不同干燥方法对芦苇不同组织GC/MS代谢组学分析的影响

基于气相色谱-质谱联用(GC/MS)技术,以超低温冷藏为对照,分析了真空冷冻干燥、45℃烘干和硅胶干燥处理对芦苇Phragmites australis叶、茎和根组织样品代谢组学分析结果的影响。共检测出51个色谱峰,鉴定出25种代谢物。主成分分析(PCA)和多响应置换过程分析(MRPP)表明,45℃烘干和硅胶干燥对芦苇不同组织样品代谢物组成影响均较大,而真空冷冻干燥只对叶样品代谢物组成具有显著影响。利用方差分析对鉴定出代谢物含量进行分析,结果真空冷冻干燥会导致叶样品中甘油、果糖、葡萄糖含量显著升高,蔗糖含量显著下降,但不会对根茎样品中代谢物含量产生显著影响。45℃烘干和硅胶干燥则能导致不同组织样品中氨基丁酸、甘油酸、苏糖酸、奎宁酸、葡糖酸、果糖、葡萄糖、半乳糖、麦芽糖和肌醇含量升高,而蔗糖和肌醇半乳糖苷含量下降。不同干燥方法对酶活抑制效率差异可能是导致上述结果的重要原因。因此,在进行芦苇代谢组学研究时,必须考虑不同干燥方法对不同组织代谢组学分析结果的影响。     

用GC—MS法测定尿中可待因及其代谢物的浓度

建立了用ＧＣ－ＭＳ（ＳＩＭ）内标定量法快速测定人尿中可待因及其代谢物浓度的方法，样品经酸水解、乙醚／异丙醇提取，用ＭＳＴＦＡ－ＭＢＴＦＡ衍生化后进样于ＧＣ－ＭＳＤ，方法灵敏、准确，可用于监测吸毒者尿中可待因，吗啡类药物的浓度。本法已经受ＩＯＣ的１９９２年水平考试的考验。     

核磁共振技术测试不同性别大鼠尿液代谢物的研究

采用核磁共振波谱技术测试不同性别大鼠尿液代谢物,分析性别因素对大鼠尿液代谢成分的影响.大鼠尿液核磁共振氢谱（1HNMR谱）结果采用主成分分析（principal component analysis,PCA）和正交偏最小二乘判别分析（orthogonal to partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA）方法分析,得到不同性别大鼠尿液中的差异性代谢物.PCA分析结果显示2组尿液代谢成分有明显的差异,进一步进行OPLS-DA分析可以判别出2组尿液中具有差异性的代谢物.结果显示,雌性大鼠尿液中的丙氨酸、缬氨酸、鸟氨酸等氨基酸类以及乙酸、硫胺、氨基马尿酸、苯乙胺、氧氨嘧啶等代谢物含量高于雄性大鼠,差异有统计学意义（p〈0.05）.雄性大鼠尿液中的甲胺、二甲胺、三甲胺、肌酸酐、尿囊素、延胡索酸、甲酸等代谢物则明显高于雌性大鼠,差异有统计学意义（p〈0.05）.性别因素对大鼠尿液中的代谢成分有一定的影响.     

基于UPLC-Q/TOF MS技术的痛风患者血清代谢组学研究

采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术（UPLC-Q/TOF MS）对恩施土家族苗族自治州60例健康志愿者（对照组）和65例痛风患者（痛风组）的血清样本建立代谢图谱,基于主成分分析及正交偏最小二乘判别分析对所得数据进行模式识别,并结合变量权重投影分析及火山图筛选出痛风患者的血清代谢标志物。通过数据分析和数据库检索,共筛选出63种差异代谢物,其中27种代谢物显著上调（P <0.05）,36种代谢物显著下调（P <0.05）,主要包括甘油磷脂类、氨基酸类及胆碱等成分。首先,对以上差异代谢物进行受试者工作特征曲线（ROC）分析,其中曲线下面积（AUC）大于0.8的14种代谢物是诊断效能较好的代谢物;然后对筛选的63种差异代谢物进行代谢通路富集分析,以Impact> 0.1且P <0.05为标准,得到影响最大的代谢通路主要有甘油磷脂代谢、醚性脂质代谢、亚油酸代谢、半胱氨酸和蛋氨酸代谢、花生四烯酸代谢及戊糖和葡萄醛酸的互相转化等。综上,痛风患者和健康对照人群的血清代谢水平有明显差异,差异代谢物的鉴定为痛风的发病机制和早期筛查提供了实验依据。     

羟基化合物及其葡醛酸苷化学结构与RP—HPLC保留行为相关性研究

采用体外孵育生物合成方法获得羟基化合物葡醛酸苷系列化合物，并对其反相高效液相色谱保留行为及底物与其葡醛酸结合物保留行为相关性进行了研究，建立了相应的结构－色谱保留行为相关性方程及葡醛酸苷类代谢物保留行为的预测方法。将ＱＳＲＲ研究扩展到药物代谢物领域，对药物Ⅱ相葡醛酸化代谢产物的ＨＰＬＣ分析提供了帮助。     

基于多元活性成分同时测定结合多元统计分析评价不同干燥加工三叶青药材的质量

建立了一种超快速液相色谱-三重四极杆-线性离子阱质谱(UFLC-QTRAP-MS/MS)同时测定三叶青中黄酮类、鞣质类、酚酸类、核苷类、多酚类和氨基酸类等60种活性成分的快速分析方法,并结合多元统计分析,评价不同干燥加工三叶青的质量。采用XBridge^?C₁₈柱(4.6 mm×100 mm,3.5μm)以0.4%甲酸-甲醇为流动相进行梯度分离,以多反应监测模式在电喷雾正、负离子模式下进行质谱检测。基于各目标成分的质量浓度,用方差分析(ANOVA)、熵权TOPSIS法及灰色关联度分析(GRA)对不同干燥加工三叶青样品进行综合评价。结果显示,各目标成分在一定质量浓度范围内的线性关系良好,相关系数均不低于0.999 0,检出限为0.03～13.59 ng/mL,定量下限为0.09～45.30 ng/mL,平均加标回收率为96.1%～102%,相对标准偏差均小于5%;不同干燥方式对三叶青的多种活性成分有影响,与传统的干燥方式相比,现代的干燥方式能明显保留三叶青的活性成分。综合分析,真空干燥的三叶青样品的综合质量较好。该研究构建的方法可为三叶青的合理干...     

基于GC－MS和化学计量法探究边角料添加比例对食品接触用再生PE薄膜的影响

对含不同比例边角料再生聚乙烯（PE）薄膜的颜色、总迁移量进行测定,基于气相色谱－质谱联用（GC－MS）技术对其中的挥发性物质进行筛查,并结合化学计量法分析差异性物质。结果表明：边角料的加入对单层再生薄膜颜色的影响可忽略,且原生和再生PE薄膜在4种食品模拟物的总迁移量均小于安全限量10 mg/dm2。GC－MS共检出90种挥发性有机化合物,主要为脂肪烃、添加剂及其降解产物和杂质等。通过主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘－判别分析（OPLS－DA）模型将再生PE薄膜分为3类,边角料含量低于10%时与原生薄膜相似,10% ~ 50%时需进一步评估,高于50%时需重点关注。并构建V－plot筛选出26种造成样品差异的特征成分,主要为脂肪烃,其次为添加剂及其降解产物,如十二酰胺、壬醛和抗氧剂1010的降解产物等。该研究可为食品接触用领域边角料“膜对膜”同级回收的应用提供借鉴。     

人尿中避孕药炔诺酮代谢物的GC—MS分析

本文用GC－MS方法分析炔诺酮及其在人尿中的代谢产物，从收集的服药后5h的尿样中检出并鉴定了炔诺酮的2个主要物Met1和Met2，同时还发现22个浓度较低的次要代谢物Met3和Met4与诺龙的代谢情况不同，容易区别。     

基于GC-MS代谢组学的大鼠肝脏代谢谱时序性变化的性别差异研究

考察性别因素对死后肝脏组织中代谢物变化规律的影响。72只SD大鼠（雌雄各半）于死后72 h内不同时间采集肝脏右叶,进行气相色谱－质谱联用（Gas chromatography－mass spectrometry,GC－MS）代谢组学分析。通过主成分分析（Principal component analysis,PCA）和偏最小二乘法（Partial least squares,PLS）进行多元统计分析,筛选出不同性别中均随死亡时间（Postmortem interval,PMI） 变化的共同差异代谢物,比较分析其在死后不同时间是否存在性别差异。结果显示,雌雄大鼠肝脏的不同PMI样本在PCA和PLS分析中均能完全区分,在雄性大鼠和雌性大鼠肝脏中分别筛选出了42种和41种与PMI相关的差异代谢物,其中31种为不同性别组共有的差异代谢物。在共有的差异代谢物中,有18种在死后不同时间点存在性别差异。该研究表明性别因素会对死后不同时间肝脏组织中代谢物的浓度产生影响,采用代谢物推断PMI时需考虑性别因素。     

新型合成大麻素ADB－BUTINACA在不同时间段斑马鱼体内的代谢组学分析

采用液相色谱－高分辨质谱技术对不同时间段斑马鱼体内ADB－BUTINACA的21种代谢产物进行分析。首先采用正交信号变换的偏最小二乘判别分析和层次聚类分析方法筛选出7种具有显著性差异的组间代谢物,以7种差异代谢物为特征建立Stacking集成学习模型,对4组不同时间段的斑马鱼体内样本进行分类预测。结果显示,模型预测准确率高达98%,表明筛选的潜在差异代谢物能够有效反映不同时间段原药在斑马鱼体内的变化情况;对7种潜在差异代谢物在4类样本体内的含量变化进行富集分析,结果表明差异代谢物的总体含量随着染毒时间的增加而降低,各类代谢物的含量分布由最初的不均衡趋向于均衡分布。此外,实验发现大部分差异代谢物的代谢路径与羟基化反应密切相关,推测原药在生物体内发生羟基化反应与给药时间推断方面具有一定关联性。实验结果可为药物服用时间推断等相关领域分析提供依据。     

UPLC－ESI－Q－TOF MS结合裂解规律分析姜科植物中二苯基庚烷类成分

根据标准品的质谱数据,探讨二苯基庚烷类成分的裂解规律,并利用裂解规律分析姜科植物中的该类成分。采用针泵注射进样,利用高分辨率和高准确性的电喷雾－四极杆－飞行时间质谱（ESI－Q－TOF MS）得到正离子模式下（ESI+）11个标准品的质谱数据。在此基础上,分析标准品的裂解行为,归纳4类二苯基庚烷类化合物的裂解途径,总结出二苯基庚烷类化合物的裂解规律。据此建立快速识别二苯基庚烷类成分的方法,结合超高效液相色谱－电喷雾－四极杆－飞行时间串联质谱（UPLC－ESI－Q－TOF MS）,对姜科植物来源中药姜皮、草果、益智仁中的二苯基庚烷类成分进行识别,从中分别鉴定出14、11、10个此类成分。结果表明,该方法准确、可靠、高效,可快速鉴定和分析姜科植物中的二苯基庚烷类化合物。     

HPLC－MS/MS法测定婴幼儿果蔬米粉中17种新烟碱类杀虫剂及代谢物

建立了婴幼儿果蔬米粉中17种新烟碱类杀虫剂及代谢物的高效液相色谱－串联质谱（HPLC－MS/MS）分析方法。样品经含1%（体积分数）甲酸的乙腈提取,QuEChERS净化,氮气吹干后,用含0.1%甲酸的乙腈水溶液（1∶4,体积比）定容。采用Acquity BEH C18色谱柱（2.1 mm × 100 mm,1.7 μm）分离,0.1%甲酸水溶液和乙腈作为流动相梯度洗脱,高效液相色谱－串联质谱检测。结果表明,17种目标物在对应的质量浓度范围内线性良好,相关系数（r）均大于0.995 4;方法检出限（LOD）为0.02 ~ 0.15 μg/kg,定量下限（LOQ）为0.06 ~ 0.50 μg/kg;在LOQ、2.0 μg/kg、10.0 μg/kg 3个加标水平下,17种目标物在水果米粉中的平均回收率为62.5% ~ 103%,相对标准偏差（RSD）为3.5% ~ 17%;蔬菜米粉中的平均回收率为66.4% ~ 108%,RSD为4.3% ~ 13%。该方法灵敏、准确,简便、可靠,适用于婴幼儿果蔬米粉中17种新烟碱类杀虫剂及代谢物的同时检测。     

微流控芯片－质谱联用技术在细胞代谢与药物代谢中的研究进展

细胞代谢与药物代谢是新药筛选和研发的关键环节,在推动人类大健康发展进程中具有重要意义。通常情况下,细胞代谢和药物筛选以传统细胞培养测定研究为主,多为静态培养条件,无法很好地模拟体内细胞动态微环境。微流控芯片－质谱联用是近年发展起来的一种新型高通量分析技术。微流控芯片模块可高度模拟细胞体内动态微环境,与质谱联用可实时在线检测样品物质,具有高效、快速、简便、样品和试剂消耗低等特点,广泛应用于细胞代谢和药物代谢分析,有利于加速药物筛选研发进程。该文重点综述了微流控芯片－质谱联用技术及其在细胞代谢和药物代谢方面的应用概况,并对目前存在的局限性进行了讨论和展望,以期为微流控芯片－质谱联用技术在新药研发与细胞分析领域的发展提供参考。     

超高效液相色谱/飞行时间质谱法分析尿液中的代谢物用于区分人类性别的研究

尿中的代谢产物可以反映生命个体的生理状态。为了考察在非严格控制条件下(即对志愿者的饮食、生活方式以及样品采集时间等诸多条件不加以控制)基于尿中代谢物的指纹图谱对男女性别进行区分的可行性,采用超高效液相色谱/飞行时间质谱(UPLC/TOF-MS)联用技术分析了31个随机尿样,并用主成分分析法（PCA）和偏最小二乘法判别分析（PLS-DA）两种数据处理方法对数据进行处理,与PCA法比较,PLS-DA法能提高分类效果,并筛选出4种可能的与性别相关的生物标记物。研究结果表明,UPLC/MS联用技术通量高,数据量丰富;模式识别数据处理方法适合于从大量数据中提取信息,两者的结合有利于代谢组学的研究。     

基于液相色谱-质谱联用技术的代谢组学方法研究薄荷烟对大鼠代谢的影响

将基于液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术的代谢组学分析平台用于薄荷烟对大鼠代谢影响的研究。分析了3组大鼠的尿样,包括对照大鼠、吸食普通烟大鼠和吸食薄荷烟大鼠,并采用主成分分析(PCA)方法对数据进行模式识别。PCA得分图表明吸食薄荷烟大鼠与对照组大鼠尿样的代谢差异要小于吸食普通烟大鼠。从PCA载荷图中找到并鉴定了犬尿喹啉酸等8种重要代谢物。通过考察代谢物在对照大鼠、吸食薄荷烟大鼠和吸食普通烟大鼠尿样中的相对含量变化,进一步说明了烟草中添加薄荷醇可减少烟草对大鼠代谢的影响。     

基于单胺类神经递质代谢谱研究姜黄和郁金的寒热药性差异

为了研究姜黄、郁金寒热药性差异,采用HPLC-MS建立了大鼠脑中7种儿茶酚胺类物质的分析方法,对寒、热证候模型,及姜黄、郁金干预后相应模型中大鼠脑中儿茶酚胺类代谢物进行了分析。试验数据采用主成分分析（PCA）进行处理,采用t检验判别主要差异代谢产物。结果表明：大鼠脑中儿茶酚胺类成分与寒、热因素存在相关性,主成分得分图（PCA Scatter Plot）可以清楚的把寒、热模型和正常对照组进行区分,主要差异代谢物为E,3-MT,5-HT;姜黄对寒证模型的作用较为明显,模式识别可以区分二者,主要差异代谢物为E、3-MT,说明了姜黄具有温性药性的性质;郁金、姜黄对热证模型均有一定作用,但郁金的作用强于姜黄,主要差异代谢物为E、3-MT、5-HT、DOPAC。     

基于UPLC－QTOF MS的鱼类鳃靶器官代谢组学分析方法研究

针对鱼类鳃靶器官代谢组学研究缺乏准确高效的高通量检测技术的问题,建立了基于超高效液相色谱－飞行时间质谱联用技术（UPLC－QTOF MS）的分析方法。以图谱总峰面积、代谢物数目、相对峰面积的相对标准偏差（RSD）以及葡萄糖、L-亮氨酸、柠檬酸等6种代表性内源代谢物的响应值为指标,考察了不同实验条件对鳃组织中代谢物提取覆盖率、稳定性的影响。结果表明,采用加入样品－试剂比（mg∶μL）为1∶16的预冷甲醇－水（4∶1）低温研磨,并在-20 ℃下低温静置30 min后离心提取的方法时,鳃组织样本可获得最佳的提取效果。对数据采集过程中的色谱、质谱参数进行优化,进一步提高了代谢物的分离效果和信号强度,并利用质量控制（QC）样品进行了方法学考察。该方法具有较好的仪器精密度、方法精密度和样品稳定性,6种不同极性代表性代谢物的相对峰面积RSD均小于10%,可以满足鱼类鳃靶器官代谢组学研究的要求。研究结果为鱼类鳃靶器官的代谢组学研究提供了技术支撑。     

基于UPLC－Q－TOF MS技术结合化学计量学数据自动化解析的不同花期沙枣花成分分析

基于超高效液相色谱－串联飞行时间质谱（UPLC－Q－TOF MS）的非靶向代谢组学技术,结合课题组发展的化学计量学数据自动化解析方法（AntDAS）,对沙枣花初花期、盛花始期、盛花期和盛花末期4个花期中的化合物进行了分析。沙枣花样品经70%甲醇－水超声提取30 min后,离心取上清液进行UPLC－Q－TOF MS分析采集化合物信息,经AntDAS解析后,共鉴定出19个差异性代谢物,其中12个化合物经对照品验证,可确定分别为L-赖氨酸、L-组氨酸、谷氨酰胺、L-蛋氨酸、L-酪氨酸、苯丙氨酸、L-色氨酸、N-甲基-L-脯氨酸、对羟基肉桂酸、水仙苷、反式阿魏酸、苦豆碱。利用主成分分析和层次聚类分析对不同花期的样本进行分析,结果均显示同花期的沙枣花样本聚集在一起,不同花期的沙枣花样本显示出明显区分。热图分析结果进一步表明不同花期沙枣花样本中的化合物含量存在较大差异,如沙枣花样本中多数氨基酸（如L-色氨酸、L-赖氨酸、L-组氨酸、L-酪氨酸、L-蛋氨酸）在盛花期和盛花末期中的含量高于初花期和盛花始期。该研究可为不同花期沙枣花的品质稳定性评估及后期开发应用提供依据,也为其他植物中复杂化学成分的分析提供了新的研究思路。     

基于超高效液相色谱联用高分辨质谱自动解析方法的金银花不同加工方式分析

金银花干燥加工方式直接影响其药用价值及经济效益。 采用基于超高效液相色谱联用静电场轨道阱高分辨质谱的非靶向代谢组学技术结合化学计量学自动化数据分析策略,分析了不同加工方式对金银花中化学成分的影响。金银花样品经甲醇-水（8∶2,体积比）溶液超声提取30 min,两次离心后取上清液,以Waters Acquity UPLC HSS T3色谱柱（2.1×100 mm, 1.8 μm）分离,乙腈-水溶液（均含有体积分数0.1%的甲酸）进行梯度洗脱。高分辨质谱选择正离子扫描模式（ESI+）并采用FULL MS/DD-MS2（TOP4）模式完成数据采集。在自动化解析方法软件平台对仪器采集的原始信号直接解析,鉴定出绿原酸、芦丁和异槲皮苜等16种差异性化合物。在化学成分解析的基础上,利用层次聚类分析和主成分分析等方法评价了晒干、阴干、电热烘干、烘房烘干、热泵烘干和真空冷冻干燥这6种加工方式获得的金银花样品品质差异。真空冷冻干燥、烘房烘干和热泵干燥等加工方式能够获得外观特征优质的金银花。在真空冷冻干燥方式下,金银花样品中的抗氧化功能性成分能够得到更好的保存。     

尿样中海洛因代谢物的检验

使用自制的固相微萃取装置,对尿液中海洛因代谢物6－单乙酰吗啡进行萃取,在装有衍生化试剂的密封玻璃瓶内顶空衍生,用GC－MS检测,取得了较好的效果。方法简便、快速,可用于吸毒者的确认。