多孔环炉技术的研究(Ⅱ)——在疏水毛细管载体上持续冲洗法机理的探讨

本文提出了一个计算冲洗液在毛细管载体上疏水能力和估算冲洗速度的模型,讨论了改变冲洗液表面张力对冲洗速度影响的因素,以实验数据对该模型做了定性检验,该模型为多孔环炉技术的开发奠定了基础。     

环爐技术用滤纸的选择

用于环炉技术的滤紙貭量应該較高:(1)必須是定量滤紙,不含杂貭,(2)扩散速度适中,不太快也不太慢,(3)組織均匀,所成斑点很圆。鉴于这一技术在国內漸为各方面所注意,大家都很关心国产滤紙能否使用的問題,我們对21种国产和进口滤纸进行了以下試驗:     

用计量置换模型研究镧系元素“四素组”效应

本文以SDM_(-R)中的各物理参量为基点,描述镧系元素的“四素组”效应,讨论“四素组”效应在色层分离中产生的原因及机理,将参量Δ1gI定义为分离因子;并讨论影响N值的各种因素。     

一种液相色谱分离与质谱鉴定白血病K562细胞蛋白的方法

分别通过3种色谱模式:反相高效液相色谱(RPLC)、弱阴离子交换-反相高效液相色谱(WAX-RPLC)和排阻-反相高效液相色谱(SEC-RPLC)对K562细胞的蛋白质进行分离,收集的色谱馏分采用基质辅助电离解析时间飞行质谱(MALDI-TOF MS)进行鉴定后,比较所获得的蛋白质数据.结果显示:当选择SEC-RPLC模式构建K562细胞蛋白质图谱时,检测到的蛋白质数目最多,信息最为全面.此法的建立为白血病的临床研究提供了一种有效的手段.     

连续棒状弱阳离子交换柱的合成及其对蛋白质保留行为

以甲基丙烯酸缩水甘油酯为单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂在空管柱内就地聚合制备了一种聚合物连续棒状色谱基质,并通过“在线”化学改性将其修饰为弱阳离子交换柱。考察了该色谱柱的孔结构特征、表面亲水性能、对标准蛋白的分离效果和ｐＨ值对保留行为的影响以及色谱柱的重现性。结果表明,该色谱柱对蛋白的分离性能及重现性良好,柱寿命不短于半年。对溶菌酶的活性回收率达９６．２％。流动相流速为８．０ｍＬ／ｍｉｎ条件下     

反相高效液相色谱中溶质保留过程的热力学研究 Ⅱ. 焓变及其分量, 吸附及解吸附焓变

依据液相色谱中溶质计量置换保留模型, 从理论上分别推导出了在反相高效液相色谱(RP-HPLC)中lgI(与1mol溶质对固定相的亲合势有关的常数)和Z(对应于1mol溶质被固定相吸附时释放出置换剂的摩尔数)对绝对温度导数的线性关系式。发现非极性与极性小分子溶质的lgI和Z均具有热力学衡常数的特征。如在前报[1]报告的吉布斯自由能变一样, 也推导出了可将溶质保留过程中的总吸附焓变△H(Pa)分成两个独立的分量, 吸附焓变△(1,a)和解吸附焓变△H(Z,D)的表达式。可同时对在流动相中不同置换剂浓度条件下的△H(Pa)和△(Z,D)进行估算,并与实验值进行了比较, 偏差小于±10%。并用△H(1,a)和△H(Z,D)值对溶质在RP-HPLC的保留过程中热变化进行了解释。     

反相高效液相色谱中溶质保留过程的热力学研究Ⅲ: 熵变及其分量,吸附及解吸附熵变

从理论上推导出了用柱相比和不用柱相比时溶质在反相高效液相色谱保留过程中的总熵变△S~(~P~a~)的两个表达式, 后者亦为计量置换保留模型中线性参数与该过程热力学函数间的定量表达式。△S~(~P~a~)也能够被分成两个独立的分量,吸附熵变△S~(~Ⅰ~,~a~)和解吸附熵变△S~(~Z~,~D~)。依据液相色谱中溶质计量置换保留模型中容量因子与流动相中置换剂活度a~D间的定量关系, 对在不同a~D条件下熔质的总熵变、吸附及解吸附熵变进行了估算, 并用实验测定的总熵变△S~(~P~a~,~e~)与估算总熵变△S~(~P~a~,~c~)进行了比较, 获得了结果的一致性。本文对传统的"吸附伴随着熵减小, 相反, 解吸伴随着熵增大"的定性规律予以定量的说明。     

反相高效液相色谱中溶质保留过程的热力学研究4: 焓熵补偿

依据液相色谱中溶质计量置换保留模型, 对溶质在反相液相色谱(RPLC)保留过程及其吸附、解吸附过程中的焓熵补偿进行了研究, 证实了在RPLC中焓熵补偿确实存在。从焓熵补偿的定义出发, 从理论上证明了溶质在保留过程中的焓熵补偿温度本质上为溶质保留值的收敛温度, 其数值为Z对1/T线性作图的斜率与截距之比。与惯常计算焓熵补偿温度的方法相比, 本文的方法所得补偿温度更为合理且不受流动相中强溶剂浓度变化的影响。     

疏水界面上标准蛋白质吸附等温线的研究

测定了几种具有代表性的标准蛋白质在疏水色谱填料上的吸附等温线.除溶菌酶和牛血清白蛋白的吸附近似呈线性外,细胞色素-c、肌红蛋白、胰岛素、α-淀粉酶和卵清蛋白均呈凸型吸附.用Langmuir、计量置换吸附模型(SDM-A)、BET和Jovanovic吸附模型对这些蛋白的吸附等温线拟合后发现,SDM-A关系式能够良好描述这7种蛋白的吸附,Langmuir关系仅能较好地描述后5种蛋白质的吸附.而Jovanovic和BET关系式对上述两类蛋白质吸附的描述欠妥.实验发现对于不同盐浓度条件下卵清蛋白的吸附,用SDM-A和Langmuir公式拟合所得的参数与盐浓度之间呈现出一定的规律性.     

前沿洗脱色谱中溶质突破曲线的研究

考虑了溶质与色谱固定相间的相互作用和固定相表面上活性点总数不变以及溶质在柱内的质量平衡,推导出了描述溶质在前沿色谱中突破曲线的基本方程,对此方程的性质进行了初步讨论,并将实验测定的几种生物大分子的洗脱曲线与本文推导出的方程进行了比较,获得了结果的一致性。