排序方式: 共有27条查询结果,搜索用时 15 毫秒
1.
2.
非还原脲变性蛋白溶菌酶稀释复性过程中集聚现象的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、阴极聚丙烯酰胺凝胶电泳和高效凝胶排阻色谱法, 研究了非还原脲变性蛋白溶菌酶在稀释复性过程中的集聚现象. 实验发现, 在整个稀释复性过程中, 没有蛋白溶菌酶集聚体沉淀产生. 当最终复性液中蛋白溶菌酶浓度小于4.0 mg/mL时, 复性过程中不会形成蛋白溶菌酶分子集聚体; 当最终复性液中蛋白溶菌酶浓度介于4.0~8.0 mg/mL时, 复性过程中会形成由非共价相互作用所引起的蛋白溶菌酶二分子和三分子集聚体; 而当最终复性液中蛋白溶菌酶浓度大于8.0 mg/mL时, 复性过程中除了会形成二分子和三分子蛋白溶菌酶集聚体外, 还会形成四分子蛋白溶菌酶集聚体. 在此基础上, 结合文献, 对非还原脲变性蛋白溶菌酶的稀释复性过程进行了描述. 相似文献
3.
重组人干扰素-γ的制备与鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
用聚乙二醇200疏水相互作用色谱固定相(PEG200-STHIC)分别在色谱柱和色谱饼上完成了一步复性并同时纯化来源于大肠杆菌(E.coli)表达的重组人干扰素-γ(rhIFN-γ)。为了能使色谱分离方法用于不同来源的rhIFN-γ的纯化,对rhIFN-γ在反相色谱、离子交换色谱、固定化镍离子亲和色谱上的保留行为也进行了研究。色谱柱纯化的rhIFN-γ收集液经排阻色谱除盐和冷冻干燥得到rhIFN-γ干粉。用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对rhIFN-γ干粉进行了测定,rhIFN-γ单体的相对分子质量为17184.0,二聚体的相对分子质量为34204.4。用细胞病变抑制法(CPEI)测定rhIFN-γ干粉的比活性为9.5×108 IU/mg。用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定rhIFN-γ干粉的纯度高于95%。用色谱柱复性并同时纯化rhIFN-γ的质量回收率达到93.7%,纯度高于95%,比活性为4.3×107 IU/mg。结果表明,采用PEG200-STHIC色谱柱复性并同时纯化rhIFN-γ是一种十分高效的方法。 相似文献
4.
应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相方法化学合成了敬钊毒素-V(JZTX-V)分子N-端酪氨酸残基剪切体(Y1-JZTX-V),并且通过反相高效液相色谱和质谱对不同条件下的氧化复性结果进行监测,从而得到该剪切体的最佳氧化复性条件:0.1 mol/L Tris-HCl缓冲液、pH 7.50、1 mmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)、0.1 mmol/L氧化型谷胱甘肽(GSSG)、样品浓度为0.05 mg/L、复性温度为4 ℃。膜片钳电生理实验结果显示敬钊毒素-V剪切体Y1-JZTX-V对大鼠背根神经节(DRG)细胞上表达的河豚毒素不敏感型(TTX-R)与河豚毒素敏感型(TTX-S)钠电流均有抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)分别为(160±2.5) nmol/L和(39.6±3.2) nmol/L。与天然的敬钊毒素-V相比,该剪切体对大鼠DRG细胞上的TTX-S钠电流的抑制作用基本一致,但对TTX-R钠电流的抑制作用却大大降低,表明敬钊毒素-V分子N-端的酪氨酸残基是一个与TTX-R钠通道结合活性相关的氨基酸残基。 相似文献
5.
Z及logI对离子交换色谱中脲变溶菌酶分子构象变化的表征 总被引:3,自引:0,他引:3
以溶菌酶(Lys)为目标蛋白,用计量置换保留理论(SDT-R)中的参数Z和logI对弱阳离子交换色谱(WCX)中“准天然态”和脲变还原与非还原的两种变性状态的Lys的分子构象变化进行了表征。发现在流动相中含有脲时,蛋白的保留仍服从SDT理论,可以准确测定在特定脲浓度条件下Lys的Z及logI值。结果表明,3种分子构象状态的Lys的Z值均随脲浓度改变呈现不连续变化;“准天然态”Lys在同一脲浓度条件下的Z值比变性状态的大,logI比变性状态的小,而非还原变性态和“准天然态”Lys的Z和logI值比较接近。还 相似文献
6.
Ye Hua SHEN Hai Bo WANG Quan BAI Xin Du GENG* Institute of Modern Separation Science Shaanxi Provincial Key Laboratory of Modern Separation Science Northwest University Xi抋n 《中国化学快报》2003,(3)
Theinvestigationofproteinrenaturation,orrefoldinghasbecomeaveryhotpointinbothliquidchromatography(LC)andlifesciencefields.Besidesusualdilutionanddialysismethods,manynewmethodsconcernproteinrenaturationhavebeenpresented,suchasreversemicelles1,chaperones2,polyethyleneglycol(PEG)3,surfactant4andantibodies5etc.Oneoftheauthorssuggestedhighperformancehydrophobicinter-actionchromatography(HPHIC)tobeanewtoolforproteinrenaturation6.Areviewonproteinrenaturationwithliquidchromatography(LC)wasrecentl… 相似文献
7.
采用疏水相互作用色谱(HIC)对还原变性核糖核酸酶A (RNase A)在疏水性液-固界面上的复性进行了研究。详细讨论了流动相中脲的浓度、还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSG)的比例、流动相pH和变性蛋白质浓度对还原变性RNase A复性效率和质量回收率的影响。结果表明,在最优化的复性条件(流动相中含有2.0 mol/L脲,GSH/GSSG的浓度比为8:1,流动相pH为8.0)下,还原变性RNase A能完全复性。当变性蛋白质质量浓度为5.0 mg/mL时,还原脲变性RNase A的活性回收率和质量回收率分别为98.0%和61.9%,还原胍变性RNase A分别为100.1%和66.8%。研究表明HIC是还原变性蛋白质复性的有力工具之一,可为蛋白质复性研究提供新方法和新思路。 相似文献
8.
Quan BAI* Yu KONG Xin Du GENG Institute of Modern Separation Science Kay Lab of Modern Separation Science in Shaanxi Province Northwest University Xi抋n 《中国化学快报》2003,14(8):824-827
The recombinant human proinsulin (rh-proinsulin) is the precursor of insulin, which is connected with C- peptide between the carboxyl-terminal of chain A and NH2-terminal of chain B of insulin. In the presences of trypsin and carboxypeptides B (CPB), the C-peptide can be cleaved from the special two peptides of rh-proinsulin and the recombinant human insulin (rh-insulin) can be, thus, obtained1,2. The rh-proinsulin expressed in E. coli exists as inclusion body, hardly dissolves in water,… 相似文献
9.
In our previous work we characterized the Ca binding properties of BLA by analysis of Ca-induced renaturation in the presence
of urea. In this study we focused on the renaturing capacity of CaCl2 in the absence of urea and analysed the apparent thermodynamic and kinetic properties of renatured BLA by DSC, CD and dynamic
light scattering (DLS) measurements. Ca-free protein did not return fully to the native state even after extensive dialysis
against high concentrations of calcium. Thus Ca removal provokes changes in protein structure that can not be reversed completely
even by addition of an excess of calcium. However, activity studies performed simultaneously with the DSC experiments showed
a significant return of enzymatic activity despite the failure of complete return of native stability. This conclusion is
in excellent agreement with findings of Machius et al. who suggested on the basis of their X-ray studies that it is not possible to remove CaI and CaII without introducing significant
structural changes. It is important to note that all unfolding reactions of metal-free, partially renatured and native protein
were found to be irreversible. Therefore the DSC transition curves were fitted using irreversible transition models. It turned
out that the apparent heat capacity profiles of partially renatured BLA could be well represented by superposition of two
irreversible processes each following the two-state irreversible model. 相似文献
10.
采用同源重组的方法,将5aG株狂犬病毒糖蛋白基因插入天坛株痘苗病毒基因组TK区段,置于痘苗病毒晚期启动子P11控制之下,通过筛选,得到一株重组病毒VVaG,实验结果表明:该株病毒可表达5aG株糖蛋白基因,表达产物位于感染细胞膜表面,分子量64×103,并可与抗狂犬病毒糖蛋白单抗特异结合,用VVaG免疫小鼠,可诱导机体产生抗狂犬病毒中和抗体,抵抗致死剂量狂犬病毒的攻击,中和抗体滴度在免疫后14d达到高峰,为1560. 相似文献