嗜热古细菌Sulfolobus tokodaii脱卤酶在D-乳酸生产中的应用

将来源于嗜热古菌Sulfolobus tokodaii的脱卤酶(L-HADST)基因克隆到载体p ET28b,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,在蛋白的N末端带有6个组氨酸融合标签,纯化后经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示融合蛋白的分子量约为25000.融合蛋白催化2-氯丙酸(2-CPA)的最适反应温度为70℃,最适p H值为9.5.以外消旋2-CPA为底物生产D-乳酸,利用HPLC检测反应液中2-CPA及乳酸的变化,发现L-HADST只催化L-2-CPA脱氯反应.对酶催化反应条件进行了优化,结果表明,在p H值为9.5,温度为60℃的条件下,当反应体系中缓冲液浓度为3 mol/L,底物浓度为0.5 mol/L,酶浓度为3×104U/L时有较高的底物转化率及乳酸生成量.依据条件优化结果可知,影响反应速度的因素有底物浓度、缓冲液浓度以及酶浓度,其中底物浓度变化对转换率的影响最明显.     

古细菌Aeropyrum pernix K1超嗜热酯酶APE1547的稳定性

研究了纯化的超嗜热酯酶APE1547的稳定性. 结果表明, 该酶的稳定性非常好, 蛋白的质量浓度为0.4 mg/mL时, 90 ℃的半衰期为20 h, 0.2 mg/mL时的半衰期为12 h; 而蛋白的质量浓度为0.04 mg/mL时, 保温2.5 h时残余活力仍在50%以上. 同时还研究了热变性时该酶表面疏水氨基酸的变化. 该酶的pH稳定性也很好, pH在6.5-9.0范围内作用24 h, 酶依然很稳定, 残余酶活力大于93％; 同时该酶还具有很强的耐有机溶剂的特性.     

超嗜热酯酶APE1547中特殊位置氢键对酶活力和热稳定性的影响

探讨了APE1547蛋白的β-推进器结构中第3和第4“叶片”间的侧链氢键(Thr127-Gly154, Leu182-Arg145-Glu122)对蛋白质的作用.