结晶猪、牛B1色氨酸胰岛素的制备及性质

猪、牛胰岛素经与MSC·ONSu选择性反应.随后Edman降解,和与MSC·Trp·ONp缩合,去保护制备了二个种属的[Trp]^B₁胰岛素类似物. 经醋酸纤维素电泳.氨基酸组成分析,UV吸收光谱和N-端分析鉴定,确定它们是均一的[Trp]^B₁胰岛素.鼠惊厥分析显示猪、牛[Trp]^B₁胰岛素的生物活力分别为18国际单位/毫克和17国际单位/毫克.分别相当于天然胰岛素的70％.     

去B链羧端六肽(B25—30)胰岛素初步结晶学研究

去B链羧端六肽(B25—30)胰岛索,采用悬挂液滴气相扩散法,在柠檬酸纳缓冲液pH 5.8;含有丙酮和氯化钠体系中,获得可供X射线晶体结构分析用的单晶体,其衍射分辨率在1.5以上,晶体外形为三角形。属于单斜晶系,空间群为C2,晶胞参数为α=42.60,b=37.87,c=27.118,β=125.35°。其结构分析工作正在进行中。     

胰岛素结构与功能关系的研究——去B链羧端六肽胰岛素类似物的制备及它们的生物活性

以DOI为原料,合成了一些DHI的类似物。生物活力说明,DHI的B₂₃甘氨酸为含疏水侧链的L-型氨基酸Ala,Val和Phe取代时,所得DHI类似物不表现胰岛素活力。B₂₃以L-型Asn或Ser取代时,出现较弱的胰岛素活力;而以D-型氨基酸Ala,Val取代时,具5—10％的活力(指粗产物活力,下同);D-Phe取代时,具约5％的生物活力;D-Ser取代时,具2％的生物活力。DHI的B₂₄苯丙氨酸残基以Arg,Glu或Ser取代后不表现胰岛素活力。以Tyr或苯甲胺取代时,具2％左右的活力。但DOI-Gly·Gly·Phe具约2％的胰岛素活力,而DOI-Gly·Gly-D-Phe却无活力。此结果说明,B₂₄或B₂₅的一个芳香环是胰岛素活力所必需的。联系胰岛素晶体结构的研究结果,本文还初步讨论了导致上述现象的分子结构的内在原因。     

ENZYMATIC SYNTHESIS OF DESHEXAPEPTIDE INSULIN AND ITS ANALOGUES

Enzymatic synthesis of deshexapeptide (B25-B30) insulin (DHI) was reported briefly in previous papers, In this article, the optimal pH of enzymatic synthesis from desoctapeptide (B23-B30) insulin (DOI) protected by methylsulphonylethoxycarbonyl (Msc) groups, in vivo biological activity of crystalline DHI, its binding capacity with insulin receptor on human placental membrane and its conformation in solution is reported. The marked difference between the in vivo activity of DHI (40%) and its receptor-binding capacity (2％) is discussed.Homogeneous B23 Ala DHI has been prepared by the same method but the enzymatic synthesis of B23 D-Ala DHI has proved unsuccessful because of the high optical specificity of the enzyme.     

肽键的酶促合成

所谓肽键的酶促合成,实际上是指利用蛋白水解酶的逆转反应或转肽反应来进行的肽键合成。近年来,本方法有了某些新发展。它作为多肽化学合成的一个辅助和补充的方法,已经成功地用于许多小肽以及像脑啡肽和增血压素等生物活性肽的合成,更成功地是用于某些蛋白质如胰岛素、胰蛋白酶抑制剂,牛胰核糖核酸酶A、葡萄球菌核酸酶和细胞色素C等的结构与功能关系的研究。本文就最近研究概况作一简单介绍。     

去B链C端六肽胰岛素及其类似物的酶促合成

本文报道了用胰蛋白酶合成肽键的方法从[Msc]_2-DOI制备结晶的DHI和均一的B23-Ala-DHI。酶促合成的最适pH为7.0—7.5。结晶DHI的整体活力为胰岛素活力的40％,而与人胎盘细胞膜胰岛素受体的结合能力只有胰岛素的2.1％。对于这一差异进行了讨论。B23-Ala-DHI的整体活力只有胰岛素活力的2％。本文还报道了结晶DOI以及DHI等胰岛素类似物的CD光谱。     

胰岛素化学及生物化学的研究概况

胰岛素是动物胰岛β细胞分泌的一种蛋白质激素。目前医药临床上主要用来治疗糖尿病。人们对胰岛素的研究已将近有二百年的历史。早期的研究工作主要是由临床医生进行的,如1788年,医生 Cowley 就观察到胰脏功能的破坏与糖尿病的产生有密切的关系。后来又有人用外科手术方法将动物胰脏切除,从而引起人为的糖尿病。1900年,Schulze 和 Seobolew 证实胰脏兰氏(Langerhans)小岛细胞能产生一种可以降低血糖的物质。1909年,de.Meyer 将这种未知物质命名为胰岛素。但直到1922年加拿大科学家 Banting 和 Best 才真正从胰脏中抽提出胰岛素。此后,人们便开始进行胰岛素化学、生物     

PRELIMINARY CRYSTALLOGRAPHIC ANALYSIS OF DESHEXAPEPTIDE (B25—B30) INSULIN

Satisfactory single crystals of deshexapeptide(B25—B30) insulin for X-ray crystal structure analysis have been grown in citrate buffer by the method of hanging-drop gas phase diffusion. The crystal belongs to the monoclinic system with space group C2. The unit cell constants are α=42.6, b=37.9, c=27.2, β=125.4 and there is only one molecule of deshexapeptide insulin in an asymmetric unit.