重组内切纤维素酶Fpendo5A转化三七总皂苷

从嗜热细菌基因组中克隆到1个新的纤维素酶基因,并在大肠杆菌中进行了高效可溶性表达,粗酶液经镍柱亲和层析进行分离纯化.利用快速分离液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用仪(RRLC/Q-TOF-MS)对重组内切纤维素酶Fpendo5A转化三七总皂苷的产物结构进行了鉴定,并进一步阐明其转化机制.结果表明,该酶的最适反应温度和pH值分别为80℃和5.5.Fpendo5A能够催化三七总皂苷中的主要皂苷成分,即Ra_1,Rb_1,Rc,Rd和Rg_3的侧链糖基的水解反应,但对于不同的皂苷底物,Fpendo5A选择性催化的侧链糖基类型不同.经鉴定,Fpendo5A转化Ra_1,Rb_1,Rc,Rd和Rg_3的转化产物分别为Rb_2,GypⅩⅦ,CMC_1,F_2和Rh_2.由此可见,Fpendo5A通过水解Rb_1,Rc,Rd和Rg3的C3位的β-(1,2)糖苷键分别生成GypⅩⅦ,CMC1,F2和Rh2.在转化Ra_1时,Fpendo5A通过水解Ra_1的C20位的α-(1,4)木糖苷键生成Rb2.     

高效液相色谱-飞行时间质谱联用法分析人参及人参皂苷与山楂配伍过程中的水解行为

利用高效液相色谱-飞行时间质谱联用的方法,分别对人参配伍山楂前后人参皂苷的变化进行分析,同时对人参皂苷Re、Rg1、Rb1、Rd与山楂配伍的水解规律进行系统研究,并与单独煎煮液、仿山楂配伍pH值煎煮液的水解产物进行比较,结果发现人参与山楂配伍后人参皂苷Rg1、Rb1含量明显减少,而人参皂苷Re、Rd、Rg2、Rg3、F2、Rh1含量明显增加,其中人参皂苷Re与山楂配伍后水解产物为人参皂苷20(R)-Rg2、20(S)-Rg2,仿山楂配伍pH值水解产物为人参皂苷20(R)-Rg2、20(S)-Rg2、Rg4、Rg6;人参皂苷Rg1与山楂配伍后水解产物为20(S)-Rh1、20(R)-Rh1,仿山楂pH值水解产物为20(S)-Rh1、20(R)-Rh1、Rh4、Rk3;人参皂苷Rb1与山楂配伍后水解产物为Rd、20(S)-Rg3,仿山楂pH值水解产物为F2、20(S)-Rg3;人参皂苷Rd与山楂配伍后水解产物为F2、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3,仿山楂pH值水解产物为20(S)-Rg3、20(R)-Rg3。研究表明,不同人参皂苷和山楂配伍后与仿山楂pH值的水解产物并不相同,人参与山楂配伍改变了人参皂苷成分的种类及含量。本研究为临床方剂中人参与山楂配伍后成分的变化提供物质基础数据。     

基于区间分析的投资组合VaR计算新方法

基于区间分析估计变量的累计概率分布是进行风险价值分析的一种新方法。本文将区间分析运用到股票投资组合的VaR计算中,研究区间分析在VaR计算方法中的应用。首先给出了基于区间分析估计分布函数的计算步骤,然后将区间分析运用到VaR的计算中,以两只股票的投资组合为例得出收益率的累计概率分布,从中得到某一置信度下的VaR值,最后与蒙特卡洛模拟方法做了比较研究,结果表明,基于区间分析的VaR计算方法的运算精度和计算速度明显优于蒙特卡洛模拟方法。     

重组嗜热β-葡萄糖苷酶转化稀有人参皂苷Rd和CK

利用高效液相色谱(HPLC)法, 对重组嗜热β-葡萄糖苷酶(Fpglu1)转化稀有人参皂苷(Rd和CK)进行研究, 并表征了其催化动力学参数. 利用同源模建和分子动力学模拟等生物信息学技术, 探究了Fpglu1转化人参皂苷的结构基础及其相互作用. 结果表明, Fpglu1能够水解人参总皂苷生成稀有皂苷Rd和CK, 其催化人参皂苷Rb₁, Rb₂和Rc的K_m值分别为0.318, 1.840和5.269 mmol/L; 酶的转换数(k_cat)值分别为144.191, 0.572和0.011 s^-1. 当转化时间分别为6和102 h时, Rd和CK的产率达到最大, 分别为60%和93%. 通过对该酶的结构预测及皂苷分子的对接研究发现, 底物位于由疏水性氨基酸构成的底物口袋中, 氨基酸残基Glu194和Glu367是参与催化作用的关键, 且实验测得的酶促反应动力学参数(K_m)与对接的相互作用能量值存在线性关系.     

UPLC-TSQ-Endure质谱分析Rg_3对2型糖尿病大鼠P450酶活性的影响

应用超高效液相色谱-质谱联用法(UPLC-MS)结合多探针底物法建立了同时定量测定5个细胞色素P450酶探针底物的方法,同时考察正常大鼠和2型糖尿病大鼠CYP亚型酶活性的变化,分析人参皂苷Rg_3对CYP亚型酶的调控作用。结果表明,与正常组比较,2型糖尿病大鼠肝微粒体酶中P3A4和P2E1活性被诱导,P2D6,P1A2和P2C9活性被抑制。人参皂苷Rg_3诱导2型糖尿病大鼠P3A4和P1A2活性,抑制P2E1和P2C9活性,对P2D6活性无明显影响。人参皂苷Rg_3能够使糖尿病大鼠CYP2E1和CYP1A2亚型酶活性趋于恢复到正常生理状态,其在CYP450酶中的代谢产物为人参皂苷Rh2。方法适用于评价P450酶诱导或抑制的酶活性测定,在临床上指导2型糖尿病患者合理用药。     

重组嗜热β-葡萄糖苷酶转化稀有人参皂苷Rd和CK

利用高效液相色谱(HPLC)法,对重组嗜热β-葡萄糖苷酶(Fpglu1)转化稀有人参皂苷(Rd和CK)进行研究,并表征了其催化动力学参数.利用同源模建和分子动力学模拟等生物信息学技术,探究了Fpglu1转化人参皂苷的结构基础及其相互作用.结果表明,Fpglu1能够水解人参总皂苷生成稀有皂苷Rd和CK,其催化人参皂苷Rb_1,Rb_2和Rc的K_m值分别为0.318,1.840和5.269 mmol/L;酶的转换数(k_(cat))值分别为144.191,0.572和0.011 s~(-1).当转化时间分别为6和102 h时,Rd和CK的产率达到最大,分别为60%和93%.通过对该酶的结构预测及皂苷分子的对接研究发现,底物位于由疏水性氨基酸构成的底物口袋中,氨基酸残基Glu194和Glu367是参与催化作用的关键,且实验测得的酶促反应动力学参数(K_m)与对接的相互作用能量值存在线性关系.     

葛花中异黄酮类化学成分的RRLC-Q-TOF MS/MS研究

采用快速分离液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用(RRLC-Q-TOF MS/MS)技术对葛花中的异黄酮类成分进行了研究, 得到了相应化合物的保留时间、 分子量及结构信息. 研究结果表明, 葛花水提取液的主要成分为异黄酮类及其苷类化合物, 并含有皂苷类和酚类化合物. 在葛花中首次发现同属植物狐尾葛特有化合物Alopecuroides A和葛根中的化合物3'-甲氧基大豆苷元-7-O-甲醚. 讨论了异黄酮类化合物的质谱碎裂途径及规律.     

风雪共同作用下大跨度双曲屋盖数值模拟研究

“风致雪漂”运动可能会造成建筑物倒塌，威胁到人身财产安全，因此风雪的共同作用在设计大跨度结构时是不能忽略的。本研究采用欧拉-欧拉方法，基于k-kl-ω湍流模型，选择的大跨度双曲屋盖结构的投影形状有4种，分别为矩形、正方形、椭圆形以及圆形，研究在风雪流共同作用下风向角不同时这4种结构屋盖表面的风致积雪压力系数曲线图和积雪分布系数云图，并进行了对比分析，得到积雪分布规律。结果表明：风致雪漂作用下4种形状屋盖结构表面风致积雪压力系数比单独风作用下的平均压力系数大；4种屋盖结构表面的风致积雪压力系数最大值出现的位置不同；风向角对屋盖表面的风致积雪压力有很大影响，当风向角不同时，屋盖表面压力从大到小的排列顺序依次为矩形、椭圆形、正方形和圆形屋盖。