蛙虹彩病毒一个晚期基因的鉴定

从沼泽绿牛蛙虹彩病毒(Rana grylio virus,RGV)基因组中克隆了十四烷基化膜蛋白(myristylated membrane protein,MMP)基因的全部编码区,序列分析表明,RGV romp基因全长972 bp,编码一个长为323 aa,分子量为35×103的蛋白.氨基酸同源性比对分析,与同为蛙病毒属的其他病毒的相应蛋白同源性都在64%以上.构建重组表达载体,进行了原核表达,获得一条约53×103的融合蛋白,并制备出抗血清.通过RT-PCR和Western blot分析确定了RGV感染过程中mmp基因的表达时序,检测到感染4 h有转录,感染6 h有表达,且持续到感染48 h.用蛋白合成抑制剂放线菌酮(CHX)和DNA复制抑制剂阿糖胞苷(AraC)分别作为蛋白合成和病毒DNA复制的抑制剂进行药物抑制实验,鉴定出mmp是蛙虹彩病毒RGV的一个晚期基因.     

小儿速效感冒片的稳定性试验研究

对药物及其制剂的质量要求，首先应该是安全和有效。为了保证安全和有效，必须稳定，药物变质后含量下降，首先表现为药物的有效性下降，如果产生毒性，表现为安全性下降，有时即使主药含量不变，但也不能制剂中的基质或附加剂因发生变化而刺激性增大，也使安全性下降，因此，对药物稳定性的研究，是确保药物质量的一项措施。     

碳纳米管复合海藻酸微球药物载体的释药性能

利用PEO137-b-PPO44-b-PEO137三嵌段聚合物促进碳纳米管在溶液中的分散,进而制备出碳纳米管复合海藻酸微球药物载体.碳纳米管的引入对海藻酸微球的结构与形态无明显影响,但有效地提高了其稳定性,药物包封率从76.5%提高到89.2%.进一步研究发现碳纳米管复合海藻酸微球的溶胀行为和药物释放行为继承了海藻酸的pH敏感性,在胃pH 1.0环境中溶胀度仅为约76%,而在肠和结肠pH环境中溶胀度可达到2 000%以上甚至溶蚀,适合于用作肠和结肠中的药物控制释放.同时,碳纳米管的引入能够有效地降低药物的释放速率,提高缓释效果,而且不会额外地增加载体的细胞毒性.     

养殖大黄鱼溃疡病的病原菌及其防治药物

研究了浙江省沿海网箱养殖大黄鱼溃疡病病原菌的生物学特性、对化学药物和中草药的敏感性及其胞外产物活性等．从症状典型的网箱养殖患病大黄鱼体内分离到1株可疑细菌824-1,经人工感染试验证实为是引起该病的病原菌．经鉴定,菌株824-1为溶藻弧茵（Vibrio alginolyticus）．利用杯碟法研究了其胞外产物的性质,结果表明：其胞外产物具有淀粉酶、明胶酶、酪蛋白酶、卵磷脂酶、脂酶和几丁质酶活性以及溶血活性,其中以淀粉酶、明胶酶和酪蛋白酶的活性最强,但没有脲酶活性．检测了18种化学药物和15种中草药对病原菌的抑菌作用．结果表明,复方新诺明和庆大霉素等2种化学药物和石榴皮、地榆、五味子、大黄等4种中草药的抑菌能力最强,可作为防治该病的有效药物。     

复方单硝酸异山梨酯-阿司匹林双缓释微丸胶囊的研制(Ⅱ)

以乙基纤维素、丙烯酸树脂Ⅱ和丙烯酸树脂Ⅲ为骨架材料分别制备单硝酸异山梨酯和阿司匹林混合骨架缓释微丸，并通过包薄膜衣进一步控制药物的释放。通过测定微丸的释放度对处方工艺进行评价，选择最佳微丸灌装胶囊．胶囊中两种药物均达到良好的缓释效果。符合中国药典对缓释制剂的要求．其体外释放过程同时符合Higuchi方程和一级释药方程，R^2值均在0．995以上。     

钆(Ⅲ)-喹诺酮配合物的合成、抗菌活性与抗肿瘤活性

合成了以喹诺酮药物分子(诺氟沙星、氧氟沙星和环丙沙星)为配体的钆(Ⅲ)配合物Gd(L)3@6H2O(L为药物配体).通过红外光谱、摩尔电导率、元素分析和顺磁共振等方法对配合物进行了表征,推测了配合物的可能结构,并用液体稀释法测定了药物配体和配合物对2种革兰氏阳性菌和2种革兰氏阴性菌的体外抑制活性,结果表明配合物与药物配体的抗菌活性和抗菌谱相同;采用MTT比色法测定了配体及配合物对HL-60(人急性早幼粒白血病)细胞的抑制作用,采用SRB蛋白染色法测定了配体及配合物对BEL-7402(人肝细胞性肝癌)细胞的抑制作用,结果表明Gd(OFLX)3@6H2O对BEL-7402细胞有强效抑制作用,Gd(CPLX)3@6H 2O对HL-60和BEL-7402细胞均有强效抑制作用.     

核糖开关——药物开发的新靶点

核糖开关是mRNA上能够与自由代谢产物或其他小分子配体结合或由于环境条件变化而引起构象变化从而调控基因表达的RNA结构元件.核糖开关广泛存在于G+及G-细菌代谢相关基因中,在真菌、植物和高等动物人的血管内皮生长因子基因中也有发现.核糖开关控制生物体内许多重要基因的表达,调节体内基础代谢,信号传递以及氨基酸、核苷酸、辅酶、金属离子的摄取.核糖开关在生物代谢调控、信号传导中的重要作用使其成为一类新型的药物作用靶点,为新型抗生素研发开辟了新的领域.本文综述了核糖开关的研究进展、作用机制、结构功能以及其在开发新型药物方面的研究策略.     

低分子量壳聚糖纳米粒子缓释蛋白质药物性能的研究

低分子量壳聚糖(LCS)和三聚磷酸钠(TPP)以一定的浓度和体积配比在室温下搅拌，制得了LCS和经聚乙二醇修饰的LCS纳米粒子．用透射电镜观察纳米粒子的形貌，傅立叶红外光谱和X-衍射图谱表征其结构．并利用牛血清蛋白(BSA)作蛋白质模型药物，研究LCS纳米粒子包封和缓释蛋白质药物的性能，包封率达90％以上，在pH7．4的磷酸盐缓冲溶液中，释放达1周以上．并将LCS纳米粒子和高分子量壳聚糖(HCS)纳米粒子进行对比，粒径分别为20nm和210nm，蛋白质包封率分别为91．1％和93．2％，8d内总释放率分别为73．9％和17．6％．增加聚乙二醇的用量可降低蛋白质的包封率，加快释放速度．     

抗癌药4-吗啉代吡啶-2-甲醛缩氨基硫脲(4-MP)的合成

缩氨基硫脲类是近年来国外在筛选过程中发现的具有较好疗效和较新结构的抗癌药物。其第一代药物以5-羟基吡啶-2-甲醛缩氨基硫脲(5-HP)(Ⅰ)为代表,曾进入白血病治疗的临床试验阶段。这类药物的作用机制已证明是与体内的二价铁离子螯合而阻断肿瘤细胞产生的核糖核苷双磷酸酯还原酶(RDR),从而抑制了脱氧核糖核酸(DNA)的合成。我们曾于1973年合成了5-HP并由浙江卫生实验院进行药理试验。     

抗癌药5—羟基吡啶—2—甲醛缩氨基硫脲(5—HP)的合成

缩氨基硫脲类是近年来国外在筛选过程中发现的具有较好疗效和较新结构的抗癌药物.其中以5—羟基吡啶—2—甲醛缩氨基硫脲(5—HP)为最好,已进入白血病治疗的临床试验阶段,其作用机制是与体内的铁离子螯合而抑制核糖核酸还原酶,从而阻断了DNA 的合成.该类药物的今后动向值得注意,为此我们于1973年合成了5—HP 并由     

荧光光谱法研究三唑磷对DNA的损伤作用

在生理酸度条件下(pH 7.4),采用荧光光谱法并结合溴化乙锭(EB)荧光探针、I-离子效应、DNA熔点效应及盐效应等实验手段,研究了三唑磷与DNA的相互作用。实验发现,DNA对三唑磷的内源荧光产生强烈的猝灭,机理为动态猝灭,两者间的结合常数和结合位点数分别为4.54×103L.mol-1和1.082     

农药西玛津与小牛胸腺DNA的相互作用

在生理条件(pH 7.4)下,以吖啶橙(AO)为荧光探针,运用荧光光谱、紫外-可见光谱、圆二光谱(CD)和傅里叶转换红外光谱(FT-IR)并结合熔点、粘度及盐效应实验,研究了西玛津与小牛胸腺DNA的相互作用。结果显示,随着溶液中西玛津的浓度增大,DNA-AO复合物的荧光逐渐被猝灭,表明西玛津与AO发生了部分置换作用,而且西玛津的存在使得DNA的熔点和粘度增大,由此推断西玛津与DNA发生嵌插结合。此外,FT-IR光谱分析和盐效应结果表明西玛津与DNA还存在静电结合。计算出的热力学参数表明,疏水作用力是西玛津与DNA结合反应的主要驱动力。     

用PCR技术检测生物硝化池污水中硝化细菌(Nitrobacteria)的研究

从生物硝化池污水水样中分离了硝化细菌DNA,以其为模板,针对其16Sr RNA基因及23Sr RNA基因而设计合成了两对引物并分别进行了PCR扩增,扩增产物的2%琼脂糖凝胶电泳结果显示,硝化细菌DNA模板得到了特异性扩增．参照分子量标准（Marker）的电泳结果,被扩增的DNA条带大小分别约为400bp和730bp．实验结果表明PCR 技术可用于污水中硝化细菌的快速检测．     

光谱法研究农药氰戊菊酯与DNA相互作用

在pH 7.4的Tris-HCl缓冲液中,通过荧光光谱、紫外-可见光谱、圆二色谱(CD)以及粘度实验和熔点实验研究农药氰戊菊酯与小牛胸腺DNA的相互作用。实验结果发现,随着氰戊菊酯浓度增大,DNA农药体系出现紫外增色,CD谱收缩现象,DNA的粘度和熔点明显增大,说明氰戊菊酯主要以嵌入方式与DNA结合,氰戊菊酯可导致DNA链增长,破坏右手螺旋以及碱基堆叠。测定不同温度(293,302,310K)下氰戊菊酯与DNA之间的表观结合常数,并通过Van’t Hoff方程计算出两者作用的热力学参数焓变(ΔH)和熵变(ΔS)分别为78.63kJ.mol-1和359.5J.mol-1.K-1,据此推测疏水作用是两者结合的主要驱动力。     

DNA随机存储器的设计

近年来,生物大分子在模拟计算领域的研究已经取得了很大的突破,无论是理论模型的研究,还是生化实验的验证,生物分子计算机正蓬勃地展现出它的无可限量的发展前景.DNA随机存储器的研究在整个生物分子计算机研究中是一个重要分支.DNA随机存储器以环状单链DNA分子为存储介质,以4种碱基(腺嘌呤adenine、鸟嘌呤guanine、胞嘧啶cytosine和胸腺嘧啶thymine)对信息进行编码;以DNA分子与各种生化酶(Nicking核酸内切酶、核酸外切酶、聚合酶)间的生化反应来模拟数据的读取和写入.     

用PCR技术检测生物硝化池污水中硝化细菌(Nitrobacteria)的研究

从生物硝化池污水水样中分离了硝化细菌ＤＮＡ,以其为模板,针对其１６ＳｒＲＮＡ基因及２３ＳｒＲＮＡ基因而设计合成了两对引物并分别进行了ＰＣＲ扩增,扩增产物的２％琼脂糖凝胶电泳结果显示,硝化细菌ＤＮＡ模板得到了特异性扩增．参照分子量标准（Ｍａｒｋｅｒ）的电泳结果,被扩增的ＤＮＡ条带大小分别约为４００ｂｐ和７３０ｂｐ．实验结果表明ＰＣＲ技术可用于污水中硝化细菌的快速检测     

浙江天台、宁海县并殖吸虫DNA序列研究

为了解浙江各地肺吸虫的遗传背景,对天台县和宁海县并殖吸虫的虫种进行了DNA序列分析,以期探讨并殖吸虫的虫种命名和其与临床致病的联系.采用DNA测序技术,对两地并殖吸虫囊蚴的核糖体DNA第二间区(ITS2)的基因序列进行测定,并观察囊蚴形态.通过ITS2的基因序列与从GenBank检索到的卫氏并殖吸虫序列比较,结合形态观察,确定天台、宁海县的肺吸虫为卫氏并殖吸虫;而宁海县的并殖吸虫ITS2序列与卫氏并殖吸虫相似,但囊蚴的形态却存在大小之分.     

氯化铯密度梯度离心法纯化叶绿体DNA

本方法用蔗糖密度梯度离心分离烟草及油菜纯化的叶绿体,然后用氯化铯密度梯度超速离心纯化叶绿体DNA.不加DNase处理,但从限制性核酸内切酶作用,经琼脂糖凝胶电泳得到的比较清晰的限制图谱,产物可用于制作物理图谱和DNA重组合.     

细胞脂质分析和DNA分子杂交在短状杆菌分类学研究中的作用

利用薄层层析和气相色谱测定１２株细菌的脂肪酸组份，通过ＵＰＧＭＡ聚类分析绘制其树状图谱；用双相薄层层析获得特征性的极性酯图谱；经光敏生物素非放射性标记ＤＮＡ进行分子杂交测定实验菌株间的ＤＮＡ同源值．一致的结果表明，１２株菌株应分别划归短状杆菌属的３个种，其中有２个被命名为新种，即ＢｒａｃｈｙｂａｃｔｅｒｉｕｍｃｏｎｇｌｏｍｅｒａｔｕｍＩＦＯ１５４７２Ｔ和Ｂ．ｐａｒａｃｏｎｇｌｏｍｅｒａｔｕｍＩＦＯ１５２２４Ｔ．应用上述方法，能有效地对难以从形态特征、生理生化特性确定其分类位置的短状杆菌进一步进行分类     

基于电化学发光和阻抗技术研究DNA单碱基错配

单碱基错配的识别和稳定性差异在核酸多态性研究中至关重要。在同一电化学传感器平台上，采用电化学发光（ECL）和电化学阻抗（EIS）2种技术，协同研究DNA链中不同类型和不同位点的单碱基错配识别和稳定性差异。电极表面具有茎环构象的探针DNA与完全互补DNA、不同类型或不同位点单碱基错配DNA杂交前后的ECL和EIS信号强度变化有显著差异。信号强度变化可揭示单碱基错配识别的稳定性。结果表明，DNA链中心位点的C-A单碱基错配稳定性低于链两端的，靠近键合电极表面双链链端的C-A单碱基错配稳定性低于非键合电极表面双链链端的，同一中心位点C-X碱基对的稳定性顺序为C-G?C-T>C-A≥C-C。研究结果可为核酸多态性研究提供参考。