营养缺陷型酿酒酵母AY生长代谢的热动力学研究

用微量热法研究了尿嘧啶缺陷型酿酒酵母AY,和该菌株分别经穿梭质粒pYLZ2、重组质粒pYLZ2/f27、pYLZ2/622转化的3种菌株的生长代谢热动力学.尿嘧啶缺陷型酿酒酵母AY在基本培养基中不生长,没有代谢热效应产生,而在葡萄糖蛋白胨培养基和丰富营养培养基(YPD)中生长,并且在YPD中生长最好;向基本培养基中加入尿嘧啶后,AY能够生长,而且随着尿嘧啶浓度的增加,其生长速率常数增大;经质粒转化的3个菌株均能在基本培养基中生长,代谢产热曲线各不相同,与转入质粒的结构、功能密切相关.研究结果表明了各菌株遗传特征的差异.     

黑曲霉葡萄糖淀粉酶基因在酿酒酵母中的表达和分泌

将黑曲霉葡萄糖淀粉酶GAI的cDNA插入到质粒pMA91的酵母PGK基因的启动子和终止序列之间,构成含葡萄糖淀粉酶基因的表达载体pMAG69。用原生质体转化法引入酿酒酵母GRF18,实现黑曲霉葡萄糖淀粉酶基因在酿酒酵母中的表达,利用基因本身的信号序列使99％以上的酶蛋白分泌至胞外,构建的酵母菌株在含10％淀粉的培养基中2天内能水解87％的淀粉,对酵母转化子的稳定性检测显示,重组质粒pMAG69可在酿酒酵母中较稳定地存在。     

耐高温酿酒酵母的选育’出发菌株的选择及发酵特性分析

本文报道了经过对我国四株常用的酒精发酵菌株，K氏酵母(Saccharomyces cere-visiae Haasen var. ellipsoideus(Hansea)Dekk)、1038(Saccharomyces cerevi-siae Haasen)、Rasse j(Saccharomyces cerevisiae Hsanen)、Rasse皿(Sac-charomyces cerevisiae Hansen)的发酵效率和耐热性能等生理特性的分析比较，发现虽然1038的耐热性能比其它三个菌株强(42℃时发酵效率为77.16劣)，但鉴于它发酵效率下降幅度远大于K氏酵母(在40℃发酵效率下降13,53劣，而K氏酵母下降9.21男一，据此，从既具一定的耐热性，又具较高的产酒率这点出发，拟尽 K氏酵母菌株作为选育耐高温产酒酵母的出发菌株.     

酿酒酵母rDNA的结构及其介导整合影响因素研究进展

为提高外源基因在酿酒酵母基因组中的拷贝数,将rDNA重复序列作为整合载体同源重组位点的研究日益被关注.本文介绍了酿酒酵母rDNA组成元件的结构,综述了以rDNA重复序列作为同源重组位点的研究进展.分析表明,hot1片段和一些蛋白因子(Fob1,RAD52和MRX,Sir2p,Sgs1和Mus81等)对rDNA单元的拷贝数目有调控作用,Smc5-Smc6复合体、RAD52的SUMO化和Mms21对rDNA的同源重组严格调控,对其稳定性有重要影响.以rDNA介导整合的外源基因在酿酒酵母细胞有丝分裂中的稳定性与整合位点在rDNA单元中的位置和性质以及整合载体的大小有重要关系.根据酿酒酵母较易发生同源重组的特点,使用rDNA重复序列作为整合载体同源重组位点可以通过提高外源基因在酿酒酵母基因组中拷贝数使外源基因在细胞中获得高效稳定表达.     

CdS量子点的酿酒酵母仿生合成及光谱表征

以酿酒酵母为载体,常温下利用仿生法成功合成了CdS量子点。荧光发射光谱、紫外吸收光谱以及荧光显微镜照片证明,该方法合成的CdS量子点的荧光发射峰位置在443nm,在紫外灯下能发蓝绿色荧光。透射电子显微镜(TEM)表征结果表明,该仿生法合成的CdS量子点为六方纤锌矿结构。以荧光发射和紫外吸收光谱为性能指标,考察了酿酒酵母生长时期、Cd2+的反应浓度以及反应时间等条件对合成CdS量子点的影响。当酿酒酵母处于生长稳定期初期时,与浓度为0.5mmol.L-1的Cd2+共培养24h后所合成的CdS量子点荧光最强。实验中观察到,换液培养可有效提高酿酒酵母合成CdS量子点的产量。     

通过原生质体融合改建酵母细胞的研究——Ⅲ.种间融合杂种HU-KDF-185发酵能力的生产性鉴定试验

从原生质体融合获得的K氏酵母(Saccharomyces cerevisiae var.ellipsoideus)和糖化酵母(Saccharomyces diastalicus)的种间融合杂种中筛选到一株酒精高产菌株HU-KDF-185,它在番薯渣糖化液(约5.0—5.5Brix)的工厂生产性发酵试验中,原料的酒精得率平均是30.77％;而当前使用的酒精生产菌株K氏酵母(对照1)则是29.71％,新市一号菌株(对照2)则是29.54％.试验结果表明,种间杂种HU—KDF-185比K氏酵母和新市一号菌株分别增产酒精3.56％和4.16％.由此可以确定,杂种HU-KDF-185是一株具有生产价值的酒精高产菌株.     

通过原生质体融合改建酵母细胞的研究Ⅱ，酿酒酵母与糖化酵母种间融合杂种的发酵生物学研究

本文研究了酿酒酵母与糖化酵母的种间融合杂种HU-KDF-185在不同温度条件下发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和工厂番薯干糖化液的酒精生成率、发酵强度和发酵速率。实验结果表明,种间融合杂种HU-KDF-185在所试条件下的发酵力均超过两融合亲株,并优于酒精生产菌株K氏酿酒酵母。例如,在30℃、32℃和35℃发酵葡萄糖时,它比对照株K氏酵母分别增产酒精3.0％、1.93％和1.85％;其中在32℃发酵时,各菌株可获得最高的酒精生成率。而在32℃发酵麦芽糖、蔗糖和工厂番薯干糖化液时,杂种HU-KDF-185也比K氏酵母分别增产2.0％、9.71％和5.26％。     

耐热酵母菌株HU-TY-1的耐热机理初探

以酿酒酵母耐热菌株HU-TY-1和亲株LK为材料,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳等技术,对它们在热休克应答前后的耐热性及蛋白图谱进行了分析,发现两个菌株经温和高温(37 ℃)诱导后可大幅提高对致死温度(53 ℃)的耐受力,同时伴随着分子量为72 kD和84 kD的热击蛋白(HSP)的合成,其中耐热株HU-TY-1在常态时就有这两种热击蛋白的少量表达.由此表明:耐热酵母菌株HU-TY-1的高耐热性与HSP72和HSP84的组成性合成密切相关.     

基于纤维小体展示技术的酿酒酵母纤维素乙醇研究进展

利用联合生物加工工艺生产第二代燃料乙醇(纤维素乙醇)是国内外的研究热点.前期的研究结果表明,酿酒酵母分泌或展示非复合型纤维素酶体系的应用效果并不理想,而复合型纤维素酶体系(即纤维小体)因对纤维素的降解能力比非复合型纤维素酶体系更强,所以其在酿酒酵母细胞表面的组装研究受到越来越多的关注.目前,单支架和双支架纤维小体在酵母细胞表面的完全自组装以及多细胞协同参与的非完全自组装均已实现.纤维小体展示型酿酒酵母已能直接利用结晶型纤维素发酵生产乙醇,但由于降解模块的结构缺陷,纤维素乙醇的产量仍然偏低.本文对纤维小体的酵母展示技术及其在纤维素乙醇发酵中的应用研究进行了论述,并对该领域的发展方向进行了展望.     

酿酒酵母产抱最佳条件的研究

本文通过对耐高温酿酒酵母((S. cerevisiae ) HU - TY -1产抱条件的研究.在菌龄, pH值、培养基组成，Zn2+浓度及微量元素几个方面进行了实验。结果表明，HU-TY-1先在含2写葡萄糖,25}g/ml Zn'+的预产抱培养基上培养，于稳定期前期转入含125}g/ml Zn`+ ,1 j0KAc,0.2500酵母抽提物，0. 1写葡萄糖，0. 1写KH}PO‘的产袍培养基上，可获得高的产抱率(45. 92写).另外、在产抱培养基中加入丁二酸等不被细胞代谢的物质作为纷冲剂，加入生物素，肌醇等维生素可大大提高菌株HU-TY--1产3---4抱(3-4抱即一个子囊中有3个或4个抱子)的能力.