环糊精葡萄糖基转移酶的固定化及其应用──Ⅲ．固定化环糊精葡萄糖基转移酶制备环糊精的研究

用固定化环糊精葡萄糖基转移酶催化淀粉环化反应,考察了反应时间、乙醇浓度和淀粉液化程度对环糊精产率的影响。环糊精产率最高达54%,固定化酶经多次重复使用或长时间连续操作,酶活力降低较少,产品经纸色谱分离后用碘显色,发现产品主要为β-环糊精。     

环糊精葡萄糖基转移酶的固定化及其应用研究．Ⅱ．壳素糖作载体固定化环糊精葡萄糖基转移酶的研究

使用经戊二醛处理过的壳素糖作载体固定化环糊精葡萄糖基转移酶，研究了给酶量、吸附时间等对固定化效果的影响。考察了固定化后酶学性质的变化。实验表明，酶经固定化后，热稳定性提高，最适ｐＨ值向前移１个单位。１０ｍｍｏｌ／Ｌ的ＣａＣｌ２可以使酶活力有较大提高。     

环糊精葡萄糖基转移醇的固化定及其应用研究.Ⅱ.壳素糖作载…

使用经戊二醛处理过的壳素糖作载体固定化环糊精葡萄糖基转移酶，研究了酶量，吸附时间等对固定化效果的影响。考察了固定化后酶学性质的变化。实验表明，酶经固定化后，热稳定性提高，最适ｐＨ值向前移１个单位。１０ｍｍｏｌ／Ｌ的ＣａＣｌ２可以使酶活力有较大提高。     

生物功能电极(Ⅴ)─葡萄糖氧化酶在环糊精聚合物中的固定化

将葡萄糖氧化酶(GOD)固定在α-环糊精聚合物中,而电子传递体分子被包含在环糊精腔穴中。固定化酶膜的FTIR测定表明,GOD与环糊精聚合物发生共价连接。制备了含电子传递体的不同GOD酶电极并比较了它们的性能。含四硫代富瓦烯的酶电极具有良好的电流响应特性,可望成为第二代葡萄糖酶电极的新构型。     

葡萄糖异构酶的固定化及其性质研究

用分子沉积法，在多孔三甲胺基聚苯乙烯载体上成功地固定化了双层葡萄糖异构酶。结果表明，这种新固定化酶方法能使单位重量的因素化酶活力及蛋白载量成倍增加，活力达到１２００ＩＵ／ｇ湿胶，与吸附法相比，酶活力提高１倍，其半衰期与吸附法相比则基本相同，为４５ｄ，还确定了最佳固体化条件并测定了固定化酶的性质，固定化酶的最适反应温度比液相酶提高１５℃，而最适ｐＨ值则没有改变，Ｋｍ值与液相酶的相比有一定程度的增加，     

环糊精聚合物的分子包合作用及在酶电极中的应用

伏安法用于研究环糊精预聚合物的分子包合作用．红外光谱实验表明环糊精预聚合物与戊二醛缩聚生成的聚合物带有悬挂的羰基,后者能使葡萄糖氧化酶共价固定化．由于分子包合作用,电子受体可存储在含酶的环糊精聚合物膜中,从而提高了酶膜中电子受体的浓度又减少了电子受体的用量．用ＴＴＦ等作电子受体,可实现酶和电子受体在环糊精聚合物中的同时固定化．环糊精聚合物膜中的组成和膜厚度可以控制,为酶电极的基础研究工作提供了方便．     

乙醇对环糊精葡萄糖基转移酶催化作用的影响

采用紫外吸收光谱法测定了乙醇、环已烷与β-环糊精包合反应稳定常数及自由能变化, 确定乙醇与β-环糊精的包合反应稳定常数K_s=4.71 L/mol, ΔG=-3.84 kJ/mol; 环己烷与β-环糊精包合反应的K_s=19.56 L/mol, ΔG=-7.37 kJ/mol. 环己烷与β-环糊精的结合能力大大高于乙醇, 故用乙醇提高其产率的机理不同于传统工艺中所添加的环己烷. 通过测定乙醇对环糊精葡萄糖基转移酶催化作用的影响进一步探究其作用机理. 结果表明, 乙醇不仅能提高环糊精葡萄糖基转移酶环化作用的活力, 并在一定程度上阻止对转化环糊精有抑制作用的小分子糖的形成, 还可以减轻环糊精葡萄糖基转移酶对环糊精的水解及偶合作用, 从而提高环糊精的产率.     

重氮法固定化糖化酶活力和稳定性

本文以苯氨基磺酸型多孔聚苯乙烯为载体，重氮化活化其苯氨基与糖化酶上的氨基反应。在固定化酶过程中，随反应时间的延长，不但固定化酶总活力增加，而且其比活和热稳定性也随之升高，最终可得活力为２００００Ｕ／ｇ干胶，比活为５００的高活力固定化酶，该固定化酶在ｐＨ４．５，６０℃无底物下保温，其半寿期是天然酶的５倍。以麦芽糖，糊精（分子量为１５００）和可溶性淀粉为底物测定该固定化酶活力表明：对某种孔度一定的载体     

生物功能电极（Ⅴ）：—葡萄糖氧化酶在环糊精聚合物中的固…

将葡萄糖氧化酶固定在α－环糊精聚合物中，而电子传递体分子被包含在环糊精腔穴中，固定化酶膜的ＦＴＩＲ测定表明，ＧＯＤ与环糊精聚合物发生共价连接，制备了含电子传递体的不同ＧＯＤ酶电极并比较了它们的性能，含四硫代富瓦烯的酶电极具有良好的电流响应特性，可望成为第二代葡萄糖酶电极的新构型。     

环糊精聚合物与苯醌的分子包合作用及其在酶电极中的应用

研究了水溶性环糊精预聚合物的存在对苯醌/氢醌体系在铂电极上氧化还原行为的影响, 根据伏安曲线讨论了该预聚合物与苯醌的分子包合作用。环糊精预聚合物与戊二醛缩聚反应而形成的不溶性聚合物膜用于葡萄糖氧化酶的固定化, 以制得新型的第二代葡萄糖电极。由于分子包合作用, 作为电子受体的苯醌在含酶的环糊精聚合物膜中具有较高的浓度, 从而加速了固定化酶的电子传递。测定了酶电极上BQ反应的动力学参数。     

α－葡萄糖基甜菊糖的酶促合成反应（Ⅱ）

研究了以球形纤维素弱阴离子交换剂作载体，固定化葡萄糖基转移酶ＧＴ－１转化甜菊糖为α－葡萄糖基甜菊糖反应的各种影响因素。结果表明，甜菊糖的酶促转化到达一定程度后，继续增大酶用量及淀粉用量，对转化结果没有太多改善，固定化酶重复使用８次，活力下降较少，说明固定化效果良好。     

纳米磁粉固定化酶催化合成 α-D-葡萄糖-1-磷酸

 建立了以麦芽糊精和磷酸盐为底物, 在常温下合成 α-D-葡萄糖-1-磷酸的生物催化体系. 从大肠杆菌 K12 中克隆表达了麦芽糊精磷酸化酶, 并固定化在氨基修饰的磁性纳米颗粒上, 以便于酶的回收和重复利用. 在优化的反应条件下, 于 200 ml 体系中连续使用该固定化酶 8 批次, 催化合成了 α-D-葡萄糖-1-磷酸. 经过简单的纯化步骤, 最终得到 440 mg 产品, 分离产率为 70.5%.     

固定化嗜热菌蛋白酶催化合成二肽甜味剂Aspartame

以氨丙基多孔硅球作载体,以戊二醛作交联剂制备的固定化嗜热菌蛋白酶催化合成Aspartame前体,通过酸化脱盐、氢化等反应得到二肽甜味剂Aspartame。研究了反应条件对合成Aspartame前体产率的影响,考察了固定化酶的重复使用性能。结果表明,固定化酶在水相中能较好的催化合成Aspartame前体,且具有良好的重复使用性能。     

氧化铝为载体的葡萄糖异构酶固定化的研究

随着近年来固定化酶技术的发展,用固定化葡萄糖异构酶生产高果糖浆已是目前世界上固定化酶应用于工业生产规模最大的一种。氧化钼作为葡萄糖异构酶的载体具有来源容易、价格便宜、机械强度好、固定方法简单和易于再生等优点。 Messing等人曾于1976年用控孔陶瓷仪筛选了一种平均孔径为175(范围:140—220)的氧化     

α-环糊精的研制

本研究用软化芽孢杆菌经发酵培养得到转葡糖基酶。此酶作用淀粉得到由6—7个葡萄糖单元以α-1,4-苷键连结的大环状分子,分别命名为α-环糊精、β-环糊精(简称α-CD,β-CD)。此大环状分子有高亲水性,但分子内空洞是疏水的,因此能作为宿主在空洞内容易以分子间力结合与空洞大小     

固定化酶树脂进行酶固定化反应条件的研究

本文通过研究固定化青霉素酰化酶的酶活力,考察了固定化酶反应条件即缓冲溶液浓度、pH值、酶浓度以及反应时间等对固定化酶活力的影响。研究了反应条件与固定化酶活性之间的影响规律,从而为进一步优化固定化酶条件、提高固定化酶活性提供了实验依据与参考。     

多孔材料固定化脂肪酶的研究进展

在有机合成中,脂肪酶是一种符合绿色化学理念、能显著提高催化效率和对生化工业具有重要意义的生物催化剂,它的研究和应用涉及很多领域.然而,在众多有机反应中,脂肪酶容易受水、温度、 pH值、酶液浓度、底物浓度、酶的激活剂或抑制剂等许多因素的影响,导致失活,产率降低.为了解决这一问题,酶的固定化技术引起了广大科研工作者的浓厚兴趣,并发现了很多酶的固定化载体.其中,多孔材料类固定化载体颇受青睐,它具有孔隙率高、比表面积大、相对密度低、吸附性能较佳、渗透性能较好和精确的分子识别功能等优点.实验证明,多孔材料固定化酶比游离酶的应用效果更佳,多次循环利用后仍旧保持较高的酶活性.我们主要对多孔材料在固定化脂肪酶方面的应用和固定化酶的催化效果做了一个总结,多孔材料主要包括纳米多孔材料、大配体多孔材料、碳骨架多孔材料、氧化硅骨架多孔材料、聚合物类多孔材料等.     

辐射聚合固定化α—淀粉酶的研究

用低温辐射聚合法将α-淀粉酶固定到聚甲基丙烯酸-β-羟乙酯载体上。研究了低温辐射聚合固定化的条件;讨论了不同固定化酶对淀粉转化成还原糖的相对活性及其重复使用的稳定性;探索了载体微孔结构与固定化酶活性的关系。结果表明,在真空体系内,酶用量≥250μg/mL、单体浓度在30％～40％之间,于-50℃～-55℃范围内进行5.6×10~5rad剂量的辐射聚合,所得固定化酶重复使用10多次其相对活性仍可保持在30％以上。     

以β—环糊精聚合物的超分子包结物为固定化介质的安培型？…

阐述了一种新的生物传感器的固定化方法。利用β－环糊精聚合物与亚甲基蓝间的超分子作用及β－ＣＤＰ与戊二醛间的缩聚作用,将介体和酶代同固定在电极上,制成的过氧化氢传感器有良好的稳定性和充分的电子流动性,对１．０μｍｏｌ／Ｌ￣１．１ｍｍｏｌ／ＬＨ２Ｏ２呈线性响应,检出限为０．５μｍｏｌ／Ｌ。     

氨基酰化酶的固定化及其对D,L—蛋氨酸的光学拆分

本文用大孔网高分子载体对氨基酰化酶进行固定化,并系统地研究了温度、pH值、离子浓度、底物浓度、激活离子及蛋白质变性剂对固定化酶活力的影响。由于载体的物理性质和功能基较适宜,因而吸附蛋白质的容量大,使固定化酶的活力和活力回收率都高。用固定化酶柱对D,L—蛋氨酸进行连续拆分,酶柱使用周期长,稳定性高。拆分的产物用离子交换法进行分离与精制后,可制得纯度高,产率理想的L—蛋氨酸盐酸盐。