基于单细胞光学技术探究微波和高温协同作用对微生物影响机制的研究

微波(300 MHz～30 GHz)对生物组织具有明显的热效应和生物效应,能极大程度上抑制微生物芽孢的生长,但从单分子层面研究微波和温度对干燥芽孢的影响机制鲜有报道。采用激光拉曼光镊技术(激光波长为532 nm,功率为2.5 mW),测量并对比不同温度下(50～125℃)微波处理(2 450 MHz, 150 W)芽孢的平均拉曼光谱,发现温度处于125℃时,1 017 cm^-1峰强明显下降,表明高温和微波对芽孢内膜造成了损伤。该研究还使用原子力显微镜观察不同条件下芽孢的表面形貌特征,发现处理后的芽孢表面均有附着物,极有可能为CaDPA,温度越高现象越明显,而且随着温度的上升,芽孢的尺寸也随之下降,说明微波和高温的协同作用,导致芽孢核芯分子的泄露,同时也加剧了水分子蒸发使体积减小。该研究的结论为研究微波和温度协同作用对芽孢的影响提供了特征参数,也为应用单细胞光学技术开展理化因子对微生物影响机制的研究开拓思路。     

Identification of lactobacillus casei-BDI and Streptococcus thermophilus by fluorescence spectra

Fluorescence analysis applied in the study of lactic acid bacteria （LAB） provides a new method and theory to study probiotics and realize the detection and identification of the strains. It is also possible to achieve automation and computerization. In this letter, the differences between the fluorescence spectra of lactobacilIus casei-BDI （Lc-BDI） and Streptococcus thermophilus （St） are shown, and the second-order derivative spectra are used to further study the diversity of these two strains. According to the results, with the excitation wavelengths of 285 and 340 nm, there are significant differences between them. The experiment is repeated for 6 times, showing good repetitiveness.     

黄钾铁矾的生物合成与鉴定

利用氧化亚铁硫杆菌的生物催化氧化作用,在FeSO4—K2SO4—H2O体系中和常温常压条件下合成赭黄色的黄钾铁矾。借助SEM,XRD,FTIR,ICP—AES等方法对它的化学组成和结构进行了分析与表征。结果表明,Thiobacillus ferrooxidans休止细胞可在2天内将FeSO4-K2SO4-H2O体系中的Fe^2 全部氧化为Fe^3 ,Fe^3 在高浓度硫酸根、K^ 存在和酸性条件下水解生成赭黄色高铁沉淀,经鉴定为黄钾铁矾,其晶体粒径均匀,分散性好,且没有无定形的羟基硫酸高铁副产物。     

GC-MS分析氧化亚铁硫杆菌培养液的挥发性成分

GC- MS联用技术对耐强辐射微生物氧化亚铁硫杆菌 [Thiobacillus ferroxidans(T.f) ]的挥发性代谢产物进行了研究 ,发现 4 3种代谢物 ,由标准谱图鉴定了其中 2 3种化合物。     

定向进化提高枯草芽孢杆菌脂肪酶的活力

通过定向进化的方法, 提高了一个新的源于枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis) 的脂肪酶 (BSL2) 的活力. 经过两轮易错 PCR 以及高通量筛选, 最终获得了比活力为野生出发酶 4.5 倍的突变体 3-1B2. 基因比对结果表明, 共有两个氨基酸发生了突变. 突变酶的酶学性质研究发现, 与野生酶相比, 它的热稳定性及 pH 稳定性略有增加, 最适温度和最适 pH 值则无太大的变化. 同源模建了 BSL2 与 3-1B2 的结构, 并与底物进行了分子对接. 结果表明, 突变体 3-1B2 的结合能比野生型 BSL2 低 1.29 kcal/mol, 活性中心 Ser77 残基与底物羰基的距离也由 0.319 nm 减小为 0.278 nm, 因而加快了酶反应速度, 提高了酶活力.     

动物组织中粘杆菌素、杆菌肽及维吉尼霉素残留量的液相色谱-串联质谱检测

建立了动物组织(肌肉、肝脏、肾脏)中粘杆菌素、杆菌肽和维吉尼霉素等多肽类抗生素残留量的检测方法.样品经甲醇-0.1%甲酸提取,Oasis HLB固相萃取柱净化后,利用液相色谱-串联质谱进行定性、定量分析.3种多肽类抗生素的检出限分别为粘杆菌素25 μg/kg,杆菌肽50 μg/kg,维吉尼霉素20 μg/kg;平均回收率分别为粘杆菌素89% ～98%,杆菌肽90% ～99%,维吉尼霉素92% ～100%;相对标准偏差为1.91% ～9.81%.方法具有快速简便、准确度和灵敏度高、重复性好等特点,适于动物组织中多肽类抗生素的测定.方法的技术指标满足国内外对多肽类抗生素残留量检测的要求.     

副猪嗜血杆菌的MLST分析及数据库建立

对副猪嗜血杆菌86个分离株的7个看家基因,包括ATP合成酶β链(atpD)、翻译起始因子IF-2(in-fB)、核糖体蛋白β亚基(rpoB)、苹果酸脱氢酶(mdh)、6-磷酸葡萄糖脱氢酶(6pgd)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(g3pd)和延胡索酸还原酶B(frdB)进行了PCR扩增;对扩增产物进行了测序;对序列编辑、队列     

农杆菌介导转化新疆棉花体系的优化

以新疆主栽棉花品种新陆早19号和新陆早23号下胚轴为外植体,以GUS基因为报告基因,通过检测GUS基因在转化后的棉花下胚轴中瞬时表达情况,分析了菌液浓度、浸染时间、乙酰丁香酮浓度、超声波辅助处理、共培养温度和共培养时间等因素对GUS瞬时表达的影响.实验结果表明:菌液浓度OD600=0.5,浸染时间15 min,乙酰丁香酮浓度100μmol/L,24 C共培养72 h的转化条件下GUS基因瞬时表达率最高.     

A Novel Thermostable β-Galactosidase from Geobaciilus kaustophilus HTA42

A novel thermostable β-galactosidase gene, designated as GkGallA, from the thermophilic bacterium Geobacillus kaustophilus HTA426 was cloned and heterologously overexpressed in Escherichia coli（E, coli）. Based on the sequence analysis, GkGallA belongs to the glycosyl hydrolase family 1 that was the first β-galactosidase of bacterial origins expressed by us in this family. The apparent molecular weight of GkGallA determined by sodium deodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis is 52000. It exhibited the highest activity toward p-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside at pH 7.8 and 70℃ and displayed high thermal stability, Divalent cations are prerequisite for the activity of GKGallA, with the highest activity in the presence of Mn2＋. Moreover, the three-dimensional structure of GkGaI1A was modeled to speculate the structure of the catalytic residues and the reac- tion mechanism. The catalytic residues consisting of Glu166 and Glu355 were verified by site-directed mutagenesis.     

基于PhiX174基因E介导的遗传灭活多杀性巴氏杆菌

采用基因工程方法,将PhiX174噬菌体裂解基因E和温敏控制表达系统与质粒pPBA1100基因杂交,构建了重组子pPBA1100-E。将重组子转化到多杀性巴氏杆菌中,通过温度诱导使裂解基因表达。用限制性内切酶检验重组子,扫描电镜观察多杀性巴氏杆菌细菌幽灵和菌落形成单位评价遗传灭活率。结果表明:重组质粒经限制性内切酶酶切鉴定,琼脂糖电泳呈现3条谱带,分子量与理论值一致;扫描电镜观察表明,重组子在多杀性巴氏杆菌中成功表达,获得了细菌幽灵;菌落形成单位检验结果显示,多杀性巴氏杆菌遗传灭活率达到99%。为制备天然细菌外膜蛋白抗原疫苗提供技术依据。