蛋白质INSM1中的锌指结构域ZF (4-5)的表达、纯化与表征

胰岛素瘤相关蛋白1（INSM1）是一类转录调节蛋白,通过其C-端的锌指结构域（氨基酸250-510）来识别序列特异性的DNA分子.INSM1的C-端包含有5个串联的锌指结构域,然而这些结构域的结构及其如何识别DNA的分子机制目前仍不清楚.通过重组构建的质粒pET-32m-INSM1（424-497）表达的蛋白质（氨基酸424-497）包含了最后两个锌指结构域4和5,简称为ZF（4-5）.该文详细研究了蛋白质ZF（4-5）的诱导表达条件,得到了较高产率的纯化蛋白.核磁共振（NMR）谱和圆二色谱（CD）揭示了Zn²⁺对稳定锌指蛋白结构的必要性,以及C2H2-Zn²⁺结合的组氨酸呈现为δ-异构方式.     

新型吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-酮类衍生物的结构表征和镇痛活性

本文以2-氰基-3-乙氧基丙烯酸乙酯与3,4-二甲基苯肼为原料,通过多步反应合成了三种新型吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-酮类衍生物（A~C）,通过核磁共振（NMR,包括¹H NMR、¹³C NMR）和液相色谱-质谱联用（LC-MS）技术表征确证了其结构,并完整归属了三种化合物的¹H NMR数据．对所合成的化合物1-(3,4-二甲基苯基)-6-甲基-5-[3-(哌啶-1-基)丙氧基]-1,5-二氢-4H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-酮（A）,通过小鼠脑部质谱成像和福尔马林实验进行了初步的体内镇痛活性评价,我们发现化合物A能透过血脑屏障,并产生显著且剂量依赖的镇痛活性．本研究为以吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-酮为骨架的镇痛药物的研发提供了结构和体内活性的基础研究数据．     

蛋白质分子核磁共振谱峰的特性及其化学位移归属

尽可能完全、准确地归属蛋白质分子的核磁共振（Nuclear Magnetic Resonance,NMR）谱峰,是解析可信赖、高质量的蛋白质三维空间溶液结构的首要条件．自动归属软件的开发和应用,已经方便并加快了蛋白质分子核磁共振谱峰的归属进程．然而,对蛋白质核磁共振研究领域的新手来说,因为缺乏对蛋白质分子的核磁共振谱峰特性的系统认识而可能发生对自动归属结果的错误指认或指认不完全,从而导致蛋白质结构解析的错误或偏差．该文针对蛋白质分子中的核磁共振谱峰特性,比如同位素效应和立体异构等,结合具体的蛋白质分子的核磁共振实验图谱,进行了较为详尽的论述,期望对从事蛋白质核磁共振的研究者在理解蛋白质分子的核磁共振谱峰特性及其归属方面有所裨益．     

超顺磁性氧化铁-胶束体系的制备和T2弛豫增强作用 

制备了在负离子型胶束十二烷基硫酸钠（SDS）、羧甲基纤维素钠（CMC），正离子型胶束十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）和非离子型胶束Triton X-100、PEG-400中的氧 化铁粒子(SPIO)溶胶分散体系. 测定了这些SPIO胶束体系水质子的横向弛豫时间T₂, 并讨论了不同胶束性质对T₂的影响. 对PEG-400分散SPIO溶胶体系进行了动物急性毒性测试和活体T₂加权成像实验. 结果表明：该溶胶体系无明显急性毒性，且对大鼠肝区有显著的负增强.     

慢性电刺激海马结构诱发大鼠脑磁共振成像异常信号分析

为探讨海马结构(hippocampal formation)功能失衡与癫痫源性脑损伤的关系,本工作采用 慢性强直电刺激大鼠海马(hippocampus, HPC) CA1顶树突区（apical dendrite region, A DR）或齿状回（dentate gyrus, DG）诱发大鼠癫痫模型,一天一次,连续刺激6～8天后, 观察人工致痫灶以外的横向弛豫时间加权的核磁共振(T₂ weighted magnetic reson ance im age, T₂-WI) 绝对信号值变化（片厚1mm）,以及深部电图和原发性湿狗颤抖（pri mary wet dog shakes, WEDS）,并对被检测动物T₂-WI信号异常的相应脑区进行组织学鉴定. 结果表明：（1）电 刺激大 鼠ADR或DG的作用基本相似,引起深部电图的癫痫样电活动和侧脑室区域T₂值增强.（2）含有电极尖端痕迹的核磁共振（magnetic resonance image,MRI）脑切片出现对称性腹部侧脑室区域T₂值增强,连续向后1mm取MRI脑切片进行观察发现,对侧腹部侧脑室区域信号异常. （3）组织学切片观察到：MRI检测的侧脑室区域T₂-WI信号增强与组织切片的侧脑室扩大相吻合,可见扩大的侧脑室中脉络丛上皮细胞病理性增生现象. 提示：在大鼠癫痫点燃现象出现之前,过度激活DG或ADR均可引起相似的早期癫痫源性脑损伤.     

利用迭代软阈值方法抑制恒时演化类核磁共振实验中的采样截断伪峰

采样截断,即信号衰减殆尽之前结束采样,会在核磁共振(NMR)谱图中引入振荡状伪峰,进而影响谱图质量.在多维核磁共振实验中,为减少实验时间并为后续脉冲序列保留自旋相干,采样必然在信号衰减完毕之前结束,因此采样截断在所难免.变迹法(窗函数法)可以抑制采样截断造成的伪峰,但会导致谱峰增宽.线性预测也有助于减小截断伪峰.采样截断最严重的场合,是在恒时演化类实验中.这类实验的间接维演化时间固定,因此间接维采样信号强度没有表观衰减.本研究提出的迭代软阈值方法(Iterative Soft Thresholding,IST)虽然因为调节参数困难而在一般场合中应用受限,但恒时演化类(Constant time,CT)NMR实验的间接维信号缺没有表观衰减,这为IST处理参数设置提供了简化条件.本研究通过数据模拟和实验数据,证明了IST是抑制CT-NMR实验中采样截断伪峰的有效方法,并与其它相关方法进行了对比.     

电刺激诱发大鼠慢性颞叶癫痫模型的磁共振成像和波谱特征的研究

应用磁共振成像(MRI)和质子定域波谱(¹H-MRS)对强直流电刺激大鼠基树突区诱发慢性颞叶癫痫模型进行研究. MRI实验表明： 随着强直流电刺激时间的延长,在T₂加权像(T₂-MRI)中,模型大鼠的海马区腹、中侧区单侧或双侧,呈现异常高信号,扩散加权像(DWI)信号呈低信号,质子密度像无明显改变,表明T₂值和表观扩散系数(ADC) 值较大的自由水比例增大. 磁共振波谱实验发现：模型大鼠T₂-MRI中信号异常区与其对侧区的¹H-MRS相比,NAA,PCr（包括Cr）和Cho的峰面积均无显著改变,表明在慢性颞叶癫痫模型早期¹H-MRS不能检测到神经元损伤或死亡.