SERS标记免疫金溶胶的影响因素研究

将表面增强拉曼光谱(SIERS)的高度灵敏性应用于标记免疫检测,具有很大的意义。在“固相抗体-待测抗原-标记抗体”夹心复合物体系中,以(SERS)标记的金溶胶与抗体结合,制备标记抗体。以芳香族化合物苯硫酚为标记分子,与一定大小粒径的金纳米粒子形成S-Au键,生成带有SERS信号的标记金溶胶。表面带负电荷的标记金溶胶与带有正电荷基团的抗体形成牢固的标记免疫金溶胶。从金纳米粒子粒径的选择、在金溶胶中加入苯硫酚的量及反应时间、抗体对标记金溶胶标记分子的SERS信号的影响进行了研究。     

基于金/银纳米三明治结构SERS特性的超灵敏前列腺特异性抗原检测

基于金/银纳米三明治结构的表面增强拉曼散射(SERS)特性, 实现了前列腺特异性抗原(PSA)高灵敏度免疫检测, 检测结果具有特异性。采用化学还原法制备金、银纳米粒子, 用4-巯基苯甲酸(4-MBA)及前列腺特异性抗体(Anti-PSA)链接金、银纳米粒子制备免疫探针, 在硅片表面原位生长金、银纳米粒子并链接Anti-PSA制备得到免疫基底。将免疫探针、免疫基底以及PSA组成三明治结构, 进行基于SERS特性的免疫检测。实验结果表明, 纳米银免疫探针与纳米银免疫基底组成的三明治结构具有最佳的检测效果, PSA的检测灵敏度低至1.8fg/mL(3.490吆^-18mol/L), 可应用于前列腺癌症的早期检测与诊断。     

对巯基苯胺在拉曼免疫检测中的应用

文章以对巯基苯胺(PATP)作为标记分子,研究其在金电极上的吸附.发现对巯基苯胺分子是采用苯环直立于电极表面的吸附方式吸附于电极表面的.用于免疫检测时,对巯基苯胺分子先通过直立吸附的方法达到满单层吸附,然后通过胺基与抗体分子的羧基相连,形成一种复层结构,再与基底结合,得到固相抗体-抗原-标记抗体"三明治"结构.借助抗体上标记金纳米粒子的SERS信号达到单组分生物免疫检测的目的.     

Ag核Au壳复合纳米粒子为标记溶胶免疫检测的SERS研究

以种子生长法合成Ag核Au壳复合纳米粒子,苯硫酚分子(TP)在其表面的SERS增强随Au摩尔比例的增加呈现先增强后减弱的趋势,其最大增强为相应Ag纳米粒子的10倍。将标记分子TP,羊抗小鼠抗体固定在Ag核Au壳复合纳米粒子表面形成标记免疫溶胶,其与被基底捕获抗原分子发生免疫识别,通过TP分子的SERS信号进行免疫检测。     

SERS标记免疫检测研究进展

表面增强拉曼光谱(SERS)用于标记免疫检测是标记免疫学与SERS相结合的一门新型的研究技术。20世纪70年代,SERS现象的发现与证实给拉曼光谱技术的研究注入了新的活力。SERS因具有高灵敏度、较高选择性以及适合水溶液物质结构研究等特点,近年来已在生物医学研究领域中显示出独特的潜在应用前景。在标记免疫领域,SERS标记免疫研究更是得到了迅速的发展,成为了国内外的研究热点。文章从SERS标记免疫检测灵敏度的提高、非特异性吸附的降低、多组分检测等三方面叙述了SERS标记免疫检测的原理、特点、存在问题及最新发展。归纳了目前提高SERS标记免疫检测灵敏度的研究技术,阐述了研究中非特异性吸附带来的负面影响,简介了实验室的多组分研究工作。同时,对SERS标记免疫技术未来的研究方向与发展前景进行了展望。     

一种用表面增强拉曼光谱进行免疫检测的方法

一种结合表面增强拉曼(SERS)技术和纳米粒子标记技术,通过银增强来实现免疫检测的方法。将p-巯基苯甲酸(MBA)作为探针,固定在免疫金溶胶粒子表面形成纳米标记,其与被基底捕获抗原分子发生免疫识别。通过银增强技术,在"三明治"结构对探针进行拉曼检测。     

基于SERS标记免疫分析技术苹果中多菌灵的检测方法

多菌灵(Carbendazim,甲基-1H-2-苯并咪唑氨基甲酸酯)是一种内吸性广谱杀菌剂，广泛应用于苹果种植过程中的轮纹病和褐斑防治，若不合理使用会在苹果中残留危害消费者身体健康。采用表面增强拉曼光谱免疫分析技术(surface-enhance Raman spectroscopy combined immunoassay,SERSIA),以SERS高灵敏度和分子“指纹”图谱特性为基础，结合免疫特异选择性，实现苹果中多菌灵的微/痕量检测。制备核-分子-壳“三明治式”结构的Au@M@Ag纳米SERS材料和结合抗原的SERS免疫探针，在包被抗体的Fe₃O₄磁性纳米材料可分离功能下，实现多菌灵的特异性检测。采用透射电镜(transmission electron microscope, TEM)、紫外-可见光谱和拉曼光谱等方法对制备的材料进行表征并优化了实验参数。研究表明多菌灵浓度与标记分子4-巯基苯甲腈的2 227 cm^-1处特征峰强度值在0.5～300 nmol·L^-1范围内具有良好的线性关系，同时...     

表面增强拉曼光谱对免疫球蛋白IgG分子与银基底作用的研究

采用高灵敏度的表面增强拉曼光谱(SERS)技术,以具有强SERS信号的金纳米粒子标记抗体,以此SERS标记免疫金溶胶为探针,结合扫描电镜技术,研究免疫球蛋白羊抗小鼠IgG分子与银基底的相互作用。我们发现,羊抗小鼠IgG分子可直接与银基底通过疏水作用或形成Ag-S键而牢固结合。为消除这种非特性吸附,本文以小牛血清白蛋白(BSA)封闭银基底,取得了较好的效果。     

掺磷TiO_2优化TiO_2/MBA/Ag三明治结构的SERS性能

本文以磷酸为磷源,通过溶胶水热法制备磷掺杂TiO_2,利用Lee和Meisel的方法制备银溶胶,以4-巯基苯甲酸(MBA)为探针分子,通过构建TiO_2/MBA/Ag三明治结构,研究磷掺杂二氧化钛对该基底表面增强拉曼(SERS)性能的提升。通过TEM、XRD、XPS、DRS和拉曼光谱图表征二氧化钛的形貌结构、化学组成、光学和拉曼性能,结果表明,制备出的磷掺杂二氧化钛为锐钛矿型纳米颗粒,粒径范围6~12nm,XPS显示磷以P~(5+)替代了Ti~(4+),形成O-P-O键掺入TiO_2的晶格中,当磷的掺杂量在1.77%时,TiO_2/MBA/Ag三明治体系具有最佳的SERS信号,这是因为适量的磷掺杂降低了TiO_2的能带间隙,丰富TiO_2的表面态,这能促进TiO_2向MBA分子的电荷转移。     

非放射性碘标记-电感耦合等离子体质谱用于免疫分析研究

研究了非放射性碘标记-电感耦合等离子体质谱免疫分析体系,该体系以兔抗大肠杆菌作为模型抗原,羊抗兔IgG蛋白为抗体,建立了一种新的免疫分析方法。实验中采用溴代琥珀酰胺(NBS)为氧化剂,实现非放射性127I标记羊抗兔IgG蛋白,探索了标记的最佳条件,标记率为63.12％; 标记物在Sephadex G50柱上分离纯化后,研究了I-羊抗兔蛋白的稳定性,结果表明,标记物在4 ℃放置96 h后几乎没有碘脱落,并保持一定的活性。实验中采用聚苯乙烯96孔板作为固相载体进行免疫反应,以电感耦合等离子体质谱为检测手段,方法的检出限为0.12 mg·L-1,RSD(n=9)为3%; 该体系也可适用于其他活性蛋白、核酸等的标记和分析。     

SERS在标记免疫检测中的应用

标记免疫分析 ,是将多种标记示踪技术的高度灵敏性和医学免疫抗原抗体反应的高度特异性相结合的产物 ,因此具有极良好的微量分析效果 ,是生物活性物质分析方法上的新领域。2 0世纪 70年代中后期 ,表面增强拉曼散射 (SERS)效应的发现与证实 ,给拉曼光谱的研究应用注入了新的活力 ,特别是在生物医学领域 ,SERS被大量应用。文章综述了SERS应用于标记免疫分析的研究状况 ,将已有的研究成果进行了系统阐述和归纳 ,并简要介绍本实验室在这方面做的一些工作     

Detection of the potential tumor marker of AFP using surface‐enhanced Raman scattering‐based immunoassay

The development of rapid, highly sensitive detection methods for α‐fetoprotein (AFP) is very important. As hepatocellular carcinoma is closely related to the level of AFP in the blood, it is necessary to maintain an AFP concentration below the safety limit. In this paper, we propose a universal, rapid, sensitive, and highly specific immunoassay system utilizing gold nanoparticles (AuNPs) and surface‐enhanced Raman scattering (SERS). This new system features a sandwich structure combining mercaptobenzoic acid‐labeled immunogold nanoparticles with the antigen and the antibody atop a pre‐designed substrate made of a glass slide modified with AuNPs. This SERS‐based immunoassay can detect AFP concentrations as low as 100 pg/ml, which is a significant improvement on the capabilities of the enzyme‐linked immunosorbent assay method. A good linear relationship between the SERS peak intensity and the logarithm of antigen concentrations (from 1 ng/ml to 100 ng/ml) was observed. This technique provides an effective model for the detection of biomarkers in medical diagnostics, criminal investigation, and other fields. Copyright © 2013 John Wiley & Sons, Ltd.     

电解法制备纳米银溶胶及其SERS活性研究

分别用柠檬酸三钠溶液、硝酸银和聚乙烯醇混合液作为电解液,用银棒作为电极,加上7 V直流电压,通电1 h,用电解方法得到了纳米银溶胶。为测试该纳米银溶胶是否具有表面增强拉曼散射1(SERS)活性,选用了阳离子型分子碱性品红(Fuchsine basic)、亚甲基蓝(Methylene blue),阴离子型分子苯甲酸(Benzoic acid),甲基橙(Methyl orange)、中性分子吖啶橙(Alcidine orange)、苏丹红(Sudan red)作为测试分子,进行SERS研究,结果发现用两种电解液制备的纳米银都具有很强的SERS活性,但用硝酸银和聚乙烯醇混合液作为电解液制备的纳米银溶胶具有更广泛的SERS 活性。在该方法制备的纳米银上,得到了在常规方法制备的胶态纳米银上及用柠檬酸三钠溶液作为电解液制备的纳米银上得不到的甲基橙分子的SERS谱,对可能的原因进行了讨论。     

多环芳烃的表面增强拉曼光谱探测与分析

首次实现了以参数优化的金溶胶为表面增强拉曼散射(SERS)活性基底探测水中痕量的多环芳烃。采用化学还原法制备不同颗粒大小的金溶胶,实验确定了632.8 nm激发光下的最优金纳米颗粒的平均粒径为(32±3) nm,并以此金溶胶为基底,探索pH值对多环芳烃增强效果的影响,发现pH=13效果最佳,与pH=6相比谱线绝对强度提高约20倍。以粒径为(32±3) nm,pH=13的金溶胶为活性基底对不同浓度萘、菲、芘溶液进行了SERS光谱探测,探测到的最低浓度分别为20,4和4 nmol·L-1,特征峰强与浓度呈线性关系,线性拟合相关系数均在0.985以上,三者混合溶液的SERS光谱可清晰分辨出各自的特征峰。结果表明,该实验所采用的SERS活性基底灵敏度较高,具有广阔的应用前景。     

应用银溶胶膜探测水中抗生素的表面增强拉曼光谱研究

以自组装法制备的银溶胶膜为表面增强拉曼散射活性基底实现了对水中抗生素的痕量检测。采用微波加热法制备银溶胶,自组装法制备银溶胶膜。通过改变银溶胶的pH值及镀膜的次数,研究其对抗生素增强效果的影响。实验发现,采用不同pH值的银溶胶镀膜所获得的银溶胶膜的增强效果有很大差异,当银溶胶pH=4,且镀膜次数为五次时,增强效果最佳。以此银溶胶膜为基底对三种抗生素(氯霉素、环丙沙星、恩诺沙星)进行了SERS检测,可以检测到的最低浓度分别为120,15,120 nmol·L-1。结果表明,利用改进方法制备的银溶胶膜,可以对水中抗生素进行痕量检测,为实现养殖水中残留抗生素的检测提供了方法。     

Detection of protein molecules by surface‐enhanced Raman spectroscopy‐based immunoassay using 2–5 nm gold nanoparticle lables

Here we report the synthesis of 2–5 nm size gold nanoparticle labels for surface‐enhanced Raman Spectroscopy (SERS) based immunoassay to detect protein molecules. The Au nanoparticles were conjugated with fluorescein isothiocyanate (FITC) and goat anti‐h‐IgG (immunoglobin) and the resultant particles were used for the detection of h‐IgG. Commercially available nitrocellulose strip and silver enhancement method were used for SERS‐based immunoassays. The FITC acts as a Raman probe, and vibrational fingerprint of this molecule was used for the detection of h‐IgG in concentration ranging from 1 to 100 ng/µl. Our Raman probe is robust and small in size and has high water solubility with minimum steric effect during antigen–antibody binding. Copyright © 2007 John Wiley & Sons, Ltd.     

Multianalyte immunoassay based on surface‐enhanced Raman spectroscopy

In this paper, two immunoassay methods based on SERS are developed for multiplex analysis, both of which stemmed from the concept of forming a sandwich structure ‘capture antibody substrate/antigen/Raman‐reporter‐labeled immuno‐nanoparticles’. They are two‐molecule labeled one‐nanoparticle and one‐molecule labeled two‐nanoparticle methods. In both the methods, two different antibodies covalently bound to a solid substrate can specifically capture two different antigens from a sample. The captured antigens in turn bind selectively to their corresponding antibodies immobilized on Raman‐reporter‐labeled nanoparticles. Multianalyte immunoassay is successfully demonstrated by the detection of characteristic Raman bands of the probe molecules only when the antigen and antibody are matched. Copyright © 2007 John Wiley & Sons, Ltd.