毛细管电泳质谱联用技术测定肽和蛋白质混合物

以血管紧张素Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、P-物质和生长激素抑制剂混合物为测定对象,研究了未涂层柱、线性聚丙烯酰胺(LPA)涂层柱和胺涂层柱对毛细管电泳分离肽类混合物的影响.结果表明:适合质谱测定的缓冲液不能在未涂层柱上有效地分离5种肽类混合物,而pH为5.O和4.5的NH₄Ac缓冲液却能在LPA涂层柱和胺涂层柱上很好地分离上述物质.用CE-ESI-MS法分离鉴定了5种生物活性肽和蛋白质混合物中的肌红蛋白、碳酸酐酶Ⅱ,实测了促红细胞生成素(EPC))的胰酶消解肽图,并对CE-MS联用测定中的影响因素进行了讨论.     

96孔板法用于高通量血管紧张素转化酶抑制剂体外检测

为在体外迅速检测血管紧张素转化酶抑制剂( ACEI)的抑制活性,选用96孔板,以呋喃丙烯酰三肽(FAPGG)为模拟底物,通过检测血管紧张素转化酶(ACE)酶解FAPGG生成N-[3-(呋喃)丙稀醇酰-2-苯丙氨酸( FAP)和双甘氨肽(GG)后340 nm处吸光值的下降衡量ACE的活性,采用加入ACEI前后ACE的活性变化衡量ACEI的活性.考察了不同缓冲体系、Cl-浓度、ACE酶活性(ACE酶浓度)、缓冲体系的pH值等对上述检测模型反应体系的影响,建立了高通量降血压肽活性体外检测方法,本方法最多可同时检测96个样品的ACE抑制活性,上机分析时间仅需10 s.不同批次活性平行测定的相对标准偏差均小于0.001％,p=0.667＞0.05,各测定结果无显著差异,重现性好,精密度较高.采用本方法测定了商品血管紧张素转化酶抑制剂Captopril的IC50值为16.19 nmol/L,与文献报道的测定结果一致.     

高效毛细管电泳-激光诱导荧光检测生物活性肽的研究

使用毛细管电泳 -激光诱导荧光 -增强型电荷耦合器件(CE -LIF -ICCD)系统 ,用异硫氰酸荧光素(FITC)柱前衍生了亮脑啡肽、甲硫脑啡肽、血管紧张肽、P物质4种生物活性肽 ,优化了实验条件 ,在8min内 ,对它们进行了快速分离检测 ,血管紧张肽的质量检出限达到2.8×10-18 mol。     

毛细管胶束电动色谱法测定血管紧张素转化酶的活性

 建立了应用毛细管胶束电动色谱 (MECC)灵敏、快速的测定血管紧张素转化酶 (ACE)活性的方法。通过对电压、上样时间、电极缓冲液体系等影响因素的优化 ,探讨了方法的可行性 ,确立了最佳测定条件 (电压 :8 1kV ;上样时间 :1s;电极缓冲液 :2 0mmol/L硼酸盐缓冲液 (pH 9 0 ,含 5 0mmol/LSDS) ;检测波长 :2 2 8nm)。方法的最低ACE活性检测限为 5pmol/min(以 2倍的信噪比计 )。     

反相高效液相色谱/基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 分离鉴定螺蛳血管紧张素转换酶抑制肽

运用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对酶解螺蛳腹足肌得到的血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽进行两步分离提纯,第一步主要得到8个组分;选取其中活性最高的组分进一步分离,得到2个组分,其中活性较高组分的ACE半抑制浓度为43.5 μmol/L,基本为单一肽组分。对提纯的组分分别使用高效液相色谱/电喷雾离子质谱法(HPLC/ESI-MS)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF MS)进行分析,同时结合氨基酸组成分析结果,最终得到的肽链一级结构为Lys-Glu-Ile-Trp(KEIW),符合已知的高活性ACE抑制肽的结构规律。经过对两种方法分析过程的比较,认为ESI-MS可以得到多方面的信息,但无法确定肽的序列;MALDI-TOF MS可以得到精确的二级质谱图(m/z精确至0.0001),从而可以得到确定的肽的序列。     

血管紧张素转化酶活性抑制剂──丝素肽的分离、纯化和结构鉴定

 可溶性丝素粉末经碱性蛋白酶Alcalase水解后 ,其酶解产物对血管紧张素转化酶 (ACE)的活性有很强的抑制作用。采用凝胶过滤色谱SephadexG 15和反相高效液相色谱 (RP HPLC)对水解度为 2 0 %的酶解产物进行分离纯化 ,利用质谱鉴定其中一种ACE抑制剂是肽 ,其结构为Gly Tyr。     

高效毛细管电泳法同时测定多种神经肽物质的研究

用０．１ｍｏｌ／ＬｐＨ２．７磷酸缓冲液,在５０μｍ×６０ｃｍ熔融石英毛细管柱中、１２ｋＶ电位下对ＳＰ、ＮＫＡ、ＮＴ、ＳＳ及ＳＰ－片段等神经肽物质进行分离测定,对缓冲液及其ｐＨ值的选择进行研究。结果表明,高效毛细管电泳法是分析肽物质较为理想的方法。     

反相高效液相色谱-电喷雾质谱法分析食源血管紧张素转换酶抑制肽

利用反相高效液相色谱/电喷雾离子阱质谱法,直接分析从牦牛乳酪蛋白中酶水解得到的血管紧张素转换酶抑制肽粗产物。RP-HPLC显示具有活性的多肽粗产物含有3个主要成分,质谱同步测定各组分的分子量(m/z)分别为815.2,1680.1,962.2,然后选择[M H] 离子通过串联质谱(MS/MS)得到碎片离子,利用b离子和y离子互补的方法鉴定了多肽序列。三条肽分别为Leu-Pro-Tyr-Tyr,Pro-Leu-Pro-Leu-Leu-Gln,Phe-Leu-Pro-Pro-Tyr-Tyr。结果显示,所获得的多肽序列与牛乳酪蛋白一级结构中相应肽段的序列一致。     

神经网络在ACE抑制肽QSAR中的应用研

通过对天然氨基酸的457种物化性质参数进行主成分分析后得到SVHEHS描述符,用该描述符分别对血管紧张素转化酶(ACE)抑制二肽、三肽、四肽进行表征,并建立了肽结构与活性的神经网络模型。ACE抑制二肽神经网络模型的相关系数、交叉验证相关系数、均方根误差和外部验证相关系数分别为0.946、0.951、0.249、0.852,三肽模型分别为0.973、0.945、0.135、0.813,四肽模型分别为0.915、0.879、0.250、0.814。由此表明SVHEHS描述符结合神经网络对ACE抑制肽的建模效果及模型预测能力均较理想,在此基础上进一步通过平均影响值(Mean impact value,MIV)法确定了显著影响各类肽活性的结构因素,从而为新的强活性ACE抑制肽的分子设计提供了理论基础。     

O8肽的HPLC分析与制备研究

系统建立了化学合成小分子肽(08肽)的反相HPLC分离分析方法．考察了色谱填料种类、流动相组成及梯度条件对样品分离的影响．通过从分析型到半制备型分离线性放大过程中分离条件与分离效果的关系的探讨．建立了等度洗脱条件下较大规模地分离制备该小肽的方法试验结果表明：硅胶基质的色谱柱比聚合物基质的色谱柱更适合于分离该小肽,而粒径(5μm．10μm)对分离的影响不大;较缓的梯度条件可以明显改善分离,但所需分离时间延长一在制备分离中应综合考虑分离效果与运行时间的关系。     

毛细管电泳法同时测定血清中的左旋多巴和甲基多巴

建立了毛细管电泳-紫外检测同时测定血清中左旋多巴和甲基多巴的方法。以40 mmol/L硼砂（pH 9.5）为分离缓 冲溶液,在3.45 kPa（0.5 psi）压力下进样7 s、分离电压22 kV、检测波长200 nm、温度25 ℃的条件下进行测定,两 种物质获得了较好的分离。甲基多巴和左旋多巴分别为1.0~64.0 mg/L和1.0~71.0 mg/L时与峰面积呈良好的线性关系, 线性相关系数分别为0.9998和0.9994,检出限分别为0.6和0.8 mg/L(以信噪比为3计)。将该法用于血清中甲基多巴和左 旋多巴的测定,回收率为82.8%~88.8%,相对标准偏差为2.10%~2.63%。     

Microemulsion electrokinetic chromatography of proteins.

Microemulsion electrokinetic chromatography was used to separate a test mixture of proteins effectively. The separation was carried out in a 42.5 cm (to the detector) x 50 microns I.D. fused-silica capillary using a microemulsion system consisting of 80 mM heptane, 120 mM SDS, 900 mM butanol in 2.5 mM borate buffer, pH 8.5-9.5. Optimum separation conditions were investigated with respect to the running voltage, temperature, pH and the composition of microemulsion. Results were compared with those obtained in micellar electrokinetic chromatography and capillary zone electrophoresis. The examined method is practical and successfully applied to the assay of genetically engineering pharmaceuticals, recombinant human granulocyte macrophage colony stimulating factor injection and recombinant human granulocyte colony stimulating factor injection.     

胶束电动毛细管色谱法测定海洋沉积物中的苯、甲苯和二甲苯

 建立了用胶束电动毛细管色谱法（MECC）对海洋沉积物中的苯、甲苯和二甲苯进行 分析测定的方法 。用45 cm（到检测窗口40 cm）×75　μm i.d.毛细管柱,以75　mmol/L SDS-2　mmol/L 四硼酸钠溶液（外加体积分数为20%的甲醇）为缓冲液（pH 9.16）。当电压为25 kV、检测 波长为200 nm时,苯、甲苯和二甲苯在20 min内得到了良好的分离。用峰面积定量,线性范 围为4～50 mg/L,相对标准偏差在6.2%以内。测得海洋沉积物中的这些苯系物的质量比范围 为3.79～17.36 μg/g。     

毛细管区带电泳法测定血浆中的苯妥英钠

 建立了以毛细管区带电泳测定血浆中苯妥英钠含量的方法。此法具有良好的重现性和线性关系 ,日内、日间的平均相对标准偏差分别为 3.1%和 4 .7% ,平均回收率大于 95 % ,标准曲线的相关系数为 0 9985 ,是一种简便、快速、准确、灵敏的测定方法 。     

Simultaneous determination of phytoestrogens in different medicinal parts of Sophora japonica L. by capillary electrophoresis with electrochemical detection

A high-performance capillary electrophoresis with electrochemical detection (CE-ED) method has been developed for the determination of phytoestrogens from the pericarps and seeds of Sophora japonica L. in this work. Genistin, genistein, rutin, kaempferol and quercetin are important bioactive constituents in these plants. The effects of several factors such as the acidity and concentration of running buffer, the separation voltage, the applied potential and the injection time on the CE-ED procedure were investigated. Under the optimum conditions, the five analytes could be well separated within 18 min in a 75 cm length capillary (i.d. 25 microm) at the separation voltage of 16 kV in a 50 mmol L(-1) borax running buffer (pH 9.0). A 300 microm diameter carbon disk electrode was used as the working electrode positioned carefully opposite the outlet of the capillary in a wall-jet configuration at the potential of +950 mV (vs SCE). Detection limits (S/N = 3) ranged from 1.1 x 10(-7) to 2.8 x 10(-7) g mL(-1) for all fi ve analytes. This method was successfully used to analyse dried Flos sophorae immaturus, pericarps and seeds of dried Fructus sophorae after a relatively simple extraction procedure, and the assay results were satisfactory.     

毛细管区带电泳法拆分匹伐他汀钙对映体

建立了匹伐他汀钙对映体的毛细管区带电泳(CZE)拆分方法。分别考察了电泳电压,缓冲溶液种类、浓度及pH值,环糊精种类及浓度,添加剂种类及浓度等参数对实验结果的影响,从而确定了匹伐他汀钙对映体的最佳拆分条件: 电泳电压为18 kV;运行缓冲溶液为80 mmol/L的Tris-HCl缓冲体系,pH值为3.20,其中含有50 mmol/L HP-β-CD(羟丙基-β-环糊精)和5 mmol/L SDS(十二烷基磺酸钠);采用重力进样,进样高度17 cm,进样时间为2 s。在优化的实验条件下,匹伐他汀钙对映体得到了较好的分离,分离度可达2.17。实验结果表明该方法可用于匹伐他汀钙对映体的分离,具有快速、便捷、准确性好等优点。     

毛细管区带电泳法分离白花丹参中主要的水溶性活性成分

为建立一种快速分离白花丹参水溶性有效成分的毛细管区带电泳体系,分别考察了缓冲液浓度、缓冲液pH、运行电压、检测波长对样品的分离度、迁移时间等因素的影响。最终优化的分离条件为:5 mmol/L硼砂缓冲液（pH 7.5）;毛细管柱75 μm×60.2 cm,有效长度50 cm,压力进样(3.45 kPa×4 s),27.5 kV恒压分离,210 nm波长下检测,柱温25 ℃。在优化的条件下,8 min内使白花丹参样品中的原儿茶醛、丹参素、原儿茶酸组分达到完全基线分离。     

高效毛细管区带电泳技术测定奥丹西隆注射液的含量

介绍了以磷酸－磷酸盐为缓冲溶液、应用高效毛细管区带电泳技术对奥丹西隆注射液的含量进行测定的方法,实验中将奥丹西隆注射液稀释１０倍后进样。平均回收率为９６．５％,相关系数为０．９９６５,精密度变异系数小于５％。方法简便、快速、准确、进样量少、灵敏度高。     

毛细管电泳法测定非水溶性药物——复方降压片

在区带电泳中,应用在背景电解质中加入乙腈的方法对复方降压片的两种主要成分利血平、双氢氯噻嗪进行了分离和定量测定。５次重复测定的相对标准偏差小于３％,检出限分别为０．２６９ｍｇ／Ｌ和１．８４ｍｇ／Ｌ,并对ｐＨ值、磷酸盐浓度及乙腈用量进行了考察。     

毛细管电泳中影响径向电场控制电渗的主要因素

利用自制的二维电场毛细管电泳系统研究了不同因素对径向电场控制电渗能力的影响,发现缓冲液的ｐＨ值、浓度、种类以及管壁表面状态、管径等对电渗的电场调控有关键性的影响。有趣的是,添加剂不影响电场的调控能力,而杯芳烃涂层毛细管却能提高电渗对径向电场的响应能力。利用这种涂层效应有可能实现较高ｐＨ值下电渗的电场调控。