用表面等离子体子共振传感器测定人心肌肌钙蛋白I的研究

采用自组装表面等离子体子共振(SPR)传感装置,固定入射角,以波长为变量,以CCD为检测系统,用对金和抗体均有较强吸附作用的葡萄球菌A蛋白作为基底膜,观测了人心肌肌钙蛋白I的抗体和抗原之间免疫反应的动力学过程,并进行了人心肌肌钙蛋白I的定量测定.结果表明,人心肌肌钙蛋白I的浓度在5.0～50μg/L范围内与传感器的响应值呈线性关系.     

基于表面等离子体子共振的B因子传感器

以分辨率较高的一米光栅单色仪为分光系统,光电倍增管为检测系统,改进了自行组装的表面等离子体子共振(SPR)传感装置,提高了仪器的检测能力约50倍,对于发展改变波长模式的SPR传感器具有重要意义。以对金和抗体均有较强吸附作用的葡萄球菌A蛋白为基底膜,观测了人的B因子抗体和抗原之间免疫反应的动力学过程,并研究了B因子的定量测定。结果表明,B因子抗原的浓度在0.02～5μg/mL范围内与信号的响应值呈线性关系。该传感器灵敏度高,选择性和重现性均好。     

SERS标记的金纳米棒探针用于免疫检测

报道了基于金纳米棒表面增强拉曼散射(SERS)的免疫检测. 将拉曼活性分子对巯基苯甲酸吸附于金纳米棒表面, 制备出SERS标记的金纳米棒探针. 该探针和蛋白抗体结合形成SERS标记抗体. 通过SERS标记抗体、待测抗原和俘获抗体(固体基底上修饰的抗体, 即俘获抗体)之间的免疫应答反应, 将金纳米棒探针组装到固体基底上, 形成SERS标记抗体-抗原-俘获抗体 “三明治”夹心复合体. 待测抗原浓度越大, 固体基底上俘获的金纳米棒探针的数目越多, 从而可通过SERS信号的强弱来检测待测抗原的浓度. 由于金纳米棒的表面等离子体共振(SPR)峰位置可以在较宽的范围内调控, 可通过激发光和SPR的耦合来提高SERS信号, 从而提高免疫检测的灵敏度. 单组分抗原可检出的浓度范围高于1×10－8 mg/mL.     

蛋白A定向固定抗体的纤维蛋白压电免疫传感器的研究

将9MHz双面镀金石英晶体浸入蛋白A溶液中,在晶体电极表面形成一层均匀的蛋白A薄层,用于定向固定人体纤维蛋白抗体.在蛋白A层上形成一层有序致密的自组装抗体分子膜,研制成一种新型的用于人体纤维蛋白检测的压电免疫传感器.比较了3种固定抗体方法的效果,从传感器的灵敏度、稳定性、重现性等考虑,蛋白A吸附法优于聚乙烯亚胺及牛血清白蛋白固定抗体的方法.研究了蛋白A浓度、抗体效价以及抗原抗体反应时间等对传感器灵敏度的影响,考察了电极的选择性和再生能力.纤维蛋白在1×10^-4～1×10^-2g/L浓度范围内有良好响应.     

波长检测型表面等离子体子共振生物传感器测定β-环糊精与血清白蛋白的相互作用

采用自行组装的表面等离子体子共振(SPR)传感装置, 固定入射角, 以波长为变量, 以电荷耦合器件(CCD)为检测系统, 用对金和蛋白质均有较强作用的巯基丙酸作为基底膜, 分别监测了β-环糊精(CD)与人血清白蛋白(HSA)、牛血清白蛋白(BSA)反应的动力学过程, 并分别计算了它们的动力学常数、热力学常数及键合百分率. 此外, 对传感器的再生性也进行了研究. 结果表明, β-CD与HSA, BSA相互作用的平衡常数分别是7.79和51.00 μmol/L, 且键合百分率都很高, 分别是98.77%和94.25%. 这些结果有力地说明了β-CD作为药物载体, 可以提高生物利用度, 延长药物半衰期.     

SPR免疫竞争法研究小分子吗啡与其抗体间作用的动力学特征

表面等离子体共振技术(SPR)主要应用于生物大分子相互作用的研究,本文采用溶液竞争法,测定了小分子吗啡与其抗体作用的结合常数K₁,并计算了吗啡抗体与吗啡化牛血清白蛋白的结合常数K₂.证明了多抗对抗原的亲和力较单抗大,并表明大分子蛋白质的存在对抗体与待测物的结合有阻碍作用.     

蒽醌类药物与人血清白蛋白相互作用的研究

介绍了自行组装的波长检测型表面等离子体子共振(SPR)传感装置的原理和构造。应用此SPR传感器研究了三种蒽醌类药物与人血清白蛋白的相互作用,并分别计算了它们作用的动力学常数、热力学常数及结合百分率。结果表明,这些蒽醌类药物与人血清白蛋白都有不同程度的结合。     

SEC1酶免疫电极免疫反应的AFM和电化学方法研究

将一种肠毒素抗体共价耦联于自组装的金电极表面 ,利用原子力显微镜识别抗原抗体在多种实验条件下的形貌并通过统计数据进行定量分析 .用作控制实验的是非特异性牛血清白蛋白(BSA)抗原以及低浓度的SEC1抗原 .另外 ,酸性溶液可以打破抗原与抗体之间的结合从而使得生物电极可以被重复使用 .电化学实验支持了AFM的测试结果     

肿瘤坏死因子与可溶性受体之间相互作用的动力学研究

采用表面等离子体共振(SPR)技术研究了肿瘤坏死因子(TNF)与其两种受体的胞外部分即可溶性受体(TNF sRI/Fc Chimera和TNF sRII/Fc Chimera)的相互作用的动力学性质。采用两种方式进行研究:在传感片上氨基偶联固定TNF,测定其与溶液中两种可溶性受体相互作用;在传感片上固定Protein A,通过其与嵌合蛋白TNF sRI/Fc Chimera和TNF sRII/Fc Chimera分子上Fc片段的特异性作用,将可溶性受体"捕获"固定在传感片上,再测定受体与溶液中TNF的相互作用。结果表明,两种固定方式测定的动力学参数相吻合,TNF与其可溶性受体的亲和常数KD大于10"9mol/L,远高于一般抗体-抗原间的亲和常数(KD=10"5～10"7mol/L)。     

可溶性人源含硒抗体酶GPx的研究

对噬菌体展示人单链抗体库进行筛选,得到与半抗原S-二硝基苯取代的谷胱甘肽二丁酯特异结合的单链抗体3B10。用计算机模拟分析了单链抗体的空间结构,发现抗原结合的CDR3区位于抗体的表面,推测其可能进一步参加硒化反。利用突变引物,在大肠杆菌中表达了可溶性抗体蛋白,并用化学方法将催化必需基团硒代半胱氨酸（Sec）组装到3B10抗原结合部位,获得了具有谷胱甘肽过氧化酶活力的人源抗体酶。动力学研究结果表明,抗体酶和天然酶一样,符合乒乓反应机制。     

An optical immunosensor based on surface plasmon resonance for determination of bFGF

An optical immunosensor based on surface plasmon resonance (SPR) has been developed for immunosensing. The sensor is designed on the basis of fixing incident angle of light and measuring the reflected intensities in the wavelength range of 400-800 nm simultaneously. The SPR spectrum was shown in terms of reflected light intensities versus wavelengths of incident light. The intensity of the reflected light reaches the minimum at the resonant wavelength. Molecular self-assembling in solution is used to form the sensing membrane on gold substrate. The kinetic processes of sensing monolayer formation were studied. The basic fibroblast growth factor, a kind of basic polypeptide, was determined in the concentration range of 0.24-9.6 μg/ml. Under optimum experimental conditions, the sensor has a good repeatability, reversibility and selectivity.     

Immunosensor Based on Surface Plasmon Resonance for Antigen Recognition

A novel immunosensor based on surface plasmon resonance（SPR） has been developed for the recognition of antigen. The sensor was designed on the basis of the fixed angle of incidence and measuring the reflected intensities in a wavelength range of 430--750 nm in real-time. An ultra-bright white light-emitting diode（LED） was used as the light source. Molecular self-assembling in solution was used to form the sensing membrane on gold substrate. It has been seen that the sensitivity of the SPR sensor with 3-mercaptopropionic acid（MPA）/protein A（SPA） sensing membrane is considerably higher than that with MPA or SPA modified sensing membrane. The kinetic processes on the sensing membrane were studied. The human B factor（Bf）, an activator of complement 3（C3）, was recognized among the other antigens. This sensor can also be used for other antigen/antibody or adaptor/receptor recognition. Under optimized experimental conditions, the sensor has good selectivity, repeatability, and reversibility.     

基于金银合金薄膜的高灵敏度宽光谱表面等离子体共振成像传感器

报道了一种基于金银合金薄膜的宽光谱表面等离子体共振成像(SPRI)传感器,该传感器能够对吸附在薄膜局部或整个表面上的生化分子进行原位定量检测,而且与常规的金膜SPRI传感器相比,检测成本更低,检测灵敏度更高。利用质量比1:1的金银合金溅射靶在玻璃基板上淀积了厚约50 nm的均匀的金银合金薄膜。利用实验室自制的Krestchmann结构多功能平台在不同入射角下测试了金银合金薄膜被纯水覆盖后的SPR光谱和SPR彩色图像。基于色相算法计算获得了每个SPR彩像的二维色相分布及其平均色相,从而使得宽光谱SPRI传感器能够利用平均色相作为灵敏度参数进行定量检测。实验确定了平均色相对溶液折射率(RI)变化和分子吸附最为敏感的光谱区间是595–610 nm之间。在这个窄光谱范围内,平均色相与共振波长呈线性关系,其斜率为?hue/?λR=7.52 nm~(-1),这意味着基于色相的RI灵敏度是基于共振波长的RI灵敏度的7.52倍,这一结论已被实验证明。将SPRI传感器的起始共振波长设定在色相敏感光谱区间内之后,实验测得基于色相的RI灵敏度为S=29879 RIU~(-1),比在相同条件下测得的金膜SPRI的灵敏度高8倍。利用时间分辨宽光谱SPRI方法实时监测了牛血清白蛋白(BSA)分子在金银合金薄膜表面的非特异性吸附,从实验测得的平均色相随时间的变化曲线可知BSA吸附达到平衡所需时间约15 min。研究结果表明,基于金银合金薄膜的SPRI传感器具有动态定量检测蛋白质分子吸附过程的功能。     

表面等离子体激元共振光化学传感器的研究

自行设计并组装了一套全波长表面等离子体激元共振光化学传感器实验装置;研究了以银膜为基底的传感器的稳定性、可逆性及干扰情况;在575nm波长处,测定乙醇的灵敏度为4.6×10^-4折射率单位,RSD≤1.4%,定量测定范围为0.5%～70%.分析了一些实际样品,结果与标准方法的测定值相吻合.     

小型波长检测型表面等离子体共振分析仪的设计与研制

小型波长检测型表面等离子体共振(SPR)分析仪采用固定光的入射角,监测共振波长变化的测量模式,可进行多波长同时测量.设计并组装了SPR分析仪中的微型光纤光谱仪,采用光导纤维输入被测光,固定全息衍射光栅分光,线阵CCD光电传感器检测,可检测的波长范围是500～900 nm,分辨率0.23 nm.自行编制了控制传感器数据采...     

Surface Plasmon Resonance Immunoassay for Ochratoxin A Based on Nanogold Hollow Balls with Dendritic Surface

Abstract

A surface plasmon resonance (SPR)‐immunosensor based on nano‐size gold hollow ball (GHB) with dendritic surface has been developed for detection of Ochratoxin A (OTA). A thionine thin film was initially electropolymerized onto the SPR‐probe surface, and then anti‐OTA monoclonal antibody (anti‐OTA) was immobilized onto the SPR‐probe surface by means of GHB conjugation. The binding of target molecules onto the immobilized antibodies causes an increase in the resonant angle of the sensor chip, and the resonant angle shift was proportional to the OTA concentration in the range of 0.05–7.5 ng/ml with a detection limit of 0.01 ng/ml at a signal/noise ration of 3. A glycine‐HCl solution (pH 2.8) was used to release antigen‐antibody complexes from the biorecognition surface. Good reusability was exhibited. Moreover, spiking various levels of OTA into three milk samples was assayed using the proposed immunoassay. Analytical results show the precision of the developed immunoassay is acceptable. Compared with the conventional enzyme‐linked immunosorbent assay, the proposed immunoassay system was simple and rapid without multiple labeling and separation steps. Importantly, the proposed immunoassay system could be further developed for the immobilization of other antigens or biocompounds.     

波长型SPR检测仪的灵敏度探讨

利用自行设计构建的可变入射角的波长型表面等离子体共振(SPR)检测仪, 在不同浓度的蔗糖溶液中测定了不同入射角度(80°~66°)的共振曲线, 经过处理得到共振峰位、半高宽及灵敏度随入射角和样品折射率变化的三维图像. 在此基础上探讨了波长型SPR检测仪的主要参数对仪器性能的影响, 从理论和实验上证明了影响灵敏度的主要因素为共振波长, 并且随着共振波长的增大, 检测灵敏度迅速提高.