| 小鼠B7-H3-Fc融合蛋白的表达及其生物学活性的研究 |
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| 引用本文： | 严茹红,张光波,孙静,傅丰庆,张学光.小鼠B7-H3-Fc融合蛋白的表达及其生物学活性的研究[J].高分子学报,2011,26(12). |
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| 作者姓名： | 严茹红 张光波 孙静 傅丰庆 张学光 |
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| 作者单位： | 1. 苏州大学医学生物技术研究所,江苏苏州215004;苏州大学附属第二医院检验科,江苏苏州215004
2. 苏州大学医学生物技术研究所,江苏苏州,215004 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:制备B7-H3-Fc融合蛋白,研究其对T细胞的共刺激作用.方法:首先采用PCR技术分别从pMD19-T/小鼠B7-H3和pMD19-T/hIgG1(Fc)重组载体中扩增出小鼠B7-H3胞外段基因和人IgG1重链Fc恒定区基因.通过重叠PER技术将2段基因连接成B7-H3-Fc,经EcoR I和Bgl Ⅱ双酶切后插入真核表达载体plRES2-EGFP构建成pIRES2-EG-FWB7-H3-Fc重组载体.脂质体法转染CHO细胞,经G418加压筛选能稳定分泌表达小鼠B7-H3-Fc融合蛋白的基因转染细胞,并经Western blot鉴定.该转基因细胞无血清培养后,收集细胞上清、超滤浓缩后行经Protein G柱纯化,获得纯品B7-H3-Fc融合蛋白.通过CCK-8以及ELISA方法检测小鼠B7-H3-Fc融合蛋白对T细胞体外增殖及细胞因子分泌的影响.结果:成功地构建了能稳定表达B7-H3-Fc融合蛋白基因的CHO转基因细胞株,该融合蛋白能够剂量依赖性地促进T细胞体外增殖及IL-2和IFN-γ等细胞因子分泌.结论:本研究提示B7-H3作为重要的共刺激分子,在调节T细胞免疫应答中发挥了正性共刺激作用.
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| 关 键 词： | B7-H3 融合蛋白 小鼠 T细胞 协同刺激分子 |
Expression of mouse B7-H3-Fc fusion protein and characterization of its bio-activity |
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