c-Ha-ras反义RNA对细胞恶性表型逆转作用的研究

本文应用表达反义c-Ha-ras癌基因上游区第一外显子2.0kb片段的RNA质粒,转染经c-Ha-ras转染的恶性细胞系GCM-3T3与REF-4.3,造成恶性行为的改变.表现在生长速度减慢,软琼脂克隆形成能力下降、裸鼠中致瘤力减小和肿瘤的病理分化程度增加,其中原来可造成转移的GCM-3T3细胞经反义RNA转染后肺转移率从60％降至12.5％,同时,两种细胞经转染后分离的克隆都有显著的ras癌基因产物p21蛋白表达的减少.本工作证明了反义RNA在癌基因表达上的调控和抑制细胞恶性行为的作用.     

二乙基亚硝胺体外诱发人胎儿肾上皮细胞恶性转化的研究

本实验首次使用二乙基亚硝胺成功地诱发了人胎儿肾上皮细胞体外恶性转化。转化细胞寿命明显延长,可在半固体琼脂中生长并具有非整倍体核型。经致癌物2—3次处理的细胞异种接种产生低分化癌。实验证明:人胎儿肾细胞系统是研究人类上皮细胞癌变原理的良好材料。     

氯化镧对烧伤大鼠胸腺iNOS表达及细胞凋亡的影响

用原位末端标记术、免疫组织化学术和体视学形态记量法观察稀土化合物氯化镧（LaCl3）对严重烧伤大鼠胸腺诱导性一氧化氮合酶（iN-OS）表达及胸腺细胞凋亡的影响。结果显示,LaCl3能减轻烧伤后大鼠胸腺应激性萎缩的程度,降低病理性胸腺细胞凋亡率,其行为主要是通过部分抑制iNOS在烧伤后大鼠胸腺组织中的表达,表明LaCl3对严重烧伤后机体免疫功能具有一定的保护作用,可作为一种有效的烧伤后免疫功能调节和保护剂。     

基于液相色谱-质谱联用的代谢组学技术研究Pokemon诱导的胞内脂代谢变化

Pokemon是一种转录抑制因子,能够通过影响染色质的重组或直接与抑癌基因结合而抑制抑癌基因的转录,促使肿瘤形成。该文利用基于液相色谱-质谱联用的代谢组学技术研究了Pokemon在肝癌中调控细胞代谢的作用机制。通过脂质转染,获得了Pokemon高表达的HL7702细胞,分别收集转染后不同时间点的细胞。利用基于液相色谱-质谱联用技术的代谢组学方法,分析胞内代谢物的成分。根据多元统计分析的结果选出差异显著的候选代谢物,通过数据库（METLIN和HMDB）检索、二级图谱比对进行结构解析,确证了36种代谢物。通过KEGG数据库检索发现这些代谢物主要与脂质合成相关。进一步分析发现脂质合成途径中乙酰辅酶羧化酶和脂肪酸合成酶均被激活。结果显示,Pokemon可通过激活细胞中脂质合成通路而影响细胞的代谢。     

胞质因子对人早幼粒白血病细胞恶性表型和基因表达的调控作用

本文利用胞质杂交的细胞工程手段,研究人早幼粒白血病细胞突变株在添加小鼠网织红细胞胞质后的细胞恶性表型表达状态。实验结果表明,HGPRT~-人早幼粒白血病细胞突交株(HL-60-AR)与小鼠网织红细胞融合所形成的胞质杂交细胞,其恶性程度较亲本瘤细胞显著降低,它们在体外软琼脂培养基上不能形成集落,在裸鼠体内丧失致瘤能力,同时细胞增殖率降低,细胞分裂指数下降,DNA合成速率减慢。利用c-myc癌基因探针的分子杂交技术,未检测到胞质杂交细胞存在相当于c-myc基因特异的同源序列mRNA,提示杂交细胞癌基因表达严重受抑。对杂交细胞珠蛋白在翻译和转录水平上的表达分别进行探测,结果一致显示胞质杂交细胞中人珠蛋白基因受到激活。上述结果提示,小鼠网织红细胞中存在能调控人肿瘤细胞恶性表型和基因表达状态的胞质因子。     

人食管癌细胞与正常食管上皮细胞内微管的免疫荧光细胞化学研究

本文利用抗微管蛋白抗体间接免疫荧光细胞化学技术,观察到人食管癌ECa109细胞的微管分布与正常食管上皮细胞有明显差别。原代培养的人正常食管上皮细胞胞质内有间期的纤细的微管结构(CMTC)和分裂期的纺锤体微管。食管癌ECa109细胞在间期的胞质内缺乏微管,但分裂期的纺锤体微管与正常细胞相同。本文对癌细胞间期胞质缺乏微管的现象进行了讨论,认为可能涉及微管组装机制的缺陷。     

分子信标研究5-氟尿嘧啶对鼻咽癌HNE1细胞p33ING1基因转录水平的影响

p33ING1作为一种重要的抑癌基因，在乳腺癌及胃癌等恶性肿瘤细胞中的mRNA表达水平显著低于癌旁正常组织细胞中的表达，并导致这些肿瘤细胞的侵袭转移能力增强，对化疗药物及r射线和紫外线处理的敏感性降低。     

5-氮胞苷诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的研究

分离大鼠骨髓间充质干细胞,体外培养呈现成纤维细胞表型,用12μmol//L 5-氮胞苷(5-aza)诱导培养,一周后细胞变为细长形成杆状.两周后培养细胞与临近的细胞融合,三周后形成类肌管状结构.通过RT-PCR检测,5-氮胞苷诱导前,间充质干细胞表达α-actin,desmin和MEF-2D,5-aza诱导后表达β-MHC和GATA4.westem Blot分析结果表明α-actin在诱导前后都表达,而myosin则在诱导后才表达.免疫荧光标记α-actin和β-MHC,证实了上述结果,即在5-氮胞苷诱导前后细胞表达α-actin,诱导后myosin才在细胞质中表达,Myosin和β-MHC是心肌细胞特异表达的蛋白.上述结果表明骨髓间充质干细胞具有向新生心室肌分化的潜能,这些诱导分化的细胞为心肌梗塞移植治疗提供一种潜在的供体细胞.     

熊果酸半乳糖苷偶联物的合成及保肝活性

通过改进的Koenigs-knorr法在熊果酸3位和28位进行半乳糖苷化得到6个化合物. 通过MTT法考察了上述化合物对大鼠肝干细胞样上皮细胞WB-F344 的作用, 发现化合物12b和12e可明显提高WB-F344细胞的成活率. 体内实验结果表明, 化合物12b, 12d和12f在刀豆蛋白引起的小鼠急性免疫性肝损伤模型上, 除化合物12d对小鼠血清谷草转氨酶升高具有一定程度的降低作用外, 其余化合物均未见对谷草和谷丙转氨酶的升高表现出明显的保护作用.     

V-ras基因点突变与转化细胞恶性表型的研究

为进一步确定ras基因突变与肿瘤恶性表型的关系,我们构建了一系列的v-ras突变体并将其导入NIH 3T3细胞,观察这些细胞的恶性表型,如致瘤性,转移能力及细胞膜组织相容性抗原(MHC-I)的表达水平。实验证明不是全部具有形态转化的细胞都能在正常的Balb/c小鼠致瘤和形成远端转移。ras基因不仅能影响细胞的形态、致瘤性、转移能力,而且还通过调节MHC-I的表达水平来影响ras转化细胞的恶性表型。     

反义c-Ha-ras寡聚核苷酸对转化细胞的生长抑制及其p21蛋白合成的抑制

本文合成了两个15聚核苷酸AS-1和AS-2,前者与c-Ha-ras mRNA的前三个密码子及其上游的核蛋白体结合点附近的单链区互补,后者与细胞核内未成熟c-Ha-rag RNA第一内含子3′端及第二外显子5′端区域互补,它们可分别阻断c-Ha-ras mRNA的翻译和拼接过程,从而降低c-Ha-ras癌基因的表达水平,抑制了转化细胞的增殖。这种抑制作用随浓度的增加(从4μmol/L至10μmol/L)而增加,加入AS-1或AS-2 12h后抑制作用达到高峰,以后逐渐下降。用ELISA方法测定转化细胞中c-Ha-ras产物p21蛋白水平,结果显示增殖受抑制细胞p21水平较对照细胞降低30％左右。     

基于电化学技术的microRNA生物传感器

MicroRNA(miRNA)是一种内源性的非编码单链RNA,通过与mRNA的3'端非翻译区(UTR)的不完全互补或完全互补结合抑制靶mRNA的翻译或促使靶mRNA的降解来调控基因的表达,参与细胞的增殖、凋亡、分化和代谢等重要过程。MiRNA表达的变化可以起到癌基因和抑癌基因的作用,是一种潜在的肿瘤标志物,因此,miRNA的检测技术引起了人们的关注。由于电化学检测方法具有灵敏、快速、低成本和低能耗等特点,研究者广泛开展了应用电化学技术来发展miRNA检测的研究。本文将对基于电化学技术的miRNA检测方法进行综述。     

絮凝基因的克隆及其絮凝形态表征

分离出一株具有强絮凝特性的芽孢杆菌Bacillus sp. F2, 其絮凝率达到84%, 并构建了絮凝基因组文库, 从中筛选并获得表达絮凝活性的大肠杆菌阳性克隆子FC2. 絮凝试验测定FC2的絮凝率为90%, 稍高于原絮凝菌F2, 高于受体菌JM109(6.9%), 说明FC2絮凝性状遗传于原絮凝菌F2. 采用轻敲模式下的原子力显微镜成像技术、光学显微镜、ζ电位等对加入FC2与F2及不加入絮凝剂的絮凝微观形貌等进行了测定. 原子力显微成像显示, 加入克隆菌FC2发酵液的高岭土悬浮液形成的絮凝胶体出现大而紧密的球形颗粒结构, 且表面积粗糙, 凹凸程度大, 具有大的比表面积和吸附液体悬浮颗粒的能力. 向高岭土悬浮液中加入克隆菌FC2发酵液后, 絮凝颗粒由松散的不定形结构转变为密集分布、 水平尺寸均匀的球形结构, 表明克隆菌FC2发酵液中的凝集素容易以高岭土悬浮颗粒为中心吸附在其表面, 而且絮凝率达到90%, 进一步证实了克隆菌FC2发酵液的除污染效能. ζ电位测定结果表明, 离子键作用强度不同, 致使絮凝形态存在差异, 为研究生物絮凝剂的絮凝机理提供了有力的依据.     

钌配合物稳定端粒DNA的作用及其诱导细胞凋亡分子机制的研究

端粒酶在肿瘤细胞中高表达,已经成为抗肿瘤药物的重要靶点,由于很多肿瘤细胞中富含G4-DNA,通过稳定G-四链体DNA的形成来抑制端粒酶的活性已成为抗癌药物的一个新策略. 本文设计了两种钌配合物,调查了这两种钌配合物稳定G4-DNA的能力,发现配合物2稳定端粒 G4-DNA的能力强于配合物1,配合物2能够诱导端粒 G4-DNA发生构型的转化,而配合物1不能诱导G4-DNA发生构型的转化,这项研究结果证明,钌配合物与G4-DNA的作用能力与配体的平面性有关. 在抗肿瘤活性方面,配合物2表现出更强的抗肿瘤活性,尤其是对HepG2细胞具有较强的抑制作用,推测其是以端粒酶为靶点发挥的抗肿瘤作用. 配合物2能够诱导肿瘤细胞凋亡,能诱导G1期细胞阻滞和DNA碎片的形成（细胞凋亡的特征）. 据此推测本论文设计的钌配合物是一个潜在的抗肿瘤药物.     

非洲绿猴肾上皮细胞的损伤模型及其对草酸钙生长的调控作用

采用H₂O₂对非洲绿猴肾上皮细胞(Vero)进行了损伤, 通过检测细胞存活率、培养基中超氧化物歧化酶(SOD)浓度、丙二醛(MDA)释放量和细胞表面晶体粘附分子骨桥蛋白(OPN)的表达量变化, 检测了细胞的损伤程度. H₂O₂对Vero细胞的损伤作用呈现时间依赖性和浓度依赖性|细胞损伤后, MDA释放量增加, SOD浓度降低, OPN表达量显著增加, 导致粘附的晶体量增加. 利用扫描电子显微镜(SEM)和X射线衍射(XRD)研究了细胞损伤前后对草酸钙(CaOxa)晶体生长的调控作用. 对照组细胞诱导生成的CaOxa晶体棱角圆钝, 同时含有一水草酸钙(COM)和二水草酸钙(COD)晶体|而损伤细胞诱导生成的晶体形状不规则, 棱角尖锐, 主要为COM晶体, 因此, 细胞损伤后增加了草酸钙结石形成的危险性. 所建立的Vero细胞氧化损伤模型有助于从细胞水平上阐明草酸钙结石的形成机制.     

二甲双胍铬(Ⅲ)配合物对糖尿病合并非酒精性脂肪肝大鼠的影响

为了研究二甲双胍铬(Ⅲ)配合物的生物活性,构建糖尿病合并非酒精性脂肪肝大鼠模型,实验8周后检测各组大鼠空腹血糖、血脂、胰岛素、转氨酶水平,组织病理学观察大鼠肝脏形态变化,蛋白印迹法检测大鼠肝脏Caspase-3蛋白的表达情况。实验结果:与模型组相比,铬(Ⅲ)配合物干预可显著降低大鼠空腹血糖、血脂、胰岛素、转氨酶水平,差异有统计学意义(p0.05);可减轻大鼠肝脏细胞水肿、脂肪变性等病理变化,并且干预组大鼠肝脏Caspase-3蛋白的表达显著低于模型组(p0.05)。说明铬(Ⅲ)配合物对糖尿病合并非酒精性脂肪肝大鼠具有一定的治疗和肝脏保护作用。     

靶向β-半乳糖苷酶光学探针的研究进展

β-半乳糖苷酶是细胞溶酶体中的一种水解酶,广泛存在于植物、细菌、真菌以及哺乳动物中,它可催化糖苷键水解,从而将乳糖转化为半乳糖.研究表明,β-半乳糖苷酶的过量表达与原发性卵巢癌的发生、发展以及细胞的衰老密切相关.因此,灵敏检测β-半乳糖苷酶的活性在生命医学领域具有重要意义.近年来,荧光探针因其高灵敏度、高选择性和高时空...     

微小细胞融合介导基因转移诱导细胞恶性转化的研究

本文应用微小细胞融合介导基因转移技术,将人单个染色体从MNNG HOS细胞导入到小鼠细胞NIH 3T3中,并得到恶性转化细胞,进一步分析位于人第7号染色体上癌基因met的转化活性及其毗邻基因的关系,证明与met基因毗邻约3000kb的基因片段发生臂间易位可能是met活化的原因之一。     

气相色谱法测定大鼠肝微粒体中丁醇的生物转化产物丁醛的含量

丁醇在分离提取的大鼠肝微粒体中,与微粒体中的细胞色素Ｐ４５０ⅡＥ１酶及加入的还原性辅酶Ⅱ（ＮＡＤＰＨ）在特定的温度下作用一定时间后,转化为丁醛。丁醇转化为丁醛的速率可作为评价细胞色素Ｐ４５０ⅡＥ１酶活性的指标。采用顶空气相色谱法可测定丁醇在微粒体中转化产生丁醛的含量。方法的检测限为０．７μｍｏｌ／Ｌ,变异系数８．１％～９．３％,回收率８５．３％。其干扰少、灵敏、快速、准确。方法的建立为间接测定细胞色素Ｐ４５０ⅡＥ１酶活性提供了可靠的测试手段。     

修复前后Vero细胞调控草酸钙晶体生长的差异

采用扫描电子显微镜(SEM)和流式细胞仪等多种方法研究了降解大豆多糖(SPS)对损伤的非洲绿猴肾上皮细胞(Vero)的修复作用;研究了修复前后Vero调控草酸钙(CaOxa)晶体形成的差异。经H2O2氧化损伤的Vero在被SPS修复后,其细胞活力、细胞外SOD活性及细胞内线粒体膜电位均增加,细胞形态逐渐恢复到接近正常细胞。在诱导草酸钙(CaOxa)晶体生长过程中,修复细胞可以减少棱角尖锐的一水草酸钙(COM)晶体生成,诱导更多的二水草酸钙(COD)晶体。三种状态Vero诱导的晶体尺寸从小到大顺序为:正常细胞<修复细胞<损伤细胞。本文结果表明,降解大豆多糖可以修复受损伤的Vero细胞,降低肾结石形成的危险性,提示SPS有可能是一种潜在的绿色防石药物。