高效液相色谱法分析麋鹿茸中的性激素

1　引　　言除氨基酸、多糖类、磷脂类、维生素和矿物质外 ,激素类也是鹿茸的有效化学成分之一。其中雌二醇为鹿茸具雌激素作用的主要成分。关于鹿茸中性激素报道极少。而测定麋鹿茸中性激素文献还未见到。本文用高效液相色谱法(ＨＰＬＣ)测定了麋鹿茸中的性激素。结果表明 ,麋鹿茸中含有雌二醇、雌酮、睾酮等激素 ,与梅花鹿茸、马鹿茸相比 ,麋鹿茸中雌二醇含量最高。本研究填补了百年来因野生麋鹿在我国本土灭绝而造成的研究空白。2　实验部分2 .1　实验材料、试剂与仪器　带血麋鹿茸 ,北京麋鹿生态实验中心提供。梅花鹿茸 ,吉林集安广润保…     

喹诺酮类药物的示波测定

喹诺酮类药物属于人工合成抗生素 ,至今已开发或正在开发的约 5 0多种 ,成为抗感染药物中最活跃的研究领域之一 ,是一类有巨大潜力的新型抗菌药 .喹诺酮类药物的测定 ,大多采用高效液相色谱法 [1～ 3 ] .但高效液相色谱仪的价格昂贵 ,测定对样品的处理要求较高 ,应用受到限制 .示波分析法具有仪器简单、操作简便、选择性高等优点 ,用此法测定吡哌酸、诺氟沙星含量已有报道 [4～ 6] .本文进一步研究了依诺沙星 (ENX)、环丙沙星(CPLX)、氧氟沙星 (OFLX)、氟罗沙星 (FLRX)和司帕沙星 (SPLX)等 5种喹诺酮类药物的示波测定条件及方法 .S…     

功能性CdS纳米荧光探针荧光增敏法测定人血清白蛋白

目前 ,以荧光分析法对蛋白质进行研究主要采用有机荧光探针[1～ 3 ] .与传统的有机染料 (如罗丹明 )探针相比 ,半导体纳米晶体探针的光强度要高 2 0倍 ,光稳定性要高 1 0 0倍 ,谱线宽度只是有机染料谱线宽度的 1 /3 [4 ] .将半导体纳米晶体作为探针用于测定生物分子 ,将大大提高分析的灵敏度和选择性 ,而目前其应用于生物染色、医疗诊断、DNA序列测定和免疫分析等方面的研究很少 [4 ,5] .本文合成了胶态纳米粒子 Cd S,并在其外表面修饰一层巯基乙酸 ,使其具有水溶性 ,并能与生物分子作用 ,从而可利用其外表面的功能性基团对人血清白蛋白进…     

PAP-H2O2-HRP伏安酶联免疫分析新体系测定人血清总甲状腺素

目前临床检测中测定总甲状腺素(T₄)的常用方法有间接血凝试验、琼脂双扩散及ELISA等方法^[1].其中ELISA法是目前较为流行的检测方法,但灵敏度不高.伏安酶联免疫分析法具有广阔的应用前景^[2,3].     

分光光度法测定食盐中碘的含量

碘是甲状腺合成甲状腺激素的主要成分,这种激素能促进人体的新陈代谢和生长发育。人体缺碘易患缺碘性疾病,如地方性甲状腺肿、地方性克汀病等,我国是碘缺乏病流行严重的国家,目前主要是在食盐中加入碘(以碘酸钾形式加入)并且严格控制碘的加入量,为此,测定食盐中碘含量非常重要。食盐中含碘量的测定常用的方法有滴定分析法[1]和萃取光度法[2]等,利用碘酸钾作氧化剂的氧化褪色光度法有较多的研究[3-4],而氧化显色光度法研究得较     

吲哚乙酸的间接光度分析法研究

吲哚乙酸(IAA)是一种植物生长激素,具有重要的生理功能,调节和控制着植物体内的核酸蛋白质和酶的合成,以及植物生长发育等各种生命现象,如发芽、生根、细胞生长、器官分化、开化结果、落叶、休眠等。研究吲哚乙酸分析测试方法对了解植物生长发育过程和规律有十分重要的意义。由于植物中吲哚乙酸的含量极低,吲哚乙酸含量的测定一般都使用高效液相色谱法[1]、放射免疫法[2]。我们对吲哚乙酸的电化学分析法做了初步的研究[3],本文提出具有快速、简便、灵敏的光度分析法。在pH=2的硫酸溶液中研究了磷钼黄与吲哚乙酸的反应动力学及反应机理,探…     

荧光光度法测定痕量色氨酸——基于其对ρ-甲酚荧光反应的增强作用

氨基酸是蛋白质的基本组成单位,色氨酸是人和各种动物生长发育不可缺少的必需氨基酸之一,色氨酸缺乏可导致动物生长迟滞,胰岛素分泌降低,蛋白质合成下降等.因此建立灵敏的色氨酸分析方法具有十分重要的意义.目前关于色氨酸分析测定的报道有分光光度法[1],电化学法[2,3],磷光分析法[4],荧光分析法[5]等.血红蛋白(Hb)具有与天然生物酶辣根过氧化物酶(HRP)相同的铁卟啉辅基和相似的空间结构,由于稳定价廉的优点,作为辣根过氧化物酶的模拟酶已成功地实现了维生素C[6]、血红蛋白[7]以及核黄素[8]等物质的高灵敏度测定.     

中草药黄芪、黄芹中非淀粉多糖的含量分析

中草药黄芪是豆科植物膜荚黄芪Astragalus membranaceus (Fisch) Bge.和蒙古黄芪 A.mongholicus Bge.的干燥根,含有皂甙类、黄酮甙类及糖类,及多种氨基酸和微量元素。近年来越来越多的文献表明,其多糖含量较高,具有降压、利尿、强心,提高机体免疫的功能和抗衰老作用^[1],并广泛应用于心血管疾病。由于对黄芪作用的不断认识,黄芪用量逐渐增加,并广泛用于饮料、补品、化妆品、茶叶等工业中。天然多糖具有非特异性免疫功能与抗衰老等诸多药理作用。本文采用糖醇乙酸酯衍生化、气相色谱法测定了中草药黄芪和黄芹中可溶性非淀粉多糖(SNSP)和不可溶性非淀粉多糖(INSP)的含量及各组成单糖的含量。该实验结果可为进一步深入研究中草药黄芪、黄芹的药理学作用,提供重要的理论依据。     

微柱液相色谱-电化学法检测鼠纹状体单胺类物质的含量

单胺类神经递质 ( Monoamines) ,包括儿茶酚胺 ( Catecholamine)和 5 -羟色胺 ( Serotonin) ,在中枢神经系统中起重要作用 .对其含量的准确测定在基础研究和临床诊断中均具有重要的意义 .微透析是 2 0世纪 80年代发展起来的活体取样技术 [1] ,为脑功能的研究提供了极为有力的手段 ,本实验室在此方面进行了多年的研究 [2 ,3] .微透析与液相色谱电化学检测联用[4 ] ,可测定神经细胞外液递质的含量及释放量 ,据此可对一系列重要的生理、病理和药理现象做出解释 .但使用常规高效液相色谱柱 ( =4.6mm i.d.)尚存在不足之处 .首先 ,透析液中神经…     

中性红荧光探针法测定生物大分子核酸

中性红 (NR)是一种吩嗪染料 ,至今已有许多关于 NR与 DNA相互作用的报道[1～ 5] .李克安[4 ] 和黄承志等 [5]利用共振光散射技术分别在酸性 (p H=2 .3 )和中性 (p H=7.6～ 7.8)条件下 ,建立了以 NR为探针测定痕量 DNA的方法 .我们 [2 ,3]曾利用荧光光谱方法研究了在 p H=7.4条件下 NR与 DNA之间的相互作用 ,发现利用吖啶橙和 NR之间的能量转移现象可以测定 DNA,但检出限偏高 ,且由于使用两种染料试剂 ,操作较繁琐 .为了克服吖啶橙、NR能量转移分析法的不足 ,本文建立了在 p H=4.5的条件下以单一染料 NR为荧光探针测定痕量核酸的…     

基于温度敏感水凝胶的雌二醇荧光免疫分析

雌二醇完全抗原(Ag)与异丙基丙烯酰胺(NIPA)共聚,可得水凝胶－抗原结合物(pNIPA－Ag),pNI－PA-Ag与游离的雌二醇(E₂)竞争有限的荧光标记的单抗McAb-F,利用水凝胶温度相变的性质,分离高分子免疫复合物,并测定其荧光信号.结果表明,游离E₂在10～625ng/mL范围内呈线性关系,样品的回收率为88.9%～102.0%.     

时间分辨荧光免疫分析法间接测定雌二醇

以氯磺酰基噻吩甲酰三氟丙酮（CTTA）为铕（Eu)的螯合剂,羊抗鼠（SAM）的IgG为二抗,用SAM－IgG-CTTA-Eu作标记二抗,建立了以竞争抑制为基础的时间分辨荧光免疫分析测定离雌二醇（E2）的新方法。同均相方法相比灵敏度有很大提高,测定雌二醇（E2）的线性范围为2．5－200pg/mL,检测限为2.5pg/mL。这一方法可望用于E2的临床检测。     

Assessment of aptamer-steroid binding using stacking-enhanced capillary electrophoresis

The binding affinity of 17β-estradiol with an immobilized DNA aptamer was measured using capillary electrophoresis. Estradiol captured by the immobilized DNA was injected into the separation capillary using pH-mediated sample stacking. Stacked 17β-estradiol was then separated using micellar electrokinetic capillary chromatography and detected with UV-visible absorbance. Standard addition was used to quantify the concentration of estradiol bound to the aptamer. Following incubation with immobilized DNA, analysis of free and bound estradiol yielded a dissociation constant of 70 ± 10 μM. The method was also used to screen binding affinity of the aptamer for estrone and testosterone. This study demonstrates the effectiveness of capillary electrophoresis to assess the binding affinity of DNA aptamers.     

Application of capillary electrophoretic immunoassay to analysis of estradiol in women's serum

Summary A rapid and sensitive capillary electrophoretic immunoassay is described for determination of estradiol in women's serum. Addition of thermally reversible hydrogel in the buffer, serving as a replaceable packing material, improved the reproducibility of the method. Using a laser-induced fluorescence detector this method can be applied to the determination of estradiol at concentrations as low as 30.6 pg mL¹. Estradiol levels in 16 normal women's serum were measured at the range 115≈370 pg mL¹. The results of this method have been found to correlate well with those of chemiluminescent immunoassay.     

Direct immunoassay of estrone by capillary electrophoresis with laser-induced fluorescence detection

An immunoassay for estrone (E(1)) in women's serum, based on the competitive reaction between fluorescein-labeled complete antigen and E(1) with limited amount of anti-estrone monoclonal antibody is described. A thermally reversible hydrogel, poly-N-isopropylacrylamide (pNIPA), was added to the buffer to improve the reproducibility. With a laser-induced fluorescence (LIF) detector, the capillary electrophoretic immunoassay (CEIA) can be applied to determine E(1) at a concentration lower than 19.6 pg/mL. The E(1) levels in ten normal women's serum were measured at the range of 118.6-222.0 pg/mL.     

聚乙烯醇/酸化碳纳米管高亲水性三维孔电极膜的制备与电化学性能

在酸化碳纳米管的基础上, 采用电泳沉积和冷冻-解冻循环交联工艺制备了高亲水性聚乙烯醇/酸化碳纳米管(PVA/a-MWCNTs)水凝胶电极膜. 该电极膜具有三维连通纳米孔结构, 同时还具有高电活性面积、 低表面电荷传递电阻以及良好的扩散通透性等电化学特性. 该电极膜对多巴胺(DA)有很好的电化学响应特性, 并且对多巴胺的电化学还原电流不受抗坏血酸(AA)干扰, 在过量抗坏血酸存在下, PVA/a-MMWCNTs水凝胶电极膜对多巴胺还原电流的一阶导数与多巴胺的浓度在2×10^-6 ~2×10^-3 mol/L范围内呈线性关系, 检出限达到1×10^-6 mol/L, 灵敏度达到12.3 μA/(mmol·L^-1), 同时还表现出了较好的电极稳定性和重现性.     

衍生-气相色谱-质谱法测定水中痕量雌激素

提出了气相色谱-质谱法测定水中雌二醇、雌酮、雌三醇、戊酸雌二醇、己烯雌酚、乙炔雌二醇、双酚A和壬基酚等8种雌激素含量的方法。样品经乙酸乙酯提取和HLB小柱净化后,所得净化液中的雌激素与三甲基硅基化剂(TMS)或七氟丁酸酐(HFBA)进行衍生化反应产物用正己烷定容。在气相色谱分离中用DB-5MS毛细管柱为固定相,在质谱分析中采用全扫描和选择离子监测模式。8种雌激素的峰面积与质量浓度在20.0～1 000μg.L-1范围内呈线性关系,检出限(3S/N)在0.1～0.5μg.L-1之间。方法用于水中雌激素的测定,回收率在71%～103%之间,相对标准偏差(n=6)在4.2%～15%之间。     

Diffusion and transfer of antibody proteins from a sugar-based hydrogel

Diffusion of antibody protein from hydrogel films and hydrogel encapsulated in a microcapillary was studied. Thin hydrogel films were formed by crosslinking 6-acryloyl-B-O-methylgalactoside withN,N’-methylene-bis-acrylamide and the diffusive transport of monoclonal antimouse IgG-FITC into and out of the hydrated films was measured. Diffusion coefficients in 2 and 4% crosslinked hydrogel films were measured. The measured diffusion constants determined for IgG in both the 2 and 4% hydrogel films were comparable to the free diffusion of IgG in bulk water (D _mean ∼ 10^-7cm²/s). In addition, 2% crosslinked hydrogels were prepared in a capillary tube and the transport of antimouse IgG-FITC into and out of the hydrated hydrogel was measured. Kinetic analysis indicated that the protein transport through the capillary hydrogel was faster than would be expected for a simple diffusion process. Finally, by utilizing the diffusion of antibody from the capillary hydrogel, transfer of antibody to a silica surface was demonstrated. A capillary hydrogel loaded with antimouse IgG-FITC was used to transfer the protein to a silica surface forming a 30-μm spot of antibody, which was imaged using fluorescence microscopy. These results may lead to the development of a nonlithographic method of patterning antibodies on surfaces for use in integrated microimmunosensors.     

Adsorptive and electrochemical behaviors of estradiol valerate at a mercury electrode

It was found that estradiol valerate could be adsorbed at a mercury electrode under open circuit. The adsorptive and electrochemical behaviors of estradiol valerate on a static mercury electrode were investigated by cyclic voltammetry, linear scan voltammetry and chronocoulometry. Based on this, a sensitive and selective adsorptive stripping square-wave voltammetric method was developed for the determination of estradiol valerate based on the optimization of solution conditions and electrochemical parameters. It was found that in a Britton-Robinson buffer solution containing 18% alcohol (pH 9.5), estradiol valerate gave a sensitive reductive peak at potential -1.29 V (vs. SCE) and the peak current was linear with the concentration of estradiol valerate in the range 2.0 x 10(-8)-2.5 x 10(-6) mol L-1. The detection limit was 1.1 x 10(-8) mol L-1. The interference of some common steroid estrogens was examined and it was found that they did not interfere in the determination of estradiol valerate in the present system.     

雌二醇的流动注射阻抑化学发光法测定

基于碱性介质中雌二醇对N-溴代丁二酰亚胺-钙黄绿素化学发光体系的阻抑作用,建立了雌二醇的流动注射化学发光分析新方法,优化了其分析条件,并初步探讨了该化学发光反应的机理。该方法测定雌二醇的线性范围为0.02~0.1、0.1~8.0 mg/L,检出限为0.008 5 mg/L。对0.1 mg/L的雌二醇标准溶液进行11次平行测定,相对标准偏差为1.2%。将该法用于注射液中雌二醇的测定,结果满意。