氦-氖激光诱变细菌细胞及原生质体选育果胶酶高产菌株

利用氦-氖激光(波长632.8nm,功率15mW)诱变果胶酶产生菌的菌体细胞,获得了突变株ZH-g,其酶活达到301 u·mL－1,是出发菌株的1.3倍.进一步用氦-氖激光照射ZH-g的原生质体,从而得到了高产突变株ZH-gA,其酶活达到357 u·mL－1,比ZH-g提高了18%,是出发菌株的1.6倍.该菌株在好氧和静置条件下均能良好产酶,经传代实验证明其产酶性能稳定.     

He-Ne激光诱变黑曲霉Sx的原生质体

对生淀粉糖化菌黑曲霉Sx用混和酶制取原生质体进行了探索.在GM培养基中加入一定量的Cu²⁺、Mn²⁺,原生质体产量较高;采用pH4～5的蜗牛酶、纤维素酶、溶菌酶的混合酶,最佳浓度比为:1.5:3.5:1.5(mg/mL).取在GM培养基中培养17～18h的菌丝,在32℃酶解3h,原生质体产量最高,达到2.4×10⁵个/mL;在加入β-巯基乙醇及二硫苏糖醇处理菌丝时,原生质体产量提高近3倍.在再生培养基中,加入终浓度为30mmol/LMgSO₄时,原生质体再生率由16.7%提高到25.6%.用He-Ne激光照射原生质体时,功率9mW照射30min时致死率为50%,随着时间的延长,原生质体存活率降低.采用波长632.5nm、功率9mW、光斑直径5mm的He-Ne激光多次照射诱变,筛选出一株酶活力最高菌株黑曲霉Sy,活力提高51%,经连续传代5次,酶活力稳定.     

紫外、氦氖激光等复合诱变产果胶酶细菌ZH1的研究

ZH₁菌株是从自然界分离筛选而来的,该菌株产果胶酶的最适pH为7.0;最适温度33℃;培养36h达产酶高峰,酶活力为73.5μ/mL,将ZH₁作为出发菌株,经紫外线诱变、硫酸二乙酯诱变,亚硝基胍和紫外线复合诱变及氦氖激光等多次反复诱变,选育得到一株产果胶酶性稳定且酶活明显提高的突变株ZHg,其酶活为301m/mL,比出发菌株ZH₁产果胶酶能力提高3.1倍.     

He-Ne激光、紫外线诱变氧化亚铁硫杆菌及耐砷菌株的选育

对适合氧化亚铁硫杆菌(Thiobacilus ferrooxidans)特点的诱变方法进行了研究:把菌体制成无铁细胞悬液进行小剂量、多次数的诱变.氧化亚铁硫杆菌菌株S₁经多次紫外线和激光照射,并结合逐级驯化处理,最终选育出了优良耐砷菌株S_x,它能在含11g/LA_s2O₃的环境中生长,比出发菌株的0.7g/L提高了近14.7倍.在用该菌株进行浸矿的实验结果表明:浸矿能力良好,在同样是10%接种量时,浸出时间比出发菌缩短了一天,并且砷元素的浸出率由原先的76%提高至85.7%.     

三氯乙酸沉淀法结合姜黄素法测定血红蛋白氧载体中残余硼

建立了一种三氯乙酸沉淀法结合姜黄素法测定血红蛋白氧载体中硼残余含量的方法.以血红蛋白氧载体:三氯乙酸=9:1(V/V)的比例用三氯乙酸沉淀血红蛋白氧载体中聚合血红蛋白,离心5000 g×10 min将溶液中的沉淀分离,获得游离硼化物,聚合血红蛋白沉淀引起体积的缺失由生理盐水补齐,依次加入硫酸冰乙酸混合酸、姜黄素冰乙酸溶...     

链亲和素-磁性微粒的制备及其应用

通过物理吸附和共价作用机制, 制备两种链亲和素-磁性微粒, 即链亲和素-金磁微粒和链亲和素-氨基磁粒, 并对其在不同缓冲液中的稳定性进行研究; 采用酶抑制法测定两种链亲和素-磁性微粒对游离生物素的结合能力; 分别以紫外吸收和固相核酸杂交方法, 测定两种链亲和素-磁性微粒对生物素标记寡核苷酸探针的固定化容量及活性, 并与Dynabeads®M-270 Streptavidin进行比较. 结果表明: 通过物理吸附作用制备的链亲和素-金磁微粒, 适用于核酸杂交与检测常用的STE (Tris-NaCl-EDTA) 缓冲系统, 通过共价作用形成的链亲和素-氨基磁粒, 适用于STE和磷酸盐(PBS)缓冲系统; 1 mg链亲和素-金磁微粒和链亲和素-氨基磁粒对游离生物素的最大结合容量分别为4950和5115 pmol; 对生物素标记寡核苷酸探针(24 mer) 的结合容量分别为2839和2978 pmol, 测定结果均是Dynabeads®M-270 Streptavidin的6~7倍; 与FITC-标记互补寡核苷酸的杂交结果表明, 固定于链亲和素-磁性微粒表面的寡核苷酸探针保持了较好的生物学活性.