酸的检出限为3 μg/L,羟脯氨酸为3 μg/L~100 mg/L时与峰面积的线性关系良好;样品测定的相对标准偏差为1.95%,加标回收率为98.4%~110.8%。对60份人肌腱样品中胶原蛋白的含量进行了测定。所建立的方法灵敏、准确、干扰少,适用于肌腱中胶原蛋白含量的测定。     

高效液相色谱-线性离子阱串联质谱技术用于白酒中甜蜜素测定的确证分析

建立了白酒中甜蜜素的高效液相色谱-线性离子阱串联质谱测定方法。该方法可同时准确定性和定量。样品无需前处理,过膜后直接进样,由C18色谱柱分离,采用多反应监测(MRM)和触发增强子离子扫描模式检测,采集到的MRM数据用于定量测定,同时得到的高质量子离子谱图用于谱图库检索的方法进行定性确证分析。本文采用外标法定量,方法的线性范围为1.320～132.0 μg/L（r=0.9991）;检出限(信噪比为3)为0.1 μg/L;添加水平分别为2.640、26.40、100.0 μg/L的3个样品的加标回收率为96.38%～107.2%,相对标准偏差均小于9%;阳性样品的谱图匹配度均高于92%。该方法简便、准确、高效,适用于白酒中甜蜜素的测定及阳性样品的确证分析。     

高效液相色谱法同时测定血清中的犬尿氨酸和色氨酸

建立了一种能同时检测血清中的犬尿氨酸(kynurenine,Kyn)和色氨酸(tryptophan,Trp)的高效液相色谱-紫外检测法。采用的色谱柱为Symmetry Shield RP-C18柱(150 mm×3.9 mm i.d.,5 μm),流动相为15 mmol/L乙酸钠-乙酸溶液(含2.7%乙腈,pH 3.6),流速为1.0 mL/min,紫外检测波长为225 nm。血清标本经5.0%(体积分数)高氯酸溶液去除蛋白质后取上清液直接进样分析测定。研究结果表明,Kyn保留时间为3.5 min,线性范围为0.098~49 μmol/L,最低检出浓度为0.02 μmol/L,回收率为90.82%~93.45%;Trp保留时间为8.1 min,线性范围为4.9~490 μmol/L,最低检出浓度为0.20 μmol/L,回收率为95.51%~98.67%。Kyn和Trp日内、日间测定的相对标准偏差均小于4%,苯丙氨酸、酪氨酸、5-羟色胺和犬尿喹啉酸等物质对该法均无干扰。该方法简便、快速、稳定、可行,可应用于临床和科研工作。     

Separation of seven fluoroquinolones by microemulsion electrokinetic chromatography and application to ciprofloxacin, lomefloxacin determination in urine

A simple, reliable microemulsion electrokinetic chromatography (MEEKC) method is developed for the simultaneous separation of seven fluoroquinolones (FQs). The best separation is achieved in a carrier electrolyte containing 1% (v/v) heptane, 100 mmol/L sodium dodecyl sulfate (SDS), 10% (v/v) 1-butanol, and 8 mmol/L phosphate-sodium tetraborate buffer at pH 7.30. The proposed method was directly applied to the determination of ciprofloxacin (CPF) and lomefloxacin (LMF) in urine samples of subjects administered either with CPF or LMF.     

毛细管电泳中移动反应界面法富集和检测尿样中的氧化苦参碱

采用建立在移动反应界面理论上的体系进行尿样中氧化苦参碱的富集与定量检测。与传统的毛细管电泳相比,体系中引入了富集缓冲溶液(富集相)和分离缓冲溶液(分离相)。优化的条件如下:样品缓冲溶液为20 mmol/L 甲酸钠(用氨水调节pH至10.70),富集缓冲溶液为40 mmol/L 甲酸-甲酸钠(pH 2.60),分离缓冲溶液为100 mmol/L 甲酸-甲酸钠(pH 4.80);样品相压力进样1.4 kPa×3 min,富集相压力进样1.4 kPa×7 min,紫外检测波长210 nm,电压21 kV。氧化苦参碱在2.2~65 mg/L的质量浓度范围内呈良好的线性关系(r=0.9991),检出限为0.74 mg/L,灵敏度比常规毛细管电泳方法提高约70倍,重现性良好。该方法已经成功地应用于尿样中氧化苦参碱的检测。