软光刻法制备具有表面微结构的角蛋白膜

近年来,使用微纳米制造工艺将蛋白质或多肽进行高精度空间图案化,推动了细胞生物学、组织工程学、药物科学等领域的发展.同时,羊毛角蛋白作为一种储量大的天然生物蛋白质,具有优异的水溶性、良好的生物相容性和可控的降解性,但羊毛角蛋白通常不能自组装形成凝胶网络或其他不溶形式,因此,使用羊毛角蛋白制备如纤维、薄膜、凝胶等的成型结构存在很大困难.本工作通过使用化学修饰的方法,在角蛋白上接枝功能基团,使角蛋白获得光敏感性,探究了共价交联法制备具有表面微结构角蛋白膜的可行性.并用3D激光扫描显微镜、紫外可见近红外光谱仪和傅里叶变换显微红外光谱仪对薄膜结构进行了表征.结果表明,使用软光刻法可以得到表面微结构完整度很高的角蛋白膜.本工作对羊毛角蛋白共价交联法进行了实验探索,实验结果不仅为人们提供了一种软光刻技术制备具有表面微结构的角蛋白膜的方法,而且为羊毛角蛋白制备成型结构提供了新的途径.     

芽孢杆菌L4所产角蛋白酶的纯化工艺、理化性质及其应用研究

根据芽孢杆菌L4菌株发酵产生的角蛋白酶的分子量和等电点等特征,分别采用硫酸铵盐析沉淀,Sephadex G-75凝胶过滤、DEAE-cellulose 52离子交换和Sepharose 4B凝胶过滤等色谱层析对其进行分离纯化,经SDS-PAGE检测呈现单一条带,分子量为149kD;变性电泳结果显示,该酶由4个分子量约为37.5kD的亚基组成;采用等电聚焦电泳测得其等电点为7.76,并通过纸层析法初步确认该酶为高甘露糖型糖蛋白;最后通过羊毛水解实验确认该酶具有水解羊毛角蛋白的能力,在羊毛仿羊绒等领域具有一定的应用价值.     

改性角蛋白纤维中蛋白质与脂类组成变化的分析

本文采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和薄层色谱,对经过化学改性处理后的角蛋白纤维中的蛋白质和脂类组成进行了分析。结果表明,羊毛纤维中的蛋白质和脂类的组成变化,可反映出纤维结构的变化,并能够预示纤维的纺织性能。     

混合色谱填料的研究进展

随着科学技术的发展,人们需要分离分析的样品越来越复杂,尤其是多肽、蛋白质类生物样品的复杂性使得单一模式色谱难以满足分离分析的要求。混合模式色谱因其独特的分离性能,可以在一次分离中获得与多维色谱相当的分离效果,而且可以避免多维色谱系统结构复杂、流动相兼容性差、分析时间长等问题,成为近年来的研究热点之一。混合模式色谱的研究重点是色谱固定相的设计与开发。混合模式色谱固定相包括反相/离子交换混合固定相、反相/亲水混合固定相、亲水/离子交换混合固定相、两性离子交换混合固定相及三相混合固定相。本文综述了近年来混合模式色谱填料的研究及应用进展,并对混合模式色谱及固定相的发展前景进行了展望。     

新解色谱现象

在客观分析色谱现象的基础上对色谱分离机理的传统解释提出了质疑和否定,并对色谱分离机理作出了新的解释。通过对色谱现象的研究和分析,不仅确定了一条流体运动的基本规律,还对固定相赋予了新的内涵,提出了能量场固定相的设想。由于对色谱分离原理进行了新的解释,因此对色谱现象提出了一个新的定义。     

引言

色谱柱是色谱分离分析的“心脏”,而色谱柱的分离性能主要由色谱固定相的性质所决定;因此,液相色谱技术的发展与色谱固定相的创新密切相关,如近年来细粒度(＜3 [WTBZ]μ[WTB4]m)固定相的研制成功为高压液相色谱(UHPLC)技术的发展奠定了基础。色谱固定相一直以来也是色谱研究领域的前沿和热点。近年来,整体柱材料、超细色谱固定相和基于介孔纳米材料的固定相等制备技术得到了快速发展,其在复杂样品的高效分离分析和样品预处理中的应用也获得了广泛的关注,并取得了重要进展。     

烷基酚聚氧乙烯醚在不同液相色谱分离模式中的分离研究

考察了烷基酚聚氧乙烯醚在反相色谱、正相键合色谱、硅胶吸附色谱、体积排阻色谱4种不同液相色谱分离模式中的分离效果,分别采用Kromasil C_(18)(250 mm× 4.6 mm,5 μm)、Agilent ZORBAX NH2(250 mm× 4.6 mm,5 μm)、Waters Spherisorb S3W(150 mm×2.0 mm,3 μm)和Shodex MSpak GF-310 2D(150 mm×2.0 mm,5 μm)色谱柱,以225 nm为紫外检测波长,对不同液相色谱分离模式的流动相组成、梯度洗脱条件、柱温、流速等进行了优化,并对烷基酚聚氧乙烯醚在不同液相色谱分离模式中的保留机理进行了初步探讨.结果表明,正相键合色谱实现了烷基酚聚氧乙烯醚的最佳分离;硅胶吸附色谱和体积排阻色谱的分离效果较正相键合色谱稍差.     

新型多孔材料用作色谱手性固定相

手性固定相是色谱法分离分析手性化合物的关键。近年来,随着材料科学的迅速发展,越来越多的新型手性材料被作为色谱固定相用于手性分离分析。本文综述了近5年来液相色谱、气相色谱和毛细管电色谱领域的新型手性固定相的研究进展,重点总结了基于手性多孔材料的新型手性固定相研究,最后对手性固定相的研究进行了总结与展望。     

氯丙基键合硅胶固定相色谱性能与应用 I.二取代苯及前列腺素差向异构体的分离

研究了氯丙基键合硅胶固定相的高效液相色谱性能和在分离二取代苯异构体、前列腺素差向异构体方面的应用,探讨了流动相组成、性质、ｐＨ值等对溶质保留和分离的影响,讨论了溶质保留机理和最佳色谱分离条件。对上述异构体进行了良好的分离,而且分离速度比一般的反相色谱体系要好。     

基于共价有机框架的色谱固定相制备及其应用研究进展北大核心CSCD

工业领域与科学研究的不断发展,使得复杂体系的高灵敏、高通量和高选择性分离分析面临新的挑战。色谱法在分离科学中发挥着不可替代的作用,已被广泛应用于环境监测、药物分析和食品安全等领域。由于载样量高、定量分析精确和重现性好等突出优势,基于多种保留机制的色谱分离技术已被应用于不同分析物的检测。固定相作为色谱柱的核心,对色谱的分离性能有着极其重要的影响。分离的选择性和效率极大程度上取决于所采用的固定相。然而,传统固定相如硅胶基质制备工艺复杂、pH适用范围窄,聚合物基质机械稳定性较差且易溶胀等缺点限制了其在分离领域的进一步应用。因此,开发高效的新型色谱固定相以满足不同情况下的分离要求是提高色谱分离效率的关键。共价有机框架(COFs)是一类由共价键连接而成的多孔晶体聚合物,具有低密度、高孔隙率、大比表面积和性质稳定等优点。这些突出优势使得COFs材料在分离分析领域具有潜在应用价值,且被认为是新型色谱固定相的理想材料。本文综述了最近5年基于COFs的色谱固定相的制备及其应用的最新研究进展,简要介绍了基于COFs的色谱固定相的制备,详细总结了基于COFs的固定相在色谱分离领域方面的最新应用,展望了基于COFs的色谱固定相的未来发展前景与趋势。     

Hydrophilic interaction liquid chromatography (HILIC) in proteomics

In proteomics, nanoflow multidimensional chromatography is now the gold standard for the separation of complex mixtures of peptides as generated by in-solution digestion of whole-cell lysates. Ideally, the different stationary phases used in multidimensional chromatography should provide orthogonal separation characteristics. For this reason, the combination of strong cation exchange chromatography (SCX) and reversed-phase (RP) chromatography is the most widely used combination for the separation of peptides. Here, we review the potential of hydrophilic interaction liquid chromatography (HILIC) as a separation tool in the multidimensional separation of peptides in proteomics applications. Recent work has revealed that HILIC may provide an excellent alternative to SCX, possessing several advantages in the area of separation power and targeted analysis of protein post-translational modifications. Figure Artistic impression of the HILIC separation mechanism     

反相高效液相色谱双梯度洗脱分离肽混合物及质谱分析

复杂肽段混合物的有效分离是高覆盖率地鉴定蛋白质混合物的前提。“鸟枪法”(Shotgun)蛋白质组学研究策略通常采用蛋白酶切、二维液相色谱-串联质谱分析肽段混合物从而鉴定蛋白质,其中高效率地分离肽段混合物是关键步骤之一。本文通过pH梯度结合有机溶剂梯度的反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行一维液相色谱分离,按等时间间隔收集馏分并将一个梯度的前段的一个馏分与后段一个馏分混合,然后进行纳升级液相色谱-质谱联用(nanoRPLC-MS/MS)分析。将该方法应用于酵母蛋白质的分离和鉴定,实验结果为: 与常规的强阳离子色谱-反相液相色谱-质谱分离鉴定方法相比,采用pH梯度结合有机相梯度的RP-HPLC-RPLC-MS分离鉴定方法多鉴定到567个酵母蛋白质(簇,含有3035个唯一肽段);其中鉴定到肽段的pI分布范围为3.42～12.01,相对分子质量范围为587.67～3499.79;蛋白质的pI分布范围为3.82～12.19,相对分子质量范围为3446.55～432905。该结果表明这种方法在复杂体系蛋白质组分离鉴定中具有明显的优势,在蛋白质组学研究中有较好的应用前景。     

薄层色谱综合分离程度的定量量度

薄层色谱对多元组分的分离程度,目前常用信息量~[1]来度量.但由于计算信息量时需人为地固定R_f值的分段,且认为同一区段内的R_f值等同,而不考虑每相邻两组分的R_f差值,也忽略了同一R_f区段内不同R_f值的细微差异.同时,由于薄层色谱分离的信息量并非连续函数,它只能取很有限的若干个分立值.因此,导致有时相同的信息量值却对应着相去甚远     

多维高效液相色谱分离模式组合

简述了多维高效液相色谱法的特点及发展简况,重点对分子排阻色谱／反相色谱、离子交换色谱／反相色谱、正相色谱／反相色谱、分子排阻色谱／离子交换色谱、液固色谱／反相色谱、亲合色谱／反相色谱、非手性柱／手性柱等的联用模式及实际应用进行了概括和总结。     

Application of micellar electrokinetic chromatography to pharmaceutical analysis

Electrokinetic chromatography is a new type of analytical separation method which belongs to the group of high performance capillary electrophoretic techniques but whose separation principle is based on that of chromatography. The solute distributes itself between a carrier and the surrounding medium. The carrier, which corresponds to the stationary phase in conventional chromatography, can be transported by electrophoresis with a different velocity from the surrounding medium. The separation is achieved by the differential solute distribution and the differential migration of the carrier. The charged molecules or charged molecular aggregates are employed as the carrier. Various kinds of carriers are available for electrokinetic chromatography along with different partition mechanisms. Among them, micellar electrokinetic chromatography, which employs an ionic micelle as a carrier, has become the most popular method because of its unique and attractive characteristics as well as the separating capability of electrically neutral or nonionic solutes in comparison with capillary zone electrophoresis. The present paper describes the principle, separation characteristics and its application to the analysis of pharmaceuticals.     

Pharmaceutical applications of micelles in chromatography and electrophoresis

This review surveys the use of micelles as separation media in chromatography and electrophoresis. Applications to pharmaceuticals whose molecular masses are relatively small are focused on in this review. In high-performance liquid chromatography (HPLC), chromatography using micelles and reversed-phase stationary phases such as octadecylsilylized silica gel (ODS) columns is known as micellar liquid chromatography (MLC). The main application of MLC to pharmaceutical analysis is the same as in ion-pair chromatography using alkylsulfonate or tetraalkylammonium. In most cases, selectivity is much improved compared with other short alkyl chain ion-pairing agents such as pentanesulfonate or octanesulfonate. Direct plasma/serum injection can be successful in MLC. Separation of small ions is also successful by using gel filtration columns and micellar solutions. In electrophoresis, especially capillary electrophoresis (CE), micelles are used as pseudo-stationary phases in capillary zone electrophoresis (CZE). This mode is called micellar electrokinetic chromatography (MEKC). Most of the drug analysis can be performed by using the MEKC mode because of its wide applicability. Enantiomer separation, separation of amino acids and closely related peptides, separation of very complex mixtures, determination of drugs in biological samples etc. as well as separation of electrically neutral drugs can be successfully achieved by MEKC. Microemulsion electrokinetic chromatography (MEEKC), in which surfactants are also used in forming the microemulsion, is successful for the separation of electrically neutral drugs as in MEKC. This review mainly describes the typical applications of MLC and MEKC for the analysis of pharmaceuticals.     

High-resolution analysis of polyprenols by supercritical fluid chromatography

A high-resolution analysis of polyprenol mixtures was achieved by supercritical fluid chromatography (SFC). The separation of polyprenols was examined on an octadecylsilane-packed column with liquid carbon dioxide as the mobile phase and ethanol as modifier. Using this chromatography system, the resolution of separation (Rs) between octadecaprenol (prenol 18) and nonadecaprenol (prenol 19) was two times higher than that using conventional reversed-phase high-performance liquid chromatography. Our SFC technique allows the advantage of baseline separation of polyprenol samples containing hydrophobic components such as terpenes or fatty acids that are unfavorable for good separation. This method is very useful for the analysis of structurally close polyprenol analogues of rubber plant metabolites.     

径向展开薄层色谱法分离生物碱及其分离效能

径向展开薄层色谱法是一种将样品由中心沿径向向外展开的简便、快速、高效的色谱方法。该文组装了简单的径向展开薄层色谱装置,并建立了朱砂安神丸的径向展开薄层色谱检测法,对其中的生物碱成分进行分离,研究了径向展开薄层色谱的分离特性。从薄层色谱基础理论出发,对径向展开薄层色谱和一般薄层色谱的分离效能进行了比对研究,设计试验进行计算和求解。证明了径向展开薄层色谱法更快、更高效、更经济,适用于生物碱等高极性样品分离。探索了径向展开薄层色谱法高分离效率的理论根源,这一研究思路也为理论创新提供了新的方法和思路。     

凝胶渗透色谱柱填料研究现状

凝胶渗透色谱法(GPC)是19世纪60年代开发的一种分离技术,作为一种液相分离色谱,其具有对流动相的要求不高、实验条件温和、重现性好、分析速度快、溶质回收率高等优点。这些优点使凝胶渗透色谱具有独特的分离效果,因此得到迅速发展并广泛用于石油化工、生物医药、食品卫生、环境监控等领域。该文对凝胶渗透色谱柱填料(如聚丙烯酰胺凝胶、聚苯乙烯凝胶等)的合成、性能以及应用进行综述,并对近年来出现的新型柱填料进行简要介绍。