去B链羧端七肽胰岛素的制备及结晶

以去B链羧端五肽胰岛素为原料,用羧肽酶-A限制性酶解,制得了去B链羧端七肽胰岛素(DHPI).产物经Sephadex G-50纯化,并经羧端、羧端肽、氨基酸组成分析以及聚丙烯酰胺凝胶板电泳分析.证明得到了纯的DHPI.DHPI在0.05 M柠檬酸缓冲液(pH5.9—6.1,含33％丙酮及少量醋酸锌)中可以结晶,结晶是片状的.用凝胶电泳进一步纯化的DHPI经小白鼠惊厥法测定是没有活力的.     

胰岛素及其类似物与其受体的相互作用

对一些胰岛素B链羧端肽段改变了的类似物与肝细胞及脂肪细胞的受体蛋白结合性质的研究,结果表明,去B链羧端五肽胰岛素与胰岛素有相同的结合能力;去B链羧端六肽胰岛素及B₂₃被D-丙氨酸取代的去B链羧端六肽胰岛素有明显的结合;去B链羧端八肽胰岛素具极微的结合能力;胰岛素A链、促肾上腺皮质素、增血糖素不与胰岛素受体蛋白结合,在此基础上还讨论了B₂₄芳香环参与胰岛素结合部位的可能性,并假设B₁₂,B₁₆,B₂₄,B₂₅疏水平面可能是结合部位的重要内容,而B₂₀—B₂₃U形转折及A₂₁…B₂₂盐键的作用是稳定疏水平面结构,胰岛素与受体的结合类似于胰岛素二体中两个单体的结合。     

去B链羧端五肽胰岛素的结构研究(Ⅰ)——制备及其性质

我们以前的研究工作指出,胰岛素B链羧端肽段在其原发生物学作用中占有重要地位,为此研究一系列B链羧端类似物的结构与功能的关系是有意义的。本文报道了一种改进DPI的制备方法,按此法可获得适宜于单晶培养用的DPI制剂。 其结晶制剂受体结合活力为原胰岛素的88％,其鼠惊厥活力是20国际单位/毫克,在Zn⁺⁺存在下和胰岛素有免疫交叉反应。     

去B链羧端五肽胰岛素的结构研究(Ⅳ)——用荧光探针1,8-TNS对疏水区的初步研究

1,8-TNS与溶剂极性和粘度关系的研究,证明正如它们的位置异构物2,6-TNS一样具有荧光疏水探针的性能.我们用此探针研究并比较了胰岛素、去B链羧端五肽胰岛素(DPI)、牛血浆白蛋白、溶菌酶、卵白蛋白的疏水表面性质。 结果表明DPI和胰岛素相似,存在一个小而确定的疏水区. 提示B链羧端五肽的去除并未严重改变其与受体结合有关的疏水面结构。在生理pH值其疏水面暴露较胰岛素略大,但其疏水面构象稳定性较胰岛素弱。随pH升高,分子局部构象可能发生扭动,疏水面构象遭到一定程度的破坏。与胰岛素相比,DPI结构较胰岛素松散,稳定性亦下降。     

胰岛素结构与功能关系的研究——去B链羧端六肽胰岛素类似物的制备及它们的生物活性

以DOI为原料,合成了一些DHI的类似物。生物活力说明,DHI的B₂₃甘氨酸为含疏水侧链的L-型氨基酸Ala,Val和Phe取代时,所得DHI类似物不表现胰岛素活力。B₂₃以L-型Asn或Ser取代时,出现较弱的胰岛素活力;而以D-型氨基酸Ala,Val取代时,具5—10％的活力(指粗产物活力,下同);D-Phe取代时,具约5％的生物活力;D-Ser取代时,具2％的生物活力。DHI的B₂₄苯丙氨酸残基以Arg,Glu或Ser取代后不表现胰岛素活力。以Tyr或苯甲胺取代时,具2％左右的活力。但DOI-Gly·Gly·Phe具约2％的胰岛素活力,而DOI-Gly·Gly-D-Phe却无活力。此结果说明,B₂₄或B₂₅的一个芳香环是胰岛素活力所必需的。联系胰岛素晶体结构的研究结果,本文还初步讨论了导致上述现象的分子结构的内在原因。     

不同种属(鸡与蛇)胰岛素的研究

本文研究了一种新的吸附法,它可以用来制备不同种属的胰岛素。目前,主要研究鸡与蛇的胰岛素,在所有已研究过的胰岛素中,只有鸡胰岛素据称有较高的生物活力。但是不同实验室所得的结果很不相同。本文得到了鸡胰岛素的典型三方结晶,并测定了整体活力,结果与猪胰岛素无显著差别。从无毒蛇Zaocys dhumnades dhum-nades(Cantor)的胰脏中制备了蛇胰岛素,它与过去报道的响尾蛇胰岛素不同。它的十二面体结晶与脱锌猪胰岛素很相似。     

去B链羧端五肽胰岛素的结构研究(Ⅴ)——高分辨核磁共振研究

本文初步研究了胰岛素和DPI的250MHz核磁共振(NMR)谱,发现它们之间存在着差异。这说明在溶液中胰岛素分子羧端五肽的切除,能引起它的局部构象的变化,这种变化看来不会影响胰岛索分子的生物活性。许多研究表明,胰岛素分子在溶液中存在着解离聚合平衡,聚合状态与溶液浓度、pH有密切关系.如果改变DPI和胰岛素溶液的浓度及pH,前者波谱变化不明显,后者随溶液浓度及pH增加,胰岛素波谱中的缬氮酸、亮氨酸、异亮氨酸CH_3与芳族环质子共振峰均加宽,提示在无Zn~(++)条件下,DPI在溶液中不存在解离聚合平衡,而以单体形式存在。     

胰岛素作用原理的研究——具有胰岛素受体活性的小分子蛋白的分离和测定

用1％DOC(脱氧胆酸钠)溶解的膜蛋白,经Sephgarose4B柱层析,在外水体积出现合有胰岛素受体活性的蛋白峰。这个单一的蛋白峰经6M盐酸胍处理后,重过用1M盐酸胍平衡的Sepharose 4B柱,可分出四个280毫微米的吸收峰,除了在外水体积的第一个蛋白峰有结合胰岛素活性外,第四个吸收峰也有明显的结合活力。用凝胶电泳也证实了这个小分子活性单位的存在.经分子筛测定,小分子的活性单位分子量约5万道尔顿.     

乌风蛇胰岛素的一级结构

本文用LKB固相顺序仪测定了乌风蛇胰岛素的一级结构。蛇胰岛素的一级结构相当特殊,如B5 Arg,B29 Arg,B16 phe,B18 Ile和 B25 Tyr在已知胰岛素的结构中都比较罕见。但是和响尾蛇胰岛素很相似,所不同者仅是A15位在乌风蛇为谷氨酸,而在响尾蛇为谷氨酰胺,同时B30在前者为苏氨酸,而后者为丝氨酸。这些差别与乌风蛇胰岛素的酸性较强以及与氨基酸组成分析中苏氨酸和丝氨酸的含量是一致的。乌风蛇的B10仍然是组氨酸。文中还对乌风蛇胰岛素特殊晶形的形成进行了讨论。     

胰岛素及其类似物的圆二色性

本文研究了胰岛素与其类似物DPI,DHPI,DOI及工字肽的紫外圆二色性。胰岛素的CD谱呈双负峰,但[θ]₂₀₇负值偏大。类似物的谱与此相似。[θ]₂₂₂的负值从DPI到DOI逐个下降;[θ]₂₀₇与胰岛素相同,极值稍蓝移。从工字肽的谱设想,其中有一结构使胰岛素的[θ]₂₀₇负值偏大。 从CD谱看,类似物的构象相似,但比胰岛素松散。这就支持了胰岛素中受体结合部位的设想。 从表面活性剂对这些分子的CD谱的影响看,它对n-π^*和π-π^*跃迁的影响不同。     

结晶猪、牛B1色氨酸胰岛素的制备及性质

猪、牛胰岛素经与MSC·ONSu选择性反应.随后Edman降解,和与MSC·Trp·ONp缩合,去保护制备了二个种属的[Trp]^B₁胰岛素类似物. 经醋酸纤维素电泳.氨基酸组成分析,UV吸收光谱和N-端分析鉴定,确定它们是均一的[Trp]^B₁胰岛素.鼠惊厥分析显示猪、牛[Trp]^B₁胰岛素的生物活力分别为18国际单位/毫克和17国际单位/毫克.分别相当于天然胰岛素的70％.     

血清IL-1β、IL-6、IL-18水平与2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的关系

@@@@目的探讨白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（ IL-6）、白细胞介素18（IL-18）与2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的关系。方法30只SPF级Wistar大鼠随机分为对照组（15只）和糖尿病组（15只）。高脂饲料配合小剂量链脲佐菌素30mg/kg静脉注射建立2型糖尿病大鼠模型。4周后观测大鼠空腹血糖（FBG）、血清胰岛素（FINS）及血清IL-1β、IL-6、IL-18水平,并计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）。结果4周后糖尿病组大鼠FBG、FINS和HOMA-IR均高于对照组（均P＜0.01）;且血清IL-1β、IL-6、IL-18水平均高于对照组（均P＜0.01）。结论血清IL-1β、IL-6、IL-18水平升高与2型糖尿病胰岛素抵抗的发生有关;IL-1β、IL-6、IL-18的同时升高可间接反映2型糖尿病及胰岛素抵抗的病情变化。     

胰岛素水溶性受体的分离及其特性

用低浓度螯合剂乙二胺四乙酸(EDTA)去除肝细胞质膜的二价阳离子,继之以正丁醇抽提膜脂类,使胰岛素受体蛋白和其他一些膜蛋白进入水相,我们从肝脏得到不含任何去污剂的胰岛素受体蛋白.这样制备的胰岛素受体在Sephade xG-200凝胶层折中不滞留,经300,000×g超速离心70分钟不沉淀,且能通过0.22微米的微孔滤膜,从而证明它是完全水溶性的。胰岛素水溶性受体与胰岛素结合的解离常数Kd=3.6×10^-9M(24℃),该受体的等电点为pH 4.1,荧光疏水探针ANS不影响胰岛素与受体的结合,进一步证明在胰岛素与受体结合中,除疏水相互作用外,可能还存在其他的作用力。     

胰岛素水溶性受体和膜蛋白的解聚态

胰岛素水溶性受体蛋白和大部分水溶性膜蛋白,在较高浓度的螯合剂或电介质溶液中很易发生可逆的解聚,解聚分子的Stoke半径在22左右,沉降系数1.8—2.8S,据此,解聚的大部分膜蛋白(包括胰岛素受体蛋白)的分子量当在15,000—30,000道尔顿之间,解聚的胰岛素受体仍保留与胰岛素特异结合的活性。     

矩阵张量积不可约性的表征

为矩阵A与B的张量积,记为C=A(?)B。 定义Ⅰ设A=(a_(ij))∈C~(n×n),B=(b_(ij))∈C~(m×m)。若A在某位置(f,f)之非零元素链中有一个含r_1个A中的非零元:A(f,f)=a_(fe_1)a_((e_1)(e_2)…a_(e_r))(?),B在某位置(t,t)之非零元素链中有一个含r_2个B中的非零元:B(t,t)=b_((ts_1))b_((s_1s_2))…bs_(s_r_2-1)l,且(r_1,r_2)=1,1≤f≤n,1≤r≤m,则称A,B满足弱链条件。     

三角形中角的正余弦关系

命题在△ABC中,"sinA相似文献   

胰岛素晶体结构的研究——1.8A分辨率电子密度图的计算

前文曾报道,我们受我国人工合成胰岛素胜利成功的鼓舞,在无产阶级文化大革命的有力推动下,从1967年夏天开始了用X射线衍射法测定胰岛素空间结构的研究。我们运用多对同晶置换加反常散射法解决     

函数的对称性与周期之间的关系

(一)设f(x)的定义域为R,仔细研究A、B、C之间的关系A:f(2 X)=f(2-X)B:y=f(X)为偶函数     

Fuzzy关系的_(αR)分解

本文讨论Fuzzy关系的_(αR)分解问题,即对给定的Fuzzy关系R∈F(X×Y),讨论是否存在两个Fuzzy集A∈F(X)和B∈F(Y)使R=A_(αR)B.其中,A(x)_(αR)B(y)={M_R,A(x)≤B(y),B(y),否则,MR为R的最大元。本文给出Fuzzy关系可_(αR)分解的两个充要条件,对可_(αR)分解的Fuzzy关系,给出了所有使R=A_(αR)B成立的A与B的解集。     

外三角范畴的同调系统

在外三角范畴中,本文引入同调系统Θ(又称为Θ-系统)的概念,此概念统一了模范畴的分层系统和三角范畴的同调系统.本文证明了一个Θ-系统能够唯一地确定一个Θ-投射系统.给定一个Θ-投射系统(Θ, Q,≤),本文也证明了滤链多样性不依赖于滤链的选择,建立了所有Θ-滤对象构成的子范畴■(Θ)和模范畴mod(B)中的所有?-好模构成的子范畴之间的同构,其中B是标准分层代数.