用荧光探针签别CYP2C9*3基因

用一种基激复合物荧光探针系统来签别碱基错配的CYP2C9*3基因,该系统选择两个分开的与靶点碱基相对应的12碱基荧光标记的寡核苷酸作为探针,分别对24碱基、47碱基、质粒(3165bp)的靶点CYP2C9基因和CYP2C9*3基因进行杂交配对,结果该基激复合物荧光探针系统能有效签别各种长度的CYP2C9基因和CYP2C9*3基因,背景干扰很低,灵敏度高,可尝试用于其他基因型的遗传多态性的签别。     

负压空化提取甘草酸工艺

负压空化提取甘草酸工艺;负压空化;甘草;甘草酸;提取     

RP-HPLC/二极管阵列检测器同时测定飞机草中3种黄酮

应用高效液相色谱法/二极管阵列检测器同时测定了飞机草中木犀草素、槲皮素和山柰酚的含量。色谱柱HiQ sil C18W柱(4.6 mm×25 cm,5μm),流动相V(甲醇)∶V(水)∶V(磷酸)=50∶49.8∶0.2,检测波长槲皮素254 nm,木犀草素和山柰酚360 nm,温度30℃,流速1 mL/min,进样量10μL。确定了以超声波提取法制备飞机草分析样品的方法:溶剂为体积分数85%的乙醇,液固比为10∶1(mL/g),提取时间为1 h。结果表明,3种黄酮在0.01×10-3~0.10×10-3g/mL范围内呈现良好线性关系(R2>0.999 0),平均加样回收率分别为99.601 7%、99.032 6%和99.450 8%,RSD<2%。该方法操作简便、准确度高,可快速测定飞机草中木犀草素、槲皮素和山柰酚3种物质的含量。     

一种改良的红豆杉成熟针叶总RNA提取方法

红豆杉(Taxus chinensis(Pilger)Rehd.)是一种重要的药源植物,根据红豆杉针叶特点,本研究提出改良RNA提取方法,即十六烷基三甲基溴化铵-氯化锂(CTAB-Li Cl)联用法,以红豆杉的幼嫩、成熟针叶为材料,采用TRIzol法提取RNA,结果表明,TRIzol法提取嫩针叶中的RNA质量完整,成熟针叶中的RNA质量不完整;针对成熟针叶采用CTAB法、SDS-酚法和改良的CTAB-Li Cl法提取RNA,并进行了质量验证比对显示,CTAB法和SDS-酚法提取的RNA质量差,并存在不同程度的多糖、多酚和DNA污染,改良CTAB-Li Cl联用法提取红豆杉成熟针叶的RNA质量完整,A_(260)/A_(280)比值在1.9~2.0之间,RNA产率最高,分别为CTAB法和SDS-酚法提取的RNA产率的1.37和1.24倍。进一步反转录后,利用特异性引物进行扩增验证,发现扩增的片段条带清晰,片段大小符合预期。成熟针叶中高质量的RNA更有利于红豆杉分子生物学方面的深入研究。     

反相高效液相色谱法快速测定长春花中4种生物碱

采用反相高效液相色谱法同时分离测定4种长春花吲哚类生物碱。以水：二乙胺=986：14，用磷酸调节pH=7．2(溶液A)，甲醇：乙腈=4：1(溶液B)，380mL A和620mL B混合作为流动相，流速2mL／min，进样量10μL，220nm下检测，以恒流洗脱方式在25min内分离了长春碱等4种成分。同时还研究了流动相组成、pH值等对分离效果的影响。对实际样品分析，取得了较好结果。     

改变检测波长高效液相色谱法测定喜树碱和羟基喜树碱的含量

建立了改变检测波长测定喜树种子中喜树碱和 10 羟基喜树碱的高效液相色谱法。使用TechspheseODSC18(4.6mm× 2 5cm ,5 μm)色谱柱 ,以水∶乙腈 =3∶7(V/V)为流动相 ,流速为 1.0mL/min ,2 5℃下检测。检测波长 :0～ 8min时为 2 6 6nm ,8～ 2 0min时为 2 5 4nm。结果表明 :喜树碱的平均回收率为 10 0 .92 % ,RSD值 1.4 0 % ;羟基喜树碱的平均回收率为 10 0 .0 9% ,RSD值 1.34%。此方法简单、可靠。     

温控分子动力学研究微管蛋白活性肽链的折叠机制

运用温控和常温分子动力学方法, 研究了微管蛋白活性部位Pep1-28肽链的折叠机制, 总模拟时间为380.0 ns. 对于温控分子动力学, 逐渐降温可以清晰显示Pep1-28肽链的折叠途径, 发生明显折叠的温度约为550 K, 其折叠和去折叠可逆机制为U(>1200 K)←→I1(1200-1000 K)←→I2(800 K)←→I3(600 K)←→I4(450 K)←→F1(400 K)←→F2(300 K), 其中U为去折叠态构象, I1、I2、I3和I4是折叠过程中的四个重要的中间态构象, F1和F2是两个结构相近的折叠态构象. 对于常温(300 K)分子动力学, 其构象转变和折叠过程相当迅速, 很难观察到有效、稳定的中间态构象. 尤其引人注意的是, 其折叠态结构陷入了能量局域极小点, 与温控(300 K)的有较大差异, 两者能量差高达297.53 kJ·mol-1. 可见, 温控分子动力学方法不仅清晰地显示多肽和蛋白质折叠过程的重要中间态构象, 为折叠和去折叠机制提供直接、可靠的依据, 而且还有助于跨越较高的构象能垒, 促使多肽和蛋白质折叠以形成全局能量最低的稳定结构.     

大孔吸附树脂分离纯化异甘草素的研究

研究大孔吸附树脂分离纯化异甘草素的工艺条件及参数。通过研究HPD-600、D4020、D101、AB-8、NKA-II、AL-2和NKA-9树脂对异甘草素的吸附和解吸附能力,筛选最佳树脂为AB-8,并研究了其对异甘草素的吸附和解吸附性能,确定了最佳的吸附与解吸附工艺参数,吸附:pH=5,室温,流速1.5BV/h,溶液处理量为5BV;脱附:洗脱剂为70%的乙醇溶液,流速1BV/h,洗脱剂用量4.5BV。异甘草素样品溶液经AB-8树脂吸附与脱附后回收率为76.7%,纯度由2.02%提高到29.1%,提高了14.4倍。实验结果表明,AB-8树脂对异甘草素的吸附量大,脱附容易,可以应用于异甘草素的分离纯化。     

甘草多糖超声提取工艺及数学模拟

甘草为豆科植物,甘草(Glycyrrhiza)的根及根状茎为常用中药[1],甘草多糖(g1ycyrrhiziapolysaccharide,GPS)是甘草重要的活性成分之一,具有明显的抗病毒和抗肿瘤作用[2～4]。自1964年Revers发表甘草提取物可医治胃溃疡以来,各国学者对甘草化学成分提取研究十分活跃,但多数只注重三萜类化合物和黄酮类化合物的提取[5～7],而提取GPS的研究较少[8,9]。超声技术用于植物有效成分的提取具有明显的优势,此技术可以大幅度地提高有效成分的提取率,提高工作效率,节省溶剂,简化提取操作,在天然药物有效成分提取中具有良好的应用前景[10]。本文以甘草为原料,采用超声法对甘草中GPS的提取方法进行了研究,获得了优化的超声提取条件,建立了甘草多糖的超声提取的数学模型,对进一步优化操作条件具有重要意义。仪器、试剂及原料:KQ250DB型超声波清洗仪(昆山市超声波仪器有限责任公司);UV4060紫外分光光度计(AmershamPharmaciaBiotech,瑞典);Virtissentry8SL型冷冻干燥机(TheVirtisCompanyGardiner,美国)。葡萄糖、浓硫酸均为分...     

离子液体[Etpy]BF_4催化苯并咪唑类化合物的微波合成及其抗菌活性

在微波辐射下,离子液体[Etpy]BF4催化邻苯二胺与取代芳醛(或直链醛)的反应,合成了12个2-取代苯并咪唑类化合物(2a~2 l),其结构经1H NMR,IR和MS表征。最佳反应条件为:邻苯二胺1 mmol,芳醛1mmol,无水乙醇6 mL,[Etpy]BF40.2 mmol,于25℃/500 W反应2 h~3 h,产率78.6%~97.7%。初步生物活性测试结果表明,部分化合物对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌都具有较好的抑制活性。