聚二甲基硅氧烷(PDMS)/玻璃微流控芯片电泳快速分离血清高密度脂蛋白亚类及临床应用研究

经梯度密度超速离心,高密度脂蛋白(HDL)分为HDL2和HDL3两亚型。HDL2抑制低密度脂蛋白(LDL)氧化功能受损是冠心病(CHD)发生发展的关键因素。因此,通过对HDL亚类进行分离,从而达到预测和诊断CHD的目的。本研究建立了用PDMS/玻璃微流控芯片快速电泳分离HDL亚类的方法。选择N-十二烷基-β-D-麦芽糖苷(DDM)、十二烷基硫酸钠(SDS)和羟丙基纤维素(HPC)共同修饰脂蛋白和泳道表面。在以含0.3 mmol/L SDS的50 mmol/L 3-(N-吗啉代)丙磺酸(MOPS)(pH 8.0)为样品缓冲液,含0.6%HPC的50 mmol/L MOPS(pH 8.0)为分离缓冲液,分离电压为260 V/cm的优化条件下,HDL2和HDL3在4 min内得到基线分离,二者的出峰时间和峰面积的相对标准差(RSD)分别是2.0%和2.7%,2.0%和2.9%,具有较好的重复性。临床标本研究发现,正常人血清标本可分离出HDL2和HDL3双峰,而CHD患者的HDL2峰面积显著减小,甚至消失。PDMS/玻璃微流控芯片分离HDL亚类是一种简单、快速、高效的用于分析CHD危险因子的方法。     

血清肌钙蛋白Ⅰ液相色谱串联质谱法建立及优化

建立并优化了液相色谱串联质谱法定量血清肌钙蛋白I.免疫磁珠富集血清肌钙蛋白I,经变性、还原、乙酰化、胰酶消化、固相萃取纯化,采用SymmetryShieldC18柱分离,以含0.1%甲酸水溶液和含0.1%的甲酸乙腈溶液为流动相,梯度分离目标肽段,流速0.2 mL/min,温度35℃;使用电喷雾正离子模式扫描,在多反应监测模式下进行测定,目标肽段出峰时间约为4.95 min;方法的最低检测限为2.5 ng/mL,定量限为8.32 ng/mL,在（10~600）ng/mL范围内线性良好,相关系数为0.99;标准物质SRM2921偏倚为-7.94%~-6.49%;低、中、高样本总不精密度分别为6.43%、3.18%和2.75%;携带污染率为-0.47%~0.04%.本方法选择性高、重复性和准确度好、携带污染小,为进一步研究血清cTnI参考方法建立提供依据.