应用激光解吸质谱和十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳分析蛇毒？…

应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ）和ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电流对吉林省两地市的同种白眉蝮蛇蛇毒中具有抗栓塞药效的精氨酸酯酶进行了分析了分析和比较。ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ法具有快速、准确度高、灵敏度高的优点,两种方法结合,互为补充,取得了令人满意的结果。ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ完全可以直接用作蛇毒成分分离过程中重要的研究手段。     

Ca2+离子对PLA2结构和功能的影响

从旅顺产白眉蝮蛇(Glyodius blomhoffi Brevicaudaus,GBB)蛇毒(GBBSV)中首次纯化得到了电泳纯和质谱纯磷脂酶A2(GBB-PLA2). 采用电泳、质谱、等离子体发射光谱、紫外、荧光光谱测试技术对GBB-PLA2进行了系统表征. HPLC-ESI-MS法测得的精确分子量为13 965.07 amu,HPLC-ESI-MS/MS法鉴定GBB-PLA2为江浙蝮蛇和尖吻蝮蛇蛇毒PLA2的同源性蛋白,分别得到4个和1个同源性肽段. 凝胶过滤、质谱和SDS-PAGE测试技术结果表明,GBB-PLA2以稳定的单体形式存在. 电感耦合等离子体发射光谱分析法(ICP-AES)测得每1个磷脂酶A2含有1个Ca2+离子,Ca2+是PLA2活性所必需的. Ca2+的除去使PLA2活性降低90%,外加Ca2+明显加速PLA2水解底物DPPC的速度. Ca2+起稳定PLA2结构的作用,可使GBB-PLA2的热变性温度提高3 ℃.     

长白山白眉蝮蛇蛇毒精氨酸酯酶1的研究Ⅱ.酶学性质和荧光光谱研究(续Ⅰ)

测得了长白山白眉蝮蛇毒精氨酸酯酶 1的最适反应的pH范围为 7.0～ 8.0 ,且与酶反应底物对甲苯磺酰-L -精氨酸甲酯 (TAME)的反应无明显的最适应反应温度 .荧光光谱的研究结果表明 :该酶的酪氨酸残基的荧光被色氨酸残基的荧光所掩盖 ;同步荧光光谱结果表明 :当发射波长与激发波长差Δλ分别为 2 0nm和 75nm时 ,精氨酸酯酶 1的荧光光谱分别由酪氨酸 (Tyr)和色氨酸 (Trp)残基所贡献 ,且处于亲水性环境中 ;精氨酸酯酶 1的荧光发射强度受溶液酸度变化的影响 .I- ,Acr和NBS对精氨酸酯酶 1的荧光淬灭结果表明这种酶中含有多个色氨酸残基 ,且处于不同的微环境中。     

长白山白眉蝮蛇蛇毒磷脂酶A2的荧光光谱

利用荧光光谱系统研究了长白山白眉蝮蛇蛇毒磷脂酶Ａ２的荧光特性。研究结果表明：当发射波长与激发波长差为２０ｎｍ和７５ｎｍ时,ＰＬＡ２的同步荧光分别主要由酷氨酸（Ｔｙｒ）残基和色氨酸（Ｔｒｐ）残基所贡献。缓冲溶液的酸度变化能够明显影响ＰＬＡ２氨基酸侧链的电荷分布,从而改变ＰＬＡ２的荧光发射强度。了子Ｃａ＾２＋一方面能增强ＰＬＡ２的荧光强度,另一方面也能够加快ＰＬＡ２与底物二棕樟酰磷脂酰胆碱（ＤＰＰＣ）     

中波紫外线与化学致癌物诱导下HaCaT细胞的蛋白表达应答

对角质形成细胞HaCaT分别进行中波紫外线(UVB)照射、2,4-二硝基苯磺酸(DNBS)刺激及UVB+DNBS(UD)共同刺激, 利用二维荧光差异胶内凝胶电泳(2D DIGE)、DeCyder定量分析软件和HPLC-nESI-MS/MS分析技术, 对HaCaT细胞产生的差异表达蛋白进行了鉴定. 有65个蛋白质点发生了明显表达差异(P<0.05), 与UVB或DNBS单独处理细胞相比, 有41个蛋白点表现为UVB和DNBS的正协同效应, 13个蛋白点表现为负协同效应, 5个蛋白点与UVB单独处理相近, 6个蛋白点与DNBS单独处理相近. HPLC-nESI-MS/MS从65个差异表达蛋白质点中共鉴定出60种单一(Unique)蛋白. 采用生物信息学方法对这些鉴定蛋白所涉及的分子功能、参与的生物学过程及信号通路进行了系统分析. 实验得到了与紫外辐射和化学诱导损伤的直接相关蛋白, 有助于研究不同环境条件下皮肤癌的形成及皮肤疾病的有效防护与治疗.     

胶内差异双向电泳-电喷雾串联质谱筛选UVB损伤皮肤细胞潜在的蛋白质靶标

联用胶内差异双向电泳(2D-DIGE)和高效液相色谱-电喷雾串联质谱(HPLC-nESI MS/MS)鉴定人角质形成细胞HaCaT应答中波紫外线(UVB)损伤的差异表达蛋白,筛选UVB影响皮肤细胞正常生理功能潜在的靶标蛋白.结果表明:UVB辐射明显影响HaCaT细胞的蛋白质表达谱,DeCyder软件在每块DIGE凝胶上...     

长白山白眉蝮蛇蛇毒酶的基质辅助激光解吸质谱分析

用基质辅助激光解吸飞行时间质谱法对长白山眉蝮蛇蛇毒所含４种主要酶：磷脂酶Ａ２,精氨酸酯酶,纤溶酶及Ｌ－氨基酸氧化酶进行了纯度鉴定和分子量测定,结果表明ＭＡＬＤＩ－ＴＯ－ＦＭＸ具有灵敏度高,分辨能力强,分析时间短及样品用量少等优点。用ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦＭＳ法分析蛇毒酶的纯度和分子量简捷,快速且重现性好,是ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳所无法比拟的。     

金属离子对蛇毒蛋白生物活性及结构效应的影响

从旅顺产白眉蝮蛇(Gloydius blomhoffii brevicaudus, GBB) 蛇毒中纯化得到了3种电泳和质谱纯蛋白活性组分, 其酶解肽段采用高效液相色谱-电喷雾串联质谱(HPLC-nESI-MS/MS)进行序列测定, 与其它同源性蛇毒蛋白氨基酸序列比对发现, 3种蛋白为新的蛇毒磷脂酶A₂、类凝血酶和金属蛋白酶, 分别将其命名为GBB-bPLA₂, GBB-TLE和GBB-MP. 电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-AES) 测得每个GBB-bPLA₂和GBB-MP中含有一个Ca²⁺; 每个GBB-TLE中含有2个Zn²⁺. Ca²⁺可分别使GBB-bPLA₂和GBB-MP的荧光发射波长向短波方向移动2.0和1.6 nm, 使二者的荧光发射强度提高14.0%和11.0%; Ca²⁺的存在可显著提高二者的热稳定性, 使GBB-bPLA₂和GBB-MP的热变性温度分别提高1.5和2.0 ℃. Zn²⁺使GBB-TLE的荧光发射强度增高4.3%, 但对GBB-TLE的酯酶水解活性、荧光发射波长和热变性温度无显著影响. 金属离子的存在能够不同程度地影响蛇毒蛋白结构热稳定性, 但对蛇毒蛋白生物活性的作用则不同.     

2D-DIGE-HPLC-nESI MS/MS对2,4-二硝基苯磺酸损伤HaCaT细胞差异蛋白质的鉴定

采用Cy2、Cy3和Cy5荧光染料标记蛋白,建立了人角质形成细胞HaCaT受2,4-二硝基苯磺酸(DNBS)刺激前后的双向胶内差异凝胶电泳(2D-DIGE)图谱,每组平行样本数为3.凝胶采用蛋白荧光染料Deep Purple进行后染色(Post-stain).DeCyder定量分析软件在每块凝胶上平均检测到1 200个...     

鼠肝癌淋巴道转移细胞模型的蛋白质组学研究

对2株来源于同一亲本细胞但淋巴道转移力显著不同的小鼠肝癌腹水型细胞株Hca-F(淋巴结转移率75%)和Hca-P(淋巴结转移率25%), 采用荧光差异双向凝胶电泳(2D DIGE)和DeCyder定量分析软件及HPLC-nESI-MS/MS技术, 定量分析和鉴定了小鼠肝癌细胞Hca-F和Hca-P的差异表达蛋白. 结果显示, 有116个蛋白质点表达水平存在明显差异(p<0.05), 在Hca-F中表达上调蛋白质点62个, 下调蛋白质点54个. 对所有116个蛋白质点进行了电喷雾串联质谱鉴定, 共鉴定出109种单一(Unique)蛋白. 其中部分蛋白已被报道与不同类型肿瘤的发生、浸润和转移相关, 多数蛋白质被首次报道与肝癌的淋巴道转移过程直接相关.