人参二醇类皂苷的生物转化动态及人参稀有皂苷C-K或F2的制备

为了低成本有效制备人参稀有皂苷C-K或F₂, 将A. niger g.848菌酶用于转化含有人参皂苷(质量分数)分别为49.6% Rb₁, 25.9% Rd, 19.3% Rc和5.23% Rb₂的西洋参二醇混合皂苷. 霉菌发酵时, 采用人参二醇皂苷诱导物比人参提取液诱导物的产酶总活力提高10%~15%. 所产的2种诱导酶均能水解人参二醇皂苷的3-O-和20-O-多种糖基, 均为人参皂苷酶Ⅰ型; 但是人参二醇皂苷诱导物所产酶几乎全部转化人参二醇皂苷为C-K, 而人参提取液诱导物所产酶则残留中间产物. 使用黑曲霉人参二醇皂苷诱导所产酶, 在转化西洋参二醇皂苷的动态研究中发现, 酶反应1.5~2.5 h, 主要为产物F₂; 酶反应12 h后, 主要产物为C-K皂苷. 基于此, 40 g人参二醇类皂苷在45 ℃粗酶反应24 h, 经处理得到含C-K质量分数为87%的23 g酶反应产物, C-K转化率达85%(摩尔分数). 用40 g西洋参二醇皂苷在45 ℃粗酶反应2.5 h, 经处理得到含有质量分数为58%的F₂和27%的C-K的26 g酶反应产物, F₂转化率为50.4%, C-K转化率为29.5%. 通过人参二醇皂苷诱导的黑曲霉粗酶转化人参二醇类皂苷动态研究, 建立了C-K转化率为85%, F₂转化率为50%的制备方法, 为大批量制备提供了基础依据.     

动态泡沫浮选法分离富集人参提取液中的二醇型人参皂苷

采用动态泡沫浮选法分离富集人参提取液中的二醇型人参皂苷, 用高效液相色谱法测定6种人参皂苷Rg₁, Re, Rb₁, Rc, Rb₂和Rd的含量. 考察了浮选液pH值、电解质NaCl浓度、载气流量、料液浓度及料液流速对人参皂苷浮选率的影响, 确定了动态泡沫浮选的最佳条件, 并与溶剂提取法、溶剂浮选法以及静态泡沫浮选法进行了比较. 结果表明, 动态泡沫浮选法对二醇型人参皂苷Rb₁, Rc, Rb₂和Rd具有高富集效率, 回收率分别为93.3%, 98.6%, 96.9%和98.3%, 而对三醇型人参皂苷Rg1和Re的富集效率却很低, 回收率分别为4.8%和4.2%. 该法是分离纯化二醇型人参皂苷的一种简便有效的方法.     

红参中原人参三醇型皂苷组在肠道菌群中体外转化及对肠道菌群的作用

采用高分离度快速液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(RRLC-Q-TOF MS)和超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用技术(UPLC-QQQ MS)对红参中原人参三醇型皂苷组在人肠道菌群中体外代谢转化产物进行定性定量分析,并应用16S rDNA高通量测序技术分析原人参三醇型皂苷组对人肠道菌群多样性的影响。RRLC-Q-TOF MS采用Supelco Ascentis Express C_(18)色谱柱(50 mm×3.0 mm×2.7μm),UPLC-QQQ-MS/MS采用Thermo Syncronis-C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm×1.7μm),均以0.1%甲酸水-乙腈为流动相进行梯度洗脱,质谱分析均采用电喷雾负离子模式采集。原人参三醇型皂苷组中的人参皂苷Re、Rg1在人肠道菌群孵育后,RRLC-Q-TOF MS通过对照品比对及高分辨质谱数据解析分析转化产物为Rg2、Rh1、F1和PPT。UPLC-QQQ MS定量分析代谢产物的转化率,在代谢转化第60 h时,产物Rg2、Rh1、F1、PPT的生成率为6%、12%、11%和56%。应用Illumina Hiseq 2500平台对粪便样本肠道菌群进行基因测序,与空白组粪便比较,原人参三醇型皂苷组在门水平上显著增加Firmicutes相对丰度,显著降低Bacteroidetes、Proteobacteria相对丰度;在属水平上Prevotella_9、Faecalibacterium、Dialister相对丰度显著增加,显著降低Escherichia-Shigella、Dorea、Lachnoclostridium相对丰度。该研究为基于肠道菌群对原人参三醇型皂苷药效物质基础的确定和药效作用靶点提供依据。     

重组嗜热β-葡萄糖苷酶转化稀有人参皂苷Rd和CK

利用高效液相色谱(HPLC)法, 对重组嗜热β-葡萄糖苷酶(Fpglu1)转化稀有人参皂苷(Rd和CK)进行研究, 并表征了其催化动力学参数. 利用同源模建和分子动力学模拟等生物信息学技术, 探究了Fpglu1转化人参皂苷的结构基础及其相互作用. 结果表明, Fpglu1能够水解人参总皂苷生成稀有皂苷Rd和CK, 其催化人参皂苷Rb₁, Rb₂和Rc的K_m值分别为0.318, 1.840和5.269 mmol/L; 酶的转换数(k_cat)值分别为144.191, 0.572和0.011 s^-1. 当转化时间分别为6和102 h时, Rd和CK的产率达到最大, 分别为60%和93%. 通过对该酶的结构预测及皂苷分子的对接研究发现, 底物位于由疏水性氨基酸构成的底物口袋中, 氨基酸残基Glu194和Glu367是参与催化作用的关键, 且实验测得的酶促反应动力学参数(K_m)与对接的相互作用能量值存在线性关系.     

RRLC-Q-TOF-MS研究人参二醇型皂苷Rb_1,Rb_2和Rc的化学转化

将高分离快速液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(RRLC-Q-TOF-MS)联用技术用于人参二醇型(PPD)皂苷Rb_1,Rb_2和Rc在酸性条件下的化学转化研究,并对人参炮制过程中人参二醇型皂苷Rb_1,Rb_2和Rc及其转化产物的相对含量进行了分析.利用RRLC-Q-TOF-MS联用和串联质谱(MS/MS)技术对化合物的保留时间、精确分子量及串联质谱碎片信息进行分析,以鉴定化合物的结构.研究结果表明,人参二醇型皂苷在酸性条件下的化学转化包括:取代糖基的水解反应、Δ20(21)或Δ20(22)位的脱水反应和C24,C25位的水合加成反应.在MS/MS分析中,质谱峰m/z 459,477和441分别为人参二醇苷元、C24,C25位水合人参二醇苷元和Δ20(21)或Δ20(22)位脱水人参二醇型苷元的特征离子,这为人参二醇型皂苷及其转化产物的结构鉴定提供了依据,并以此总结了人参二醇型皂苷的化学转化途径.还利用所建立的方法研究了生晒参和红参(100和120℃)中PPD人参皂苷在炮制过程中的变化.     

能量分辨质谱区分与检测人参皂苷同分异构体20(S)-Rf和Rg1

将连续变化的碰撞能量与串联质谱相结合,建立了能量分辨质谱(Energy-resolved mass spectrometry,ERMS)分析方法用以区分和检测人参皂苷同分异构体20(S)-Rf和Rg₁. ERMS将子离子与母离子强度的比值定义为强度分数(Intensity fraction, IF),两个子离子强度的比值定义为强度比(Intensity ratio, IR),并通过IF和IR分别对连续变化的碰撞能量作图建立特征碎片离子的IF和IR曲线.虽然20(S)-Rf和Rg₁的串联质谱图无明显差异,但是多元统计分析结果显示其特征碎片离子[M-Glc-H]^-,[M-2Glc-H]^-和[M-2Glc-C₆H₁₂-H]^-的IF和IR曲线差异显著,有明显的区分边界,可以直接区分20(S)-Rf和Rg₁.进一步利用ERMS实时分析了原人参三醇型皂苷生物转化产物中20(S)-Rf和Rg₁的相对摩尔含...     

密闭式微波降解法促进常见人参皂苷向稀有人参皂苷转化的规律

采用密闭微波技术对7种常见人参皂苷单体(Rb1,Rb2,Rb3,Rc,Rd,Re和Rg1)进行降解,通过高效液相色谱(HPLC)分析并与相同条件下非微波降解物对比,研究了密闭微波降解人参皂苷的产物在化学结构及组成上的变化规律,以期快速、高效地制备生物活性高的稀有人参皂苷.结果表明,密闭式微波降解法能够使常见人参皂苷基本降解完全,而相同条件下非微波降解法则基本不发生降解.原人参二醇型人参皂苷易水解掉C20位糖,并发生C20位构型变化,生成20(R)-Rg3和20(S)-Rg3,其中20-(R)为优势构型,C20位羟基进一步脱水产生稀有人参皂苷Rk1和Rg5.同时,20(S/R)-Rg3失去C3位的1分子葡萄糖转化为20(S/R)-Rh2,C20位羟基再进一步脱水生成了Rk2和Rh3.此外,人参皂苷C20位所连的糖种类与构型影响了降解产物中各稀有皂苷的组成与比例,但7种原人参二醇型人参皂苷密闭式微波降解产物中Rg5含量均为最高.密闭式微波降解对原三醇型人参皂苷的转化作用与原二醇型人参皂苷具有相似的规律,人参皂苷Re和Rg1的密闭式微波降解产物中Rh4含量均为最高.本文结果进一步说明在相同的降解条件下,密闭式微波降解法的降解效率远高于高温高压非微波降解法,密闭式微波降解可明显促进常见人参皂苷向稀有人参皂苷转化,因此采用密闭微波技术对常见人参皂苷进行降解可以大量获得稀有人参皂苷.     

人参多糖对人参皂苷Re体内代谢和体外转化的影响

利用快速分离液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用仪(RRLC/Q-TOF-MS)研究了人参多糖对肠道菌群转化人参皂苷Re的影响;考察了人参皂苷Re的代谢产物Rg1在口服人参多糖大鼠体内的药代动力学,并与正常大鼠体内Rg1的药代动力学参数进行了比较.结果表明,体外肠道菌群转化人参皂苷Re的主要转化产物有人参皂苷Rg1,Rh1,Rg2,F1和原人参三醇(Protopanaxatriol,PPT),分别归属于3条转化路径;正常情况下,肠道菌群转化人参皂苷Re 48 h时,除了终产物PPT的存在,中间产物Rg1,Rg2和F1仍可被检测到,而加入人参多糖后,只检测到终产物PPT.当口服给药Re后,代谢产物Rg1的达峰时间(tmax)、最大血浆浓度(cmax)和血浆药物浓度-时间曲线下面积(AUC)分别为(11.6±6.1) h,(80.1±44.0) ng/m L和(549.3±209.4) ng·h/m L;当给予人参多糖14 d后,口服给药Re,代谢产物Rg1的tmax,cmax和AUC分别为(8.2±5.4) h,(98.2±50.6) ng/m L和(691.9±231.2) ng·h/m L.研究结果表明,人参多糖能促进人参皂苷Re转化为人参皂苷Rg1,进而提高胃肠道对人参皂苷Rg1的吸收,并可能增强人参的药理作用.     

人参中达玛烷型皂苷的化学转化产物结构和转化途径研究

利用高效液相色谱-电喷雾-多级串联质谱(HPLC-ESI-MSn)技术分析人参中3种达玛烷型皂苷(三七皂苷R1,人参皂苷Rd、20(S)-Rg3)在12-磷钨酸环境中转化的产物结构和转化途径。由原人参三醇型皂苷R1转化获得9种产物:20(S)-25-OH-R2、20(R)-25-OH-R2、25-OH-T5、20(S)-R2、20(R)-R2、20(S)-25-epoxy-R2、20(R)-25-epoxy-R2、T5、3β,12β-二羟基-6α-(2-O-β-D-吡喃木糖基-β-D-吡喃葡糖氧基)达玛烷-20(22),24-二烯。由原人参二醇型皂苷Rd和20(S)-Rg3转化得到10种产物:20(S)-25-OH-Rg3、20(R)-25-OH-Rg3、25-OH-Rk1、25-OH-Rg5、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、(20S,25)-epoxy-Rg3、(20R,25)-epoxy-Rg3、Rk1、Rg5。通过分析转化产物结构,并考察主要产物含量随转化时间的变化趋势,总结了人参中达玛烷型皂苷在酸性水溶液环境中的转化途径,即通过C20位去糖基化和差向异构化反应,以及烯烃链的水合、脱水、环合反应转化为稀有皂苷。     

HPLC-MS结合多元统计分析区分人参产地及筛选皂苷类标志物

利用高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)技术结合多元统计分析方法, 区分中国人参主产区5个不同产地的45个人参样本, 筛选出差异性皂苷类标志物. 根据人参总皂苷在反相C₁₈色谱柱中的洗脱顺序, 结合串联质谱分析和标准品比对, 在提取的人参总皂苷中鉴定出15种原人参三醇型、 24种原人参二醇型和2种齐墩果酸型共41种皂苷. 对人参总皂苷的HPLC-MS全扫描数据进行了多元统计分析. 正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)结果表明, 所建立的分析模型具有良好的数据描述能力和预测能力. 所有人参样本能够根据产地被区分, 并筛选得到同时区分5个产地的差异性皂苷类组分18种; 能够区分任意2个产地人参样本的差异性组分主要为在人参中含量较高的人参皂苷Rb1, Rg1, Re, Rc, Rd, Ro和m-Rb1等. 分层聚类分析(HCA)结果显示, 黑龙江和吉林两省的样本能够独自聚类, 但是绥化市的样本更接近于吉林省. 初步推断原因为绥化市地理位置较接近吉林省, 两地人参生长环境相似并可能存在种质资源交换.     

高效液相色谱法快速测定参芪降糖胶囊中人参皂苷的含量

建立了高效液相色谱法快速测定参芪降糖胶囊中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rd含量的方法.采用3.5μm Coreshell C18核壳型分离填料(3.0 mm×150 mm)为色谱柱,分别以纯乙腈、纯水为流动相进行梯度淋洗,流量为0.43 mL/min,柱箱温度为25℃,检测波长为203 nm.人参皂苷Rg1、...     

The application of BTEM to UV-vis and UV-vis CD spectroscopies: the reaction of Rh4(CO)12 with chiral and achiral ligands

Two different organometallic ligand substitution reactions were investigated: (1) an achiral reactive system consisting of Rh₄(CO)₁₂ + PPh₃  Rh₄(CO)₁₁PPh₃ + CO in n-hexane under argon; and (2) a chiral reactive system consisting of Rh₄(CO)₁₂ + (S)-BINAP  Rh₄(CO)₁₀BINAP + 2CO in cyclohexane under argon. These two reactions were run at ultra high dilution. In both multi-component reactive systems the concentrations of all the solutes were less than 40 ppm and many solute concentrations were just 1–10 ppm. In situ spectroscopic measurements were carried out using UV–vis (Ultraviolet–visible) spectroscopy and UV–vis CD spectroscopy on the reactive organometallic systems (1) and (2), respectively. The BTEM algorithm was applied to these spectroscopic data sets. The reconstructed UV–vis pure component spectra of Rh₄(CO)₁₂, Rh₄(CO)₁₁PPh₃ and Rh₄(CO)₁₀BINAP as well as the reconstructed UV–vis CD pure component spectra of Rh₄(CO)₁₀BINAP were successfully obtained from BTEM analyses. All these reconstructed pure component spectra are in good agreement with the experimental reference spectra. The concentration profiles of the present species were obtained by performing a least square fit with mass balance constraints for the reactions (1) and (2). The present results indicate that UV–vis and UV–vis-CD spectroscopies can be successfully combined with an appropriate chemometric technique in order to monitor reactive organometallic systems having UV and Vis chromophores.     

Semisynthesis and Cytotoxicity Evaluation of a Series of Ocotillol Type Saponins and Aglycones from 20(S)-Ginsenoside Rg2, Rh1, Protopanaxatriol and Their 20(R)-Epimers

With the oxidation treatment, eighteen compounds were separated from 20(S)-ginsenoside Rg₂, Rh₁, protopanaxatriol(PPT) and their 20(R)-epimers in total and cytotoxicity of most of them was evaluated against three human cancer cell lines HeLa, A549 and MCF-7 by 3-(4,5-dimetylthiazol-z-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT) assay. Their structures were confirmed by means of nuclear magnetic resonance(NMR) and mass spectrometry and the results were compared with those of previous literature. In this study, we systematically semisynthesized all four ocotillol type saponins, i.e., (20S, 24S), (20S, 24R), (20R, 24S) and (20R, 24R). All the configurations at C20 kept the same with their starting materials. Meanwhile a pair of C24 epimers was generated in terms of ocotillol type saponins. In addition, seven compounds(4-8, 13 and 14) were reported firstly. The cytotoxic results distinguished the ocotillol type products(6, 7, 13 and 14) from 20(R)-PPT and 20(R)-ginsenoside Rh₁, which possessed better cytotoxicities than their correspondents from 20(S)-epimers against HeLa cells, and the carbonyl group at C3 can improve the cytotoxi-city, which helped us to gain deeper insight into Ocotillol type saponins.     

La(NO3)3和Pr(NO3)3对高岭石脱羟基动力学的影响

采用热重和微商热重(TG/DTA)综合热分析技术在不同升温速率下研究了掺入La(NO₃)₃和Pr(NO₃)₃的高岭石的热分解过程, 利用Coats-Redfern积分法和Achar微分法对热分析实验数据进行动力学计算, 得到了高岭石脱羟基反应过程中的控制机理函数、 活化能和指前因子等动力学参数; 分析了2种稀土掺入对高岭石脱羟基过程动力学参数的影响, 并用Ozawa法对活化能进行了验证. 结果表明, 未掺稀土和掺入Pr(NO₃)₃的高岭石的脱羟基反应过程均受化学反应模型F₃控制, 反应的活化能分别为307.94和282.86 kJ/mol, 指前因子lnA的值分别为47.8980和44.1718; 掺入La(NO₃)₃的高岭石脱羟基反应过程控制机理函数发生改变, 受化学反应模型F₂控制, 反应活化能为196.02 kJ/mol, 指前因子lnA的值为29.5551. 与未掺稀土的高岭石对比, 掺入Pr(NO₃)₃后活化能和指前因子略有降低; 而掺入La(NO₃)₃后则显著降低, 分别降低了36.34%和38.30%. 采用Ozawa法验证得到的活化能与Coats-Redfern积分法和Achar微分法结果一致.     

Anionic derivatives of pentafluoro-λ-sulfanyl (fluorosulfonyl) acetic acid esters

New ester salts [R₃NH]⁺[F₅SC(SO₂F)C(O)OR′]⁻ where RH, CH₃CH₂ and R′CH₃,(CH₃)₂CH have been prepared from corresponding esters and amines. The sodiumsalt Na[F₅SC(SO₂F)C(O)OCH(CH₃)₂] was used to prepare the following -substitutedderivatives: SF₅CX(SO₂F)C(O)OCH(CH₃)₂, XBr, Cl. The crystal structure of[(C₂H₅)₃NH]⁺[F₅SC(SO₂F)C(O)OCH₃]⁻ was determined and is monoclinic: P2₁/n;a=8.758(2) Å, b=9.645(2) Å and c=19.167(4) Å; β=97.92(3)°; V=1603.6 ų; Z=4.     

十二烷基硫酸钠对原位晶化制备小晶粒NaY的影响

研究了十二烷基硫酸钠对原位晶化制备小晶粒NaY的影响,并以包含小晶粒NaY的原位晶化产物为母体,通过铵交换和稀土离子交换制备出了REUSY催化剂.采用X射线衍射(XRD)、扫描电镜(SEM)、X射线荧光(XRF)及N₂物理吸附-脱附等手段对样品进行了表征,采用微反活性评价装置和小型固定流化床(ACE)评价了所制备催化剂在重油催化裂化反应中的催化性能.结果表明:在原位晶化合成NaY的体系中,添加高岭土微球质量5%的十二烷基硫酸钠,可以将分子筛的平均晶粒尺寸由540 nm减小到250 nm.相比于常规的原位晶化型流化催化裂化(FCC)催化剂,以包含小晶粒NaY的原位晶化产物为母体所制备出的催化剂,在反应原料的转化率、裂化产物的选择性以及抗积碳性能等方面均有明显的提高或改善.     

Disproportionation of homoleptic rhodium carbonyls

Both [Rh₄(CO)₁₂] and [Rh₆(CO)₁₆] disproportionate in pyridine to cis-[Rh(CO)₂(py)₂]⁺ and [Rh₅(CO)₁₃(py)₂]⁻. In the same solvent, cis-[Rh(CO)₂(py)₂]⁺ is reduced by CO/H₂O to [(py)₂H][Rh₅(CO)₁₃-(py)₂], which has been structurally characterized.     

Utilisation des ligands aminophosphinephosphinites en hydroformylation catalysée par le rhodium: amélioration de l'énantioselectivité par synthèse selective des hydrures RhH(CO)2L2

Asymmetric hydroformylation of styrene by rhodium catalysts modified with aminophosphinephosphinite ligands has been studied. Use of either Rh₄(CO)₁₂/L₂ mixture or RhClCOL₂ in electroreduction under CO/H₂, gives interesting results in respect of regio- (PhCHMeCHO/PHCH₂CH₂CHO) and enantio-selectivity when the ligands (1R,2S)-PPh₂NMeCHMeCHPhOPPh₂ and (CH₃)₂C(N(Me)PPh₂)-HCH₂OPPH₂ (e.e. > 30%) are used.

¹H and ³¹P NMR spectroscopy has indicated the occurrence of the RhH(CO)₂L₂ hydride precursor, suggested to be responsible for catalysis. It is a trigonal complex having an aminophosphine function in a trans position to the hydrogen, the equatorial position being occupied by the (P---O) group and the two CO moieties.