基于长春西汀酸的荧光偏振免疫方法测定磺胺二甲氧基嘧啶

合成了荧光标记物长春西汀酸和示踪物磺胺二甲氧基嘧啶-长春胺酸,并采用薄层色谱法对示踪物进行提纯.以磺胺二甲氧基嘧啶为分析对象,利用示踪物与磺胺二甲氧基嘧啶抗体的特异性反应,采用荧光偏振免疫分析方法(FPIA)研究了荧光标记物的荧光光谱特性.此荧光标记物在357 nm的激发光下,于453 nm处产生一个荧光发射峰;以荧光素为对照,考察了本方法的灵敏性.结果显示,荧光素的检出限仅为2.7 μg/L,而本方法的检测范围为0.5～146 μg/L,检出限达到0.5 μg/L.本方法的RSD为3.0%,重现性好;其它磺胺类药物对磺胺二甲氧基嘧啶的测定不产生明显干扰.运用本方法检测了饲料中磺胺二甲氧基嘧啶,结果与HPLC法相吻合.     

以萘酰亚胺衍生物基荧光高分子为载体和指示剂的 相分离免疫分析方法

以4-甲氧基-N-(2-N’,N’-二甲基氨基乙基-N’-烯丙基)萘二甲酰亚胺氯化铵(DMNAA)为荧光单体, 合成了一种pH敏感荧光高分子聚N-异丙基丙烯酰胺-4-甲氧基-N-(2-N’,N’-二甲基氨基乙基-N’-烯丙基)萘二甲酰亚胺氯化铵-N,N-二甲基氨丙基甲基丙烯酰胺[P(NIP-DMAPM-DMNAA)]. 采用共聚法将日本血吸虫抗原(SjAg)固定在P(NIP-DMAPM-DMNAA)上, 制备P(NIP-DMAPM-DMNAA)-SjAg连接物, 与日本血吸虫抗体(待测, SjAb)发生免疫反应后, 调节pH值, 使荧光高分子相变分离高分子-免疫组分连接物, 最后, 利用蛋白A对抗体的亲和性捕获P(NIP-DMAPM-DMNAA)-SjAg-SjAb, 通过测定高分子自身的荧光信号来定量 SjAb. 该新型高分子具有良好的荧光特性, 对pH响应快速, 37 ℃下相转变pH值为7.2, 分离免疫复合物时造成的损害低. 与传统相分离免疫分析比较, 新方法通过高分子相变分离和蛋白A捕获双重分离作用, 消除了非特异性组分和未反应的特异性免疫成分等的干扰; 利用高分子自身的荧光信号检测, 无须另外的标记物, 大大提高了免疫分析的简便性. 以日本血吸虫抗体为分析对象, 测得线性范围为1～1500 ng/mL, 抗体检出限为1.3 ng/mL, 相对标准偏差为3.6% (n＝10), 结果令人满意.