高效液相色谱法测定小鼠肝脏中的两种苯并三唑类紫外线吸收剂

建立了小鼠肝脏中UV-327和UV-328两种苯并三唑类紫外线吸收剂的高效液相色谱测定方法。样品经正己烷-丙酮(体积比1:1)提取,Waters Symmetry~?C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分离,以甲醇为流动相,检测波长为340 nm。紫外线吸收剂UV-327和UV-328均在0.05～20.0μg/mL范围内线性关系良好(r≥0.9998),检出限和定量限分别为0.01μg/mL和0.03μg/mL。UV-327和UV-328低、中、高3种浓度(0.20、2.00、16.0μg/mL)加标样品的回收率为94.9%～98.5%与97.0%～102.2%;日内精密度为3.7%～5.6%与3.8%～5.3%;日间精密度为2.8%～8.2%与2.8%～9.5%;提取回收率为94.2%～98.9%与94.3%～97.8%;基质效应为92.5%～110.8%与92.3%～112.3%。该方法准确、简便,适用于小鼠肝中紫外线吸收剂UV-327和UV-328的测定。     

明胶改性聚醚醚酮微载体的制备、表征及性能

微载体因其具有较高的表面积/体积比等优点可以大大提高哺乳动物细胞培养效率,被广泛应用于生物制药和组织工程等领域。 但微载体多为一次性使用,不耐高温,且主要依赖进口,价格昂贵,因而限制了其国内的应用和推广。 聚醚醚酮(PEEK)材料具有良好的生物相容性、化学稳定性及耐高温等特性,是一种优异的微载体材料,但存在熔点高,加工方法单一和生物惰性等缺陷。 本文以浓硫酸为溶剂,乙醇溶液为萃取剂,采用气流辅助滴注/相分离法,将PEEK制备成448 μm左右,尺寸均匀的微球;经氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)处理,获得表面氨基化修饰的PEEK微球(PEEK-N);进一步,以N,N'-羰基二咪唑(CDI)为活性中间体,将明胶分子接枝到PEEK-N微球表面,获得表面明胶修饰的PEEK微载体(PEEK-G)。 对材料的物理化学性质、表面接枝量进行表征;并通过体外细胞实验评估其细胞毒性、细胞粘附效率和细胞增殖能力。 结果显示,通过该方法制备成功了3种不同明胶接枝含量的PEEK细胞微载体(PEEK-G1,PEEK-G2,PEEK-G3),其中明胶含量较高的PEEK-G3毒性最低,细胞粘附和增殖效果最理想。     

Effect of Sodium Fluoride on the Rate of Sperm Deformity in Male Mice

为探讨氟化钠对雄性小鼠精子畸形的影响,选取50只成年雄性小鼠随机分为5组:氟化钠染毒高剂量组(34 mg/kg)、中剂量组(17 mg/kg)、低剂量组(8.5 mg/kg)、环磷酰胺阳性对照组( 50 mg/kg)、生理盐水空白对照组,采用经口灌胃染毒,1次/d,连续5d,于首次染毒后的第35天颈椎脱臼将小鼠处死,取睾丸和附睾称质量,计算脏器系数；同时取附睾制片,观察精子形态,计数小鼠精子畸形率.结果表明,氟化钠染毒各组睾丸、附睾脏器系数与空白对照组比较,差别无统计学意义(P＞0.05),染毒各组精子畸形率普遍高于空白对照组,差别有统计学意义(P＜0.001),且随着染毒剂量的增加精子畸形率也有相应升高,呈现一定的剂量-反应关系(r=0.954,F=20.098,P＜0.05,R2=0.909).提示氟化钠能使雄性小鼠精子畸形率明显升高,具有一定的生殖毒性,能影响小鼠生殖功能,对小鼠生殖功能造成损害.     

模拟微重力条件下C离子辐射对小鼠生殖器官的影响

探究模拟微重力条件下不同剂量C离子辐射对雄性动物生殖器官的急性影响, 以期了解空间环境辐射所致机体生殖系统的损伤。采用小鼠尾部悬吊模型地面模拟微重力状态1周后, 利用重离子加速器提供的C离子辐照处理, 检测了生殖器官脏器系数及精子密度、组织形态变化、DNA损伤以及细胞凋亡各项指标。结果表明, 微重力和C离子辐射均能引起睾丸损伤, 且1 Gy单纯辐照组中损伤最为严重。此外发现, 模拟微重力能够在一定程度上降低辐射诱导的损伤, 其内在机制有待于进一步的研究。In this paper it was investigated that the effect of modeled microgravity on the acute injury induced by low doses of carbon ions in the male reproductive organs of mice, assessing the risk associated with the space environments. In our study, outbred Kunming mice were stimulated in microgravity by tail suspension, and then were irradiated with the low doses of carbon ions diliuered by HIRFL, and measured the testis and epididymis coefficient, sperm number of epididymis, histological alterations, DNA strand breaks and cell apoptosis. The results demonstrated that carbon ions and stimulated microgravity could induce the damage in the present study. Moreover, most serious injury all occurred in the irradiation group. In addition, it was also found that the damage of the carbon ion irradiation combined microgravity group were lower than those of the irradiation group, while the related mechanism needs the further investigation.     

小鼠B7-H3-Fc融合蛋白的表达及其生物学活性的研究

目的:制备B7-H3-Fc融合蛋白,研究其对T细胞的共刺激作用.方法:首先采用PCR技术分别从pMD19-T/小鼠B7-H3和pMD19-T/hIgG1(Fc)重组载体中扩增出小鼠B7-H3胞外段基因和人IgG1重链Fc恒定区基因.通过重叠PER技术将2段基因连接成B7-H3-Fc,经EcoR I和Bgl Ⅱ双酶切后插入真核表达载体plRES2-EGFP构建成pIRES2-EG-FWB7-H3-Fc重组载体.脂质体法转染CHO细胞,经G418加压筛选能稳定分泌表达小鼠B7-H3-Fc融合蛋白的基因转染细胞,并经Western blot鉴定.该转基因细胞无血清培养后,收集细胞上清、超滤浓缩后行经Protein G柱纯化,获得纯品B7-H3-Fc融合蛋白.通过CCK-8以及ELISA方法检测小鼠B7-H3-Fc融合蛋白对T细胞体外增殖及细胞因子分泌的影响.结果:成功地构建了能稳定表达B7-H3-Fc融合蛋白基因的CHO转基因细胞株,该融合蛋白能够剂量依赖性地促进T细胞体外增殖及IL-2和IFN-γ等细胞因子分泌.结论:本研究提示B7-H3作为重要的共刺激分子,在调节T细胞免疫应答中发挥了正性共刺激作用.     

新型2-胺基-1,3,4-噻二唑类化合物的合成及其抗肿瘤活性的研究

设计合成了一系列新型的N1-(5-取代基-1,3,4-噻二唑-2-基)-N3-取代苯基-脲类化合物,并测定了它们的抗肿瘤活性.标题化合物对肿瘤转移的生物活性实验是以荷Lewis肺癌小鼠为模型的.生物活性表明部分标题化合物对肿瘤的转移和肿瘤生长具有较好的抑制作用.其结构经元素分析、红外光谱及1H NMR确证.     

二维液相色谱接口的改进及其在蛋白质组学研究中的应用

随着蛋白质组学、本草物质组学等组学概念的提出,所需分析的样品的成分越来越复杂,因此具有强大分离能力的多维液相色谱技术受到人们越来越多的关注。二维液相色谱中第二维的分离性能和速度是整个分离系统性能的关键。基于捕集柱模式,我们采用经特殊设计的流路系统,使得双捕集柱型接口具有预分离的功能。样品从第一维流出以后被富集在捕集柱1的柱头,经过脱盐后,正冲捕集柱,捕集柱1与第二维色谱柱联用对富集的样品进行分离,增加了第二维分离效率。当捕集柱上的样品全部被洗脱到第二维色谱柱上时,捕集柱2已经完成对第一维洗脱液中样品的捕集和脱盐,此时将阀进行切换,捕集柱2与第二维色谱柱直接相连进行洗脱。循环切换捕集柱1和捕集柱2,维持较高的阀切换频率,实现了第二维色谱柱的连续洗脱。因此保证了第二维分离具有较快速度,同时具有较高的分离效率。使用35 mm长捕集柱和十通阀为接口,以弱阴离子交换(WAX)色谱为第一维分离模式,以反相(RP)色谱为第二维分离模式,构建了WAX-RP二维液相色谱系统(2D-LC system)。以小鼠血清为样品对系统进行了初步评价。色谱流出曲线出现了明显的界面现象,这是由于捕集柱流动相中含有的较多盐分流出时的背景吸收造成的。同时,由于界面两侧的流动相黏度不同产生了黏性指进(VF)现象。当第二维色谱柱长度为50 mm时,理论上可将第二维分离效能提高70%。该接口可以应用于多种二维液相色谱模式,适用于蛋白质组学和本草物质组学研究中对于复杂样品的分离分析。     

多维离子交换色谱分离和串联质谱鉴定在小鼠肝脏膜蛋白质组分析中的应用

膜蛋白质在变性剂作用下能够较充分地溶解。根据这一特点,我们试图在变性剂溶液中采用串联离子交换色谱法分离小鼠肝脏膜蛋白质。将小鼠肝脏膜蛋白质溶解于含有4 mol/L尿素,20 mmol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)-盐酸缓冲液(pH 9.0)中,用Q-Sepharose FF和Sephacryl S-200HR树脂组成的色谱柱结合大部分溶解的膜蛋白质,然后采用氯化钠线性梯度洗脱蛋白质,分步收集后采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进一步分离洗脱组分的蛋白质。利用胶内胰蛋白酶消化技术将SDS-PAGE胶内分离的蛋白质降解为相应的肽段,然后以反相高效液相色谱分离和离子阱质谱仪鉴定肽段。根据文献报道和蛋白质的功能分类,在所鉴定的392个蛋白质中有306个可能为膜蛋白质或膜结合蛋白质。蛋白质的疏水性计算表明,GRAVY(grand average of hydropathicity)得分大于或等于0.00的蛋白质有83个。综上所述,我们有理由认为本实验方法基本符合小鼠肝脏膜蛋白质组学研究的要求。     

高效液相色谱法测定百草枯染毒后小鼠脑组织中8种单胺类神经递质的含量变化

应用高效液相色谱法测定小鼠脑组织中8种单胺类神经递质(去甲肾上腺素、肾上腺素、左旋多巴、多巴胺、二羟基苯乙酸、5-羟色胺、5-羟基吲哚乙酸和高香草酸)的含量,并研究其含量随百草枯中毒时间的长短而产生的变化情况。取小鼠36只,分为6组,每组6只。其中一组为对照组,其余5组的小鼠均按30mg·kg-1的剂量给予灌服百草枯,对照组小鼠灌服同体积的生理盐水。按给毒后达到6,12,24,48,72h时,用1%戊巴比妥钠溶液先后将其麻醉并在低温条件下取其脑组织。按1g∶7.5mL的比例在每份脑组织中加入组织匀浆液并匀浆30s,在4℃高速离心2次,每次15min,取其上清液供色谱分析。在Hypeisil GOLD aQ色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)上,用不同比例的甲醇和30mmol·L~(-1)磷酸二氢钾-磷酸缓冲溶液(pH 4.6)的混合液为流动相进行梯度洗脱,并用荧光检测器测定各组分的峰面积,用外标法定量。上述8种单胺类神经递质的线性范围均在1 000μg·L~(-1)以内,其检出限(3S/N)在0.34～5.26μg·L~(-1)之间。对样品重复测定5次,测得8组分测定值的相对标准偏差(n=5)在0.58%～4.2%之间,加标回收试验得出其回收率在90.8%～106%之间。同时测得了在百草枯染毒后3d内8种单胺类神经递质含量的变化情况,为进一步研究提供可靠依据。     

线刃型位错高斯光束在生物组织中偏振态的变化

基于广义惠更斯-菲涅尔原理,推导了生物组织传输中线刃型位错高斯谢尔模型光束交叉谱密度矩阵元的解析表达式,并比较了不同束腰宽度ω_0x、离轴距离d、刃型位错斜率p、空间相关长度σ_yy、σ_xy对光束轴上偏振度P(0,0,L)、方位角θ(0,0,L)和椭圆率ε(0,0,L)的影响。研究表明,线刃型位错高斯谢尔模型光束ω_0x越大,d越大,p越小,P(0,0,L)和ε(0,0,L)变化越大且极值越小。σ_xy越大,P(0,0,L)、ε(0,0,L)和θ(0,0,L)的绝对值越大。当σ_yy>σ_xx时,源处θ<0,反之θ>0。σ_yy与σ_xx差值绝对值越小,P(0,0,L)、θ(0,0,L)和ε(0,0,L)的极值越大。随传输距离增大,P(0,0,L)、θ(0,0,L)和ε(0,0,L)最终趋于稳定。