一种光功能有机纳米粒子的制备及细胞毒性评价

合成了一种具有双光子荧光探针功能的有机纳米粒子2,5,2',5'-(4'-N,N-二苯胺苯乙烯基)联苯(DPA-TSB), 并研究其细胞毒性. 利用水溶性四氮唑(WST-1)法、 乳酸脱氮酶(LDH)法和流式细胞术检测了胃癌细胞吞噬纳米粒子后的生理活性. 研究结果表明, 在纳米粒子浓度小于12 μg/mL时, 胃癌细胞仍表现出较好的生理活性, 表明该纳米粒子是一种具有较好生物安全性的光功能有机纳米粒子.     

铅的肾脏毒性与细胞凋亡的关系

为了解铅的肾脏毒性以及与细胞凋亡的关系，建立原位末端标记法检测细胞凋亡。用醋酸铅腹腔注射染毒大鼠，染毒剂量分别为５，１０，２０ｍｇＰｂ＾２＋／ｋｇ体重，１次／天，共染毒３天，对照组腹腔注射醋酸钠２０ｍｇ Ｎａ＾＋／ｋｇ体重，结果，于染毒第二天开始，各染毒组动物体重的增长速率已开始下降，与对照组比较差异有显著性（Ｐ〈０．０５）。肾脏脏器系数，染毒组显著高于对照组（Ｐ〈０．０５）。染毒鼠的肾脏组织凋亡     

AFM研究蝙蝠葛碱对daudi细胞毒性的影响

利用原子力显微镜、CCK-8实验和流式细胞术研究了蝙蝠葛碱(dauricine)对B细胞淋巴瘤daudi细胞的细胞毒性。蝙蝠葛碱能显著抑制daudi细胞的增殖。CCK-8实验表明,细胞存活率与蝙蝠葛碱浓度存在时间依赖和剂量依赖关系。经10～50μmol/L的蝙蝠葛碱作用24 h后,daudi细胞存活率从(89.8±4.3)%降至(11.2±3.2)%;48 h后,存活率从(68.9±2.6)%降至(2.5±0.5)%。流式细胞术表明蝙蝠葛碱处理dau-di细胞24 h后,凋亡率从5.2%增至28.2%(60μmol/L)。AFM数据显示对照组细胞呈圆形,表面较光滑。经蝙蝠葛碱处理后,daudi细胞坍塌,超微结构显示细胞表面粗糙、凹凸不平。此外,经不同浓度蝙蝠葛碱作用的daudi细胞,其线粒体膜电位随着药物浓度的加大而降低。蝙蝠葛碱能显著抑制daudi细胞生长增殖。     

海洋珍珠生物提取液对人宫颈癌Siha细胞增殖与凋亡作用的影响

为探讨海洋珍珠生物提取液对宫颈癌Siha细胞株增殖和凋亡的影响,采用MTT法检测了细胞增殖情况,在流式细胞仪用Annexin V和PI双染检测了细胞的凋亡率,PI单染法测定了细胞周期,Hoechst 33258/PI荧光染色法观测了Siha细胞的形态学改变,RT-PCR法测定了宫颈癌Siha细胞株内Bcl-2,Bax基因表达。结果表明,海洋珍珠生物提取液在一定质量浓度范围内,以浓度依赖性的方式抑制宫颈癌Siha细胞的生长(P0.05);以0,6,30和60μg/mL海洋珍珠生物提取液处理细胞24 h,Siha细胞早期凋亡率分别为5%,7.1%,32.25%和31.95%,晚期凋亡比例为0.45%,2.85%,8.55%和23.2%;荧光显微镜下细胞呈现典型的凋亡性改变;RT-PCR显示海洋珍珠生物提取液处理后宫颈癌Siha细胞内的Bcl-2 mRNA表达降低,Bax mRNA表达升高。提示海洋珍珠生物提取液以浓度依赖性的方式抑制宫颈癌Siha细胞增殖,并通过降低Bcl-2 mRNA,升高Bax mRNA来诱导细胞凋亡。     

酿酒酵母凋亡细胞的毛细管电泳行为研究

用醋酸诱导酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)作为细胞凋亡过程,用扫描电镜和流式细胞术两种检测技术确证其细胞凋亡特征：用800mmol／L乙酸诱导21h后的细胞在电镜图上出现明显表面皱缩、细胞壁内陷;流式细胞图上出现典型凋亡峰——亚二倍体峰。详细探讨其高效毛细管电泳的行为,发现凋亡细胞在300nm处的强吸收峰消失;凋亡细胞核在220nm处,12～18min之间出现了一个新的分离峰。研究表明,毛细管电泳非常适于对细胞凋亡过程进行动态特征监测。     

注射用血栓通冻干粉对氧化应激导致的RGC-5细胞凋亡的保护作用

目的观察注射用血栓通冻干粉是否对氧化应激导致的RGC-5细胞凋亡有保护作用。方法采用过氧化氢制备氧化应激损伤模型。分为4个组,分别为空白对照组、0.5 mg血栓通观察组,2 mg血栓通观察组,10 mg血栓通观察组,利用上述浓度培育RGC-5细胞24 h后利用400μm浓度的过氧化氢制备氧化应激模型。随后MTT法观察细胞凋亡情况。结果经过不同浓度注射用血栓通培育后的细胞,凋亡率明显下降,各组间的差异有统计学意义(P0.05)。结论注射用血栓通对氧化应激损伤导致的RGC-5细胞凋亡有保护作用。     

柠檬酸镧诱导HeLa细胞凋亡差异蛋白组学研究

稀土具有多种多样的生物效应,研究表明稀土具有促细胞增殖和诱导细胞凋亡的双重作用．作用效应与稀土的种类,物种、浓度以及细胞的种类有关,表现出类似Hormesis效应的“低促高抑”现象．如陈兴安等学者曾报道稀土化合物既能促进正常细胞的生长又能抑制癌细胞．最近,一种化合物（Gd（III）-texaphyrinl已经进入三期临床实验,用于非小细胞肺癌脑转移的治疗．稀土促进细胞凋亡可能与以下机制有关：通过与肿瘤细胞DNA特异性结合,影响DNA的合成或复制、影响细胞周期促进凋亡、增加细胞内活性氧（ROS）水平,通过线粒体凋亡通路诱导细胞凋亡,调节机体免疫机能等．我们前期研究表明,柠檬酸镧对各种癌细胞生长的影响存在浓度依赖性,低浓度无明显作用特征,高浓度抑制癌细胞生长,诱导细胞凋亡;不同肿瘤细胞对稀土的响应不同,宫颈癌HeLa细胞株相对敏感．本文进一步利用差异蛋白质组学方法探讨柠檬酸镧诱导HeLa细胞凋亡的作用机制．双向凝胶电泳（2DE）与基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱（MALDI—TOF／TOF—MS）检测结果显示有14种表达差异明显的蛋白．包括与凋亡和细胞增殖相关蛋白：核仁磷酸化蛋白（NMP）和S100钙结合蛋白（S100－A11）表达上调,线粒体prohibitin蛋白下调;应激和氧化应激相关蛋白：包括热休克蛋白（heat shock 70－kDa protein 9 precursor,HspB8）和超氧化物歧化酶1（SOD1）下调,而NAD依耐的亚甲基四氢叶酸脱氢酶（MTHFD2L）上调;翻译和蛋白降解相关蛋白：包括真核翻译延伸因子2（eFF2）、核糖体蛋白（RPLPO）和钙网蛋白前体变体（calreticulin precursor variant and far upstream element（FUSE）binding protein 1,isoform CRA_b）下调,蛋白酶体proteasome beta 3 subunit上调．蛋白组学的结果提示,[La（cit）2]^3-可能通过线粒体凋亡通路以及调节细胞内氧化应激水平诱导Hela细胞凋亡．进一步用免疫印迹（western blotting）进行验证和检测相关凋亡蛋白,结果显示SOD1、eFF2和Nm23蛋白下调,凋亡相关蛋白caspase-9和PARP激活,促凋亡蛋白Bax表达上升和抗凋亡蛋白Bcl-2表达下降．另外,柠檬酸镧作用细胞后,细胞线粒体膜电位（△ψM）下降,细胞色素c（cyt-c）释放和H2O2产生增加．线粒体膜通透性改变、膜电位的变化、ROS的生成和促凋亡蛋白的释放是细胞凋亡过程的关键事件．这些结果表明柠檬酸镧通过线粒体凋亡途径诱导HeLa细胞凋亡,这一结论与既往研究相一致,为柠檬酸稀土配合物的抗癌作用机制提供了基础信息．Ca^2＋超载是引起线粒体损伤的重要因素之一,Ca^2＋也能调节电压依赖阴离子通道活性（VDAC）从而调节线粒体通透性转变孔的开放与关闭．柠檬酸镧能解离出镧离子（La^3＋）,La^3＋具有类钙的性质,这可能是镧作用于线粒体引起凋亡的原因之一．当然,有研究表明这种作用具有两面性,低剂量能促进线粒体PTP孔的开放,高浓度表现为拮抗作用或没有影响．另外,VDAC位于线粒体外膜,对线粒体及细胞功能调节非常重要．本研究结果显示,与对照相比,VADC1的表达没有变化,而VADC2没有检测到,说明VADC的表达在柠檬酸镧诱导的细胞凋亡中可能不是一个关键因素．     

微流控芯片系统流式细胞术及单细胞荧光检测

微流控芯片系统用于细胞分析是近年来该技术发展的一个热点,因而受到越来越多的关注．其主要原因在于微全分析系统具备高度微型化、集成化和设计灵活等特点,通过巧妙设计和精密加工能够实现细胞的培养、凋亡及检测等功能．流式细胞术(Flow cytometer,FCM)是一种在功能水平上对单细胞或其它生物粒子进行定量分析和分选的检测手段,     

神经鞘磷脂合成酶基因沉默对细胞凋亡的影响

以HEK293细胞为模型, 利用RNA干扰技术, 将神经鞘磷脂合成酶(SMS)的同工酶(SMS1和SMS2)的siRNA分别联合、转染HEK293细胞. 通过薄层层析法评价SMS酶活性, 同时测神经酰胺(Cer)、卵磷脂(PC)及神经鞘磷脂(SM)的水平, 并以流式细胞仪和Annexin V-FITC、PI双染法检测细胞凋亡. 结果显示, 与对照组相比, SMS基因沉默后SMS表达水平降低(分别降低17%, 20%, 49%); SM水平显著性降低(P<0.05); Cer水平显著性升高(P<0.05); TNF-α诱导的凋亡显著性升高[分别为58%(P<0.01), 24%(P<0.05), 77%(P<0.01)]. 这些结果提示, SMS基因沉默能降低SM水平并升高Cer水平, 明显增加TNF-α诱导的HEK293细胞凋亡. 由于SM是动脉粥样硬化形成的独立危险因子, 因此本研究有可能为动脉粥样硬化的治疗找到新的靶点和有效途径.     

新型苯并[b]氮杂?-查尔酮杂合物的设计、合成及抗肿瘤活性研究

为了寻找高效、低毒的抗肿瘤药物，基于分子杂交的策略，将苯并[b]氮杂?结构引入查尔酮母体结构中，设计了12个未见文献报道的苯并[b]氮杂?-查尔酮杂合物（7a~7l）。并以苯胺为原料，经N-烷基化、羰基化、水解、环化和Claisen-Schmidt缩合反应合成了7a~7l，其结构经¹HNMR, ¹³CNMR和HR-MS(ESI)表征。采用MTT法评估了目标化合物对人胃癌细胞（HGC-27）、人肝癌细胞（HepG2）、人非小细胞肺癌细胞（A549）和人正常胃粘膜上皮细胞（GES-1）的抗增殖活性，并进一步采用流式细胞术和蛋白印迹法实验在细胞和蛋白水平上探究了活性最优化合物的抗肿瘤机制。结果表明：目标化合物对HGC-27细胞表现出较高的抗增殖活性，其中化合物7d对HGC-27细胞的抗增殖活性最强(IC₅₀=0.78 μmol•L^-1)，优于阳性对照顺铂(IC₅₀=7.38 μmol•L^-1)，同时其对人正常细胞GES-1的毒性较低（IC₅₀=22.77 μmol•L^-1, SI=29.19），弱于阳性对照顺铂（IC₅₀=9.51 μmol•L^-1, SI=1.29）。抗肿瘤机制研究表明:化合物7d能够将癌细胞HGC-27的细胞周期阻滞在G2/M期，并通过增加促凋亡蛋白Bax和降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达来诱导HGC-27细胞的凋亡。      

Two new glycosides isolated from Sapindus mukorossi fruits: effects on cell apoptosis and caspase-3 activation in human lung carcinoma cells

Two new glycosides (1, 2) and two saponins (3, 4) were isolated from the fruits of Sapindus mukorossi Gaertn. The two glycosides were designated as sapindoside G (1) and 4′′,4′′′′′-O-diacetylmukurozioside IIa (2). All four compounds exhibited inhibitory effects against A549 human lung adenocarcinoma cells with inhibition rates up to 69.2–83.3% at a concentration of 100 μg/mL. Flow cytometric analysis revealed that compounds 1–4 could suppress A549 cell growth by promoting cell apoptosis, which was related to the activation of caspase-3.     

量子点@SiO_2微球的水相合成及其在流式分析技术中的应用

通过表面配体交换将巯基硅烷包覆在量子点(QDs)表面,并与过量的硅烷共水解制备出包覆QDs的荧光硅球。该方法通过化学键合避免了QDs的泄露以及QDs荧光性质的改变,而且微球表面富集大量的巯基,为后续的反应提供活性位点。研究了反应时间、温度和搅拌速度对荧光微球形成的影响,优化条件得到了尺寸均一、单分散性的荧光微球。将荧光微球用于流式细胞分析检测,微球的数量和荧光强度能够满足流式分析检测的需要,适合制备成编码微球。     

A flow cytometric assay technology based on quantum dots-encoded beads

A flow cytometric detecting technology based on quantum dots (QDs)-encoded beads has been described. Using this technology, several QDs-encoded beads with different code were identified effectively, and the target molecule (DNA sequence) in solution was also detected accurately by coupling to its complementary sequence probed on QDs-encoded beads through DNA hybridization assay. The resolution of this technology for encoded beads is resulted from two longer wavelength fluorescence identification signals (yellow and red fluorescent signals of QDs), and the third shorter wavelength fluorescence signal (green reporting signal of fluorescein isothiocyanate (FITC)) for the determination of reaction between probe and target. In experiment, because of QDs’ unique optical character, only one excitation light source was needed to excite the QDs and probe dye FITC synchronously comparing with other flow cytometric assay technology. The results show that this technology has present excellent repeatability and good accuracy. It will become a promising multiple assay platform in various application fields after further improvement.     

Stopped-flow injection analysis. The influence of diffusion on dispersion of normal and reverse flow injection

A relationship is derived to enable the comparison of the dispersion heights of normal and reverse flow injection analysis (FIA). A single channel flow system is employed in the absence of a chemical reaction. The stopped-flow injection method is used to probe the influence of molecular diffusion on the overall dispersion of normal and reverse FIA, which appeared to demonstrate fundamentally different diffusion behaviors. Small discrepancies are observed between the dispersion heights, which are enhanced by the stopped-flow period, especially when unmatched matrix ionic compositions of the indicator and counter solutions were involved. For these conditions, the diffusion flux rate is enhanced considerably, displaying a peak, in addition to the transient, for both methods. The influence of diffusion on the dispersion characteristics of normal and reverse FIA is discussed theoretically. Diffusion in the proposed model is postulated to oppose dispersion by convection. The latter initiates concentration gradients in the injection zone and propagates it with flow time over the dispersion zone profile. The diffusion flux then reacts in order to confine the indicator dispersion for normal FIA and to enhance it for reverse FIA. This model is consistent with the experimental results and accounts for most of the phenomena encountered. Probably owing to the influence of secondary flow phenomena, the use of coiled tubes has suppressed the effects of diffusion on the overall dispersion behavior.Part of the experimental work was performed at IMI Institute for Research and Development, Haifa, Israel.     

Cu2+-H2O2-罗丹明B-西咪替丁化学发光体系的研究

在弱碱性的多聚磷酸钠介质中,二价铜离子、过氧化氢和染料罗丹明B混合可以产生较强的化学发光,西咪替丁对此发光有较强的抑制作用,其抑制发光强度与西咪替丁P43的质量浓度在5.0-1000μg.L-1范围内呈良好的线性关系,基于此,结合流动注射技术,建立了一种直接测定西咪替丁的化学发展发光新方法。该方法具有较高的灵敏度,检出限为2.2μg.L-1(IUPAC),对500μg.L-1西咪替丁平行测定11次,其相对标准偏差为2.1%。该方法已成功用于西咪替丁胶囊和针剂含量的测定。     

流式微球技术在小分子化合物免疫检测中的应用

流式微球分析技术具有高通量、灵敏、快速且可同步进行多参数分析等特点,在过去的几年里主要应用于医疗诊断等领域,而用于小分子化合物的识别与检测的报道较少.该文介绍了小分子化合物流式微球免疫检测技术原理和临床疾病诊断、治疗方面的应用,探讨并分析了目前该技术存在的问题,展望了其在食品安全、环境监测等领域的应用前景,为开展小分子化合物流式微球检测技术研究提供了新的思路.     

基于离散流的微全分析系统

针对基于连续流的微全分析系统的弊端,详细研究了几种基于离散流的微分分析系统的原理及结构。     

Flow analysis based on a pulsed flow of solution: theory, instrumentation and applications

The increased demands placed on solution propulsion by programmed flow systems, such as sequential injection analysis, lab-on-value technology, bead injection and multi-commutation, has highlighted the inability of many conventional pumps to generate a smooth, consistent flow. A number of researchers have examined ways to overcome the inadvertent, uncontrolled pulsation caused by the mechanical aciton of peristaltic pumps. In contrast, we have developed instruments that exploit the characteristics of a reproducible pulsed flow of solution. In this paper, we discuss our instrumental approaches and some applications that have benefited from the use of a reproducible pulsed flow rather than the traditional linear flow approach. To place our approach in the context of the continuously developing field of flow analysis, an overview of other programmed flow systems is also presented.     

An automatic system for acidity determination based on sequential injection titration and the monosegmented flow approach

An automatic sequential injection system, combining monosegmented flow analysis, sequential injection analysis and sequential injection titration is proposed for acidity determination. The system enables controllable sample dilution and generation of standards of required concentration in a monosegmented sequential injection manner, sequential injection titration of the prepared solutions, data collecting, and handling. It has been tested on spectrophotometric determination of acetic, citric and phosphoric acids with sodium hydroxide used as a titrant and phenolphthalein or thymolphthalein (in the case of phosphoric acid determination) as indicators. Accuracy better than |4.4|% (RE) and repeatability better than 2.9% (RSD) have been obtained. It has been applied to the determination of total acidity in vinegars and various soft drinks. The system provides low sample (less than 0.3 mL) consumption. On average, analysis of a sample takes several minutes.     

ALPKEMRFA-300自动化学分析仪工作原理及故障分析

ＲＦＡ－３００型自动化学分析仪是美国ＡＬＰＫＥＭ仪器公司的产品，仪器由增样器，蠕动泵，化学反应器，测定器，记录器五个部分组成，由于它准确度和精密度高，分析速度快等特点，所以大量应用于食品，医药，环保等工业，为正确使用仪器总结了一些仪器工作原理和常见故障分析及处理故障的经验，供有关人员参考。