流动注射-抑制化学发光法测定克百威

基于在碱性介质中,克百威抑制鲁米诺-过氧化氢-叶绿素铜钠体系的化学发光,提出了流动注射-抑制化学发光法测定克百威含量的方法。试验结果表明:叶绿素铜钠对克百威荧光猝灭过程是静态猝灭过程,叶绿素铜钠与克百威结合形成物质的量比为1比1的稳定配合物,平衡常数(K0)为3.41×105L.mol-1(25℃),结合距离(r)为0.39 nm。克百威质量浓度在0.08～2.00 mg.L-1范围内与其发光强度呈线性关系,方法检出限(3σ/k)为0.03 mg.L-1。此法用于克百威杀虫剂样品的分析,测得方法的平均加标回收率为101.5%。     

超高效液相色谱串联质谱法测定粮食中克百威和涕灭威及其代谢物的残留

1 引言 虽然国家已经禁止使用克百威和涕灭威,但作为高效广谱杀虫剂,在农业生产中使用仍较广泛,其在粮食中的残留对健康和环境造成的毒害也越来越严重.这两种农药在自然界中降解比较快,在农作物中主要以其代谢物形式存在,即3-羟基克百威、涕灭威砜、涕灭威亚砜.若仅对这两种母体化合物进行监测是达不到食品安全监控要求的.许多国家对此类农药代谢物在食品中的残留量都制定了严格的限量规定(MRL).本实验采用超高效液相色谱串联质谱法同时测定了粮食中克百威、涕灭威及代谢物的残留量.     

克百威分子印迹聚合物的合成及其性能评价

以克百威为模板分子,甲基丙烯酸(MAA)为功能单体,二甲基丙烯酸乙二醇酯(EGDMA)为交联剂,采用沉淀聚合的方法制备了克百威分子印迹聚合物。通过红外光谱分析得到模板和功能单体的最佳配比为n(carbofuran)∶n(MAA)=1∶6。印迹聚合物的红外光谱测定结果表明,聚合物中存在与模板分子相互作用的特征基团;从印迹聚合物的扫描电镜图观察到分子印迹聚合物(MIP)与空白聚合物(NIP)的表面形态不同,可推论MIP存在与模板分子相互识别的结合位点。通过静态平衡结合法研究了模板分子聚合物的吸附能力、结合动力学和选择特性。结果表明,与非印迹聚合物相比,印迹聚合物对克百威具有较强的吸附特性和很好的专一选择性,3h后基本达到最大吸附量。采用固相萃取柱预处理样品,用高效液相色谱法测定自来水中10、50、100mg/L克百威的加标回收率为94%～117%,相对标准偏差(n=3)为2.5%～4.7%。     

克百威与DNA之间作用的光谱学研究

利用吸收光谱法和荧光光谱法研究了克百威与ct DNA之间的相互作用。结果表明,ct DNA可使克百威的吸收光谱发生减色以及红移现象;ct DNA对克百威的荧光存在静态的荧光猝灭。两种光谱都支持克百威是以嵌插方式与ct DNA形成两者的加合物。溶剂以及离子强度对于两者加合作用存在不同的影响。     

基质固相分散-高效液相色谱法测定水稻中的痕量克百威

克百威(carbofuran)为高效内吸广谱杀虫剂。克百威的广泛使用使许多食物、作物及动物饲料中有可能含有痕量的克百威。近十几年来,各国分析工作者应用高效液相色谱(HPLC)对食物及生物样品中克百威残留的研究较多,分析的对象较广泛,但样品前处理均过于复杂[1,2]。　　基质固相分散(MSPD)是1990年Long等[3]报道的一种新的样品提取分离技术。其优点在于简化了许多传统的复杂的样品前处理,最大限度地避免了被测残留物的流失。此技术提取样品完全,且方法简单,易于操作。本文将MSPD技术用于水稻中克百威残留物的HPLC分析,并对定量检测条…     

应用响应曲面试验设计法研究克百威气相色谱测定中的色谱行为

应用响应曲面试验设计法研究了气相色谱不同的进样方式,包括常规分流不分流进样以及柱头进样对克百威色谱行为的影响。通过构建模型,对试验的影响因子包括进样口温度、初始柱温和栽气流速对克百威色谱行为的相对重要性进行了评价。并利用面积归一化方法,对进样口温度和初始柱温对克百成分解的影响进行了定量评价和探讨。结果表明：在常规进样方式中,进样口温度和初始柱温是影响克百威分解的主要因素。通过色谱条件的优化,解决了常规进样不能解决的克百威的热分解问题。     

Lipocalin文库的构建及与克百威有结合活性的小分子筛选

构建大菜粉蝶Lipocalin蛋白家族中的BBP蛋白突变文库, 依据基因序列, 分别设计10条和12条引物, 通过PCR重叠延伸法得到包含随机突变蛋白BBP的基因序列, 并重组到噬菌粒载体pCANTAB5E中构建Lipocalin突变文库, 库容达到4.0×109. 以偶联分子BSA-克百威和OVA-克百威为靶分子, 采用柱式和平皿式交叉法对Lipocalin文库进行了筛选, 用竞争洗脱法洗脱特异结合活性的噬菌体. 经过3轮筛选, 从第3轮的洗脱液中随机挑选了10个重组克隆, 用Dot-blotting法检测出K7 anticalin分子能与克百威特异结合. 为研发克百威的Anticalin类检测试剂盒提供了候选分子, 也为拓宽Lipocalin文库在有害小分子检测方面的应用奠定了基础.     

基于定点突变的抗克百威单链抗体的亲和力成熟

为获得亲和力更高的抗克百威(CBF)单链抗体(scFv), 从抗CBF scFv氨基酸序列出发, 通过同源模建获得抗体模型, 找出抗体中的活性口袋区域, 进而将小分子药物与抗体进行分子对接, 发现疏水作用和氢键对于抗体亲和力具有重要作用. 进一步对口袋内亲水氨基酸残基HArg40和LHis38进行模拟替换, 再进行分子对接分析, 发现当以亮氨酸为突变氨基酸时, 对接评分最高. 在此基础上, 通过构建突变scFv基因及可溶性表达, 采用ELISA法对进化后的单链抗体(evoscFv)进行了鉴定. 结果表明, evoscFv对CBF的IC₅₀值为18.11 μg/L, 低于野生型抗体的27.25 μg/L, 亲和解离常数K_d为4.06×10^-8 mol/L, 相对亲和力比野生型scFv提高了2.23倍, 说明通过分子对接分析及对抗体活性口袋中氨基酸残基进行替换, 获得了一个亲和力更高的突变体抗体.     

支持向量回归-同步荧光光谱法预测鸭肉中克百威残留

为了满足鸭肉中克百威残留分析及快速检测的要求,基于克百威水解物在巯基乙醇存在的条件下能与邻苯二甲醛反应产生具有强荧光性衍生物的方法,建立了应用同步荧光光谱法测定鸭肉中克百威残留量的预测模型。对含有克百威鸭肉样品的三维同步荧光光谱进行分析,确定其最佳波长差Δλ为120 nm;利用遗传算法(GA)结合交互验证均方根误差(RMSECV)从240～450 nm光谱中筛选出19个波长作为定量分析模型的输入特征变量;对SVR、PCR、PLS 3种回归模型的性能进行比较,实验发现SVR模型的预测结果最好,其预测集的决定系数(r2)和预测均方根误差(RMSEP)分别为0.999 4和0.878 7。研究结果表明,采用同步荧光光谱法结合支持向量回归算法测定鸭肉中克百威的残留量,具有快速、预测精度高等特点,可为检测鸭肉中的克百威残留量提供一种可行的方法。     

家蝇中乙酰胆碱酯酶的提取纯化及应用研究

研究了用Procainamide亲和层析色谱纯化家蝇头部乙酰胆碱酯酶(AChE),AChE的纯化倍数为63.27倍,产率为93.86%。通过测定AChE活力被抑制的程度可以快速测定敌敌畏和克百威残留量。研究结果表明,在0.09~200μg/L范围内,AChE抑制率与敌敌畏和克百威质量浓度的回归方程分别为Y=9.1321 Lnρ 33.904(r=0.9893),Y=10.738 Lnρ 26.125(r=0.9962);敌敌畏与克百威的检出限分别为1.13±0.42μg/L和2.28±0.76μg/L,对果蔬等实际样品的加标回收率为74%~118%。