二甲基亚砜和四氢呋喃对胃蛋白酶催化动力学和分子光谱的影响

为了研究二甲基亚砜(DMSO)和四氢呋喃(THF)对胃蛋白酶(Pepsin, PP)催化活性的影响及其作用本质, 测定了在这两种有机溶剂的作用下胃蛋白酶的催化活性、 动力学参数、 紫外吸收光谱、 紫外差示光谱和荧光发射光谱的变化. 结果表明, 体积分数为9%的DMSO使PP活性提高83.4%; 而体积分数为1%的THF只能使PP活性提高3.59%. 在盐酸溶液中, PP的动力学参数K_m=2.22 mg/mL, v_max=1.1×10⁶ U/mg Pro; 在9%DMSO中, 其K_m=1.50 mg/mL, v_max=0.5×10⁶ U/mg Pro; 在1%THF中的K_m=1.91 mg/mL, v_max=0.51×10⁶ U/mg Pro. 9%DMSO强烈抑制PP分子肽键的紫外吸收, 而对芳香族氨基酸无影响; 1%THF则对PP的紫外吸收光谱影响不大. 9%DMSO和1%THF都使PP的紫外差示光谱出现明显的负吸收峰和正吸收峰. 9%DMSO使酶分子的荧光发射峰向短波方向移动1 nm; 而1%THF则对其无影响. 实验结果表明, 在9%DMSO和1%THF中, PP分子的立体构象发生了变化, 使酶分子的K_m下降, 酶分子对底物的亲和力有所升高, 从而导致酶分子的催化活性有不同程度的提高.     

壳寡糖化学修饰对云芝漆酶催化活性和酶学性质的影响

利用壳寡糖(COS)对纯化后的云芝漆酶(EC1.10.3.2)进行化学修饰以改善其活性和稳定性.最优化学修饰条件:温度5℃,pH=4.0,100mgNaIO4,20mgCOS.在此条件下得到的修饰酶(COS-TvL)的活性(456.00U/mg)为天然酶(TvL)活性(314.39U/mg)的145.04%.十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)结果表明,TvL的3条肽链相对分子质量为58100,45200和21600,而COS-TvL的3条肽链相对分子质量为62900,53300和39700,说明酶分子修饰成功,氨基修饰率为30.7%.TvL的最适pH值在4.0附近,而COS-TvL的最适pH值在3.5~4.0之间.TvL的最适温度为40℃,而COS-TvL的最适温度为45℃.动力学研究结果显示,TvL的Km=9.929mmol/L,vmax=714.29mmol/(mg·min);而COS-TvL的Km=8.989mmol/L,vmax=1250mmol/(mg·min).通过红外光谱、紫外吸收光谱、紫外差示光谱和荧光发射光谱对TvL和COS-TvL进行了结构表征.