分子印迹固相萃取/高效液相色谱法测定猪肝中盐酸克伦特罗的方法研究

建立了分子印迹固相萃取/高效液相色谱法测定猪肝中盐酸克伦特罗残留量的方法。以ASB C18色谱柱(250 mm×4.60 mm,5μm)分离,流动相为甲醇-水(45∶55,p H 3.0),紫外检测波长243 nm,进样量10μL,流速0.6 m L/min,柱温30℃。分子印迹固相萃取条件为:上样溶剂为双蒸水,上样流速为0.6 m L/min;洗脱剂为1%三氟乙酸的甲醇溶液。上述优化条件下,该方法在0.432~4.32μg/m L范围内线性关系良好,相关系数(r)为0.999 0。加标回收率为84.7%~92.0%,相对标准偏差(RSD)为1.5%~1.8%。方法的准确度和精密度满足残留分析的要求。     

固相萃取-气相色谱-质谱分析肉样中盐酸克伦特罗的残留量

建立了固相萃取 气相色谱 质谱联机分析肉样中盐酸克伦特罗残留量的方法。对盐酸克伦特罗在C1 8和离子交换固相萃取柱上的保留行为进行了研究 ,发现不同浓度盐酸克伦特罗的固相萃取回收率在 75 %～ 95 %之间 ;肉样中的加标回收率在 70 %～ 83 % ;相对标准偏差在 4 .95 %～ 1 3 .4 % ;最低检出限为 1 μg kg。盐酸克伦特罗的硅烷化产物 ,采用选择离子的模式进行检测 ( 86、2 4 3、2 62、2 77) ,衍生物的峰面积与样品浓度在0 .0 0 2 5 2～ 2 .0 2mg L范围内呈良好的线性关系 ,线性回归系数大于 0 .9999。     

动物尿液中盐酸克伦特罗的分子印迹固相萃取-气相色谱-质谱法研究

采用分子印迹聚合物(MIP)固相萃取小柱提取、净化并富集猪尿液中的盐酸克伦特罗分子,用N,O-双三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)衍生化,毛细管气相色谱-质谱联用(选择离子模式,选择离子为277、262、243和86)对衍生物分析。优化了MIP固相萃取柱的淋洗条件,考察了MIP固相萃取柱的净化效果和消除基体干扰能力,建立了对动物尿液中盐酸克伦特罗的定性、定量分析的方法。在优化条件下,本法检出限(LOD)为0.51μg/L,定量限(LOQ)为1.00μg/L;不同盐酸克伦特罗加入量的回收率为71.0%~89.3%;相对标准偏差为3.2%~9.7%。将该方法与农业行业标准方法比较,结果吻合较好。但该方法灵敏度和精密度高,操作更为简单、快捷。     

动物组织中克伦特罗残留的定量分析

克伦特罗(cknbuteml)，化学名称为4-胺基-α-(叔丁胺甲基)-3，5-二氯苯甲醇，分子式为C12H18Cl2N2O，为β2受体兴奋剂。克伦特罗能使动物生长速度加快，胴体瘦肉率提高，但会在动物内脏和组织中形成蓄积性残留。人食用该动物组织而发生中毒的事件时有发生。因此，检测食用动物组织中克伦特罗残留具有重要意义。本实验利用高效液相色谱串联质谱检测猪肌肉组织中的克伦特罗含量，取得满意结果。     

羟丙基-β-环糊精固载相薄层色谱法拆分盐酸克伦特罗对映体

以羧甲基纤维素钠为交联剂，将羟丙基-β-环糊精固载在硅胶GF254板上，作为固定相制成层析薄板，成功用于拆分盐酸克伦特罗对映异构体。考察了展开剂对层析薄板分离效果的影响，发现展开剂中醇的种类和比例对拆分效果有很大的影响，含4个碳的醇类包括正丁醇、仲丁醇、叔丁醇可使盐酸克伦特罗得以拆分。确定了实验的最佳条件：V（乙腈）：V（叔丁醇）=50：50，展开时间约为12min。     

猪肝脏和肌肉组织中β-兴奋剂克伦特罗的高效液相色谱电喷雾质谱分析研究

建立了猪肉和肝组织中克伦特罗的高效液相色谱电喷雾质谱(HPLC—ESI／MS)分析方法。在最佳色谱条件下克伦特罗的保留时间为16min,样品空白无干扰。定量分析的线性范围为2—100mg／L;最低检出限为0．75mg／L;方法回收率为95％-98％;RSD小于2．0％。利用ESI／MS／MS对β-兴奋剂克伦特罗进行了质谱解析,选择特征离子峰m／z277、259和203作为准确定性的依据。对实际生物样品猪瘦肉和肝进行检测结果表明,当样品中克伦特罗残留含量较高时,可以利用紫外检测数据对其进行准确定量。当残留含量低于最低检出限时,可以根据HPLC／ESI／MS结果中有无特征峰出现,给出较准确的定性结果。     

盐酸克伦特罗在乙炔黑电极上的电化学行为及其分析测定研究

研究了盐酸克伦特罗(CLB)在乙炔黑电极上的电化学行为,发现阴离子表面活性剂十二烷基苯磺酸钠(SDBS)能显著提高CLB的氧化峰电流并降低其氧化过电位。优化了实验参数,建立了一种直接测定CLB的新电分析方法,其线性范围为1.0×10-7~7.5×10-5mol/L,开路富集1 min后的检出限为2.5×10-8mol/L。平行10次测定1.0×10-5mol/L盐酸克伦特的RSD为3.1%。方法用于猪尿中盐酸克伦特罗含量的测定。     

增强化学发光酶免疫法对猪肉中盐酸克伦特罗的检测

建立了猪肉中克伦特罗(CLB)的直接竞争化学发光酶免疫检测(dc-CLEIA)方法。通过优化离子强度、pH值确立了化学发光酶免疫法的标准曲线,优化后dc-CLEIA的检出限可达0.02μg/L。猪肉中的盐酸克伦特罗用高氯酸提取、SPE净化后绘制基质曲线,基质曲线与标准曲线吻合,说明基质影响基本消除。测定0.10、1.0、5.0μg/kg 3个水平的添加回收率,平均回收率为83%~98%,批内与批间的相对标准偏差均小于15%。进一步研究了dc-CLEIA与HPLC两种方法测定猪肉样品的相关性,结果显示两者测定结果相关性良好,r=0.964 7,说明所建立的直接化学发光酶免疫方法可用于实际样品的检测,结果准确可靠。     

CdTe/ZnSe核壳量子点免疫层析试纸条检测克伦特罗的研究

采用巯基丁二酸作为表面修饰剂,水相法合成水溶性的CdTe/ZnSe核壳量子点,然后在N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)的作用下,将CdTe/ZnSe核壳量子点与抗克伦特罗多克隆抗体(Anti-CLE pAb)连接。通过凝胶电泳和斑点杂交实验,验证CdTe/ZnSe核壳量子点与Anti-CLE pAb连接成功,并且CdTe/ZnSe-Anti-CLE pAb偶联物能识别克伦特罗-BSA抗原(CLE-BSA)。光谱分析表明,量子点与抗体连接后荧光增强,荧光峰位从628nm红移至635nm。将合成的CdTe/ZnSe-Anti-CLE pAb偶联物作为指示克伦特罗(CLE)分子的荧光标记物,制备出一种用于检测CLE的免疫层析试纸条,其最低检测量可达1μg/L。与ELISA法的对比实验表明,此试纸条能应用于CLE残留的快速检测。     

光谱法结合MCR-ALS研究盐酸克伦特罗与牛血清白蛋白的相互作用

模拟人体生理条件(pH=7.4),用荧光光谱法结合多元曲线分辨-交替最小二乘法(MCR-ALS)研究盐酸克伦特罗(Clen)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。实验采用同一滴加模式及荧光和紫外光谱方法研究盐酸克伦特罗与BSA的相互作用,对经典的荧光和紫外光谱数据矩阵加以扩展,增加实验数据的信息量;由渐进因子分析法(EFA)得到的因子数和体系中各组分的浓度初值后,应用MCR-ALS对该扩展的2种光谱矩阵进行迭代计算,较好地分辨出传统方法无法得到的动态作用中各种物质的光谱图和浓度变化趋势图,并根据浓度趋势图计算出Clen与BSA的表观结合常数和结合比,结果与用双对数方程得到的结合常数和作用位点数吻合。通过同步荧光光谱法进一步发现克伦特罗对BSA的构象有一定的影响。