酶促合成肽的研究 II: 含羧基侧链氨基酸的肽的酶促合成

用嗜热菌酶酶促合成了一系列含门冬氨酸、谷氨酸的肽. 实验证明, 缩合反应中羧基组份中的门冬氨酸β-羧基或谷氨酸γ-羧基毋需保护. 同时也研究了邻近氨基酸残基对缩合反应的影响.     

肽的酶促合成及其反应机制

先后以α-胰凝乳蛋白酶和木爪酶作催化剂以逐级缩合方式合成了[色]⁴亮-脑啡肽酰酶(TyGlyGlyTrpLeuNH₂),在合成中,对酶的专一性,有机溶剂的选择和合成条件等进行试探,比较了固相酶促法和液相酶促法,α-胰凝乳蛋白酶和木爪酶连接肽键中,以N-酰基氨基酸酯作为供体比相应的游离酸好,如用嗜热菌蛋白酶只能以N-酰基氨基酸为羧基组份,初步的体外实验说明合成的[色]⁴-亮脑啡肽酰酶与天然亮-脑啡肽有类似的鸦片样生理活性。     

以N-保护消旋氨基酸为羧基组分的酶促合成肽的研究

用不同的氨基保护的消旋氨基酸或酯作为羧基组分,在α-胰凝乳蛋白酶或木瓜蛋白酶的催化下与另一氨基酸的酰胺或酯缩合形成预期的光活性肽产物。以L-构型底物计算肽的产率为55%～83%,化合物的物理学常数与用相应的N-保护-L-氨基酸或酯为羧基组分,分别用化学法或酶促法测定所得结果一致。研究结果表明:利用酶的立体专一性,在形成肽键的过程中进行立体选择可得到光学活性的产物而不需预先拆分;只要溶剂体系中含有酶所需要的微量必需水,酶促反应在有机溶剂中可以顺利地进行。     

酶促合成肽的研究I.亮-脑啡肽色氨酸类似物的酶促合成

在先后以α-胰凝乳蛋白酶和和木瓜酶作催化剂的作用下,从C端的LeuNH2的氨基开始,逐个与N保护的氨基酸或其衍射生物缩合,合成了亮-脑啡肽色氨酸类似物-TyrGlyGly Trp LeuNH2.对酶的专一性、有机溶剂的选择和合成条件等进行了研究,在Z-TyrOMe和GlyGlyTrp LeuNH2的缩合反应中,比较了相转移法和均相法。上述两种酶的酶促接肽的供体以N-酰基氨基酸酯为好,比相相应的游离酸反应速度快,副反应少,如用嗜热菌蛋白酶,则以N-酰基氨基酸为好,酶促合成与从有机合成所得的产物相同。初步的体外实验表明合成的TyrGlyGlyTrpLeuNH2和天然的亮-脑啡肽对豚鼠回肠的收缩显示相同程度的鸦片样的抑制作用。     

酶促合成肽的研究——Ⅰ.亮-脑啡肽色氨酸类似物的酶促合成

在先后以α-胰凝乳蛋白酶和木瓜酶作催化剂的作用下,从C端的LeuNH_2的氨基开始,逐个与N保护的氨基酸或其衍生物缩合,合成了亮-脑啡肽色氨酸类似物—TyrGlyGly Trp LeuNH_2~(**)。对酶的专一性、有机溶剂的选择和合成条件等进行了研究,在Z-TyrOMe和GlyGlyTrp LeuNH_2的缩合反应中,比较了相转移法和均相法。上述两种酶的酶促接肽的供体以N-酰基氨基酸酯为好,比相应的游离酸反应速度快,副反应少。如用嗜热菌蛋白酶,则以N-酰基氨基酸为好。酶促合成与从有机合成所得的产物相同。初步的体外实验表明合成的TyrGlyGlyTrpLeuNH_2和天然的亮-脑啡肽对豚鼠回肠的收缩显示相同程度的鸦片样的抑制作用。     

新型富勒烯α-氨基酸的合成及其纳米颗粒水悬液的制备

通过1,3-偶极环加成反应合成中间体N-取代的3,4-富勒烯吡咯烷, 利用α-氨基与α-羧基均被保护的天冬氨酸或谷氨酸的非α-羧基与中间体N-取代的3,4-富勒烯吡咯烷衍生物的活化羟基进行缩合反应, 产物脱保护后得到了2种新的α-富勒烯氨基酸: 富勒烯天冬氨酸和富勒烯谷氨酸. 采用MALDI-TOF质谱、红外光谱、紫外-可见光谱和1H NMR 等方法对它们进行了结构表征. 采用有机溶剂交换法, 制备富勒烯氨基酸纳米颗粒水悬液, 并进行了电镜和表面zeta-电位分析, 结果表明, 此水悬液体系稳定, 颗粒形态大小均一, 在生物医学领域中具有潜在的应用前景.     

苯并二氮杂酮酸的合成及其在肽模拟中的应用

采用两种方法以靛红酸酐为起始原料,分别与谷氨酸(L-Glu)和亚氨基二乙酸(Ida)反应制备两种含有游离羧基的1,4-苯并二氮杂-2,5-二酮类中间体2a和2b;同时,由2a或2b与氨基组分3c～3f,3h,3j进行缩合制备了含有1,4-苯并二氮杂-2,5-二酮环的肽模拟物4c～4f,4h,4j,5c～5f,5h,5j.另外,讨论了溶剂对微波辅助法合成1,4-苯并二氮杂-2,5-二酮酸的影响.所合成新化合物均经MS,1HNMR证明其结构.     

TTT活泼酰胺法在固相肽合成中的应用——促生长激素释放肽的合成及其生物活性

通过合成促生长激素释放肽,对四氢噻唑-2-硫酮(TTT)活泼酰胺法在固相肽合成中的应用进行了研究。实验结果表明,TTT活泼酰胺同载体上的氨基组分的缩合反应速度很大,每步缩合反应的产率很高(>99.3％),最终产品的纯度也很令人满意。此外,还报道了合成肽的生物活性。     

新型可溶性铜酞菁染料敏化剂的合成

利用单甲酰基四-α-(2,4-二甲基-3-戊氧基)铜酞菁和含有羧基的活性亚甲基化合物的Knoevenagel缩合反应,合成了三种含羧基的铜酞菁染料敏化剂,并用红外、紫外、质谱等方法对其结构和性能进行了表征和测试。研究结果表明,三种化合物均具有好的溶解性。     

2-羰基丙酸缩对羧基苯腙的合成

以对氨基苯甲酸为原料,经过重氮化反应和还原反应,合成了对羧基苯肼(2);2与2-羰基丙酸缩合得到新化合物2-羰基丙酸缩对羧基苯腙,其结构经UV,荧光光谱(FS),1H NMR,13C NMR,IR和元素分析表征.     

酶促合成肽的研究Ⅰ.亮-月主啡肽色氨酸类似物的酶促合成

早在1937年Bergmann和Fraenkcl-Conrat用木瓜酶作催化剂连接成了羧酰苯胺键,其后Berg-mann和Fruton藉α-胰凝乳蛋白酶的催化连接了二肽,蛋白酶促合成肽的问题在近几年内又引起了人们的兴趣。     

接枝树形支化分子双亲性嵌段共聚肽的合成及性能研究

分别以叠氮丙胺和丙炔胺为引发剂,采用氨基酸环内酸酐开环聚合法(NCA-ROP),引发L-谷氨酸-γ-苄酯-N-羧基-环内酸酐和L-谷氨酸-γ-氯乙醇酯-N-羧基-环内酸酐聚合得到链端基为叠氮基的聚(L-谷氨酸-γ-苄酯)(PBLG)和链端基为炔基的聚(L-谷氨酸-γ-氯乙醇酯)(PCELG)均聚物.联合点击化学法(click chemistry)制备了一系列聚(L-谷氨酸-γ-苄酯)-b-聚(L-谷氨酸-γ-氯乙醇酯)(PBLG-b-PCELG),再通过对嵌段共聚物侧基氯进行化学修饰,将二代的甲基烷氧醚类亲水性树形枝化分子(G2)接枝到侧链上,形成一系列树形支化分子接枝聚肽双亲性嵌段共聚物,通过核磁(NMR)、红外光谱(IR)和凝胶渗透色谱(GPC)对其化学结构进行了表征,并采用紫外-可见光谱(UV-Vis)研究了聚合物结构及其溶液浓度对其温敏行为的影响规律.     

苯并二氮杂(艹卓)酮酸的合成及其在肽模拟中的应用

采用两种方法以靛红酸酐为起始原料,分别与谷氨酸(L-Glu)和亚氨基二乙酸(Ida)反应制备两种含有游离羧基的1,4-苯并二氮杂(艹卓)-2,5-二酮类中间体2a和2b;同时,由2a或2b与氨基组分3c～3f,3h,3j进行缩合制备了含有1,4-苯并二氮杂(艹卓)-2,5-二酮环的肽模拟物4c～4f,4h,4j,5c～5f,5h,5j.另外,讨论了溶剂对微波辅助法合成1,4-苯并二氮杂(艹卓)-2,5-二酮酸的影响.所合成新化合物均经MS,1H NMR证明其结构.     

以N—保护消旋氨基酸为羧基组分的酶促合成肽的研究

用不同的氨基保护的消旋氨基酸或酯作为羧基组分，在α－胰凝乳蛋白酶或木瓜蛋白酶的催化下与另一氨基酸的酰胺或酯综合形成的预期的光活性肽产物，以Ｌ－构型底物计算肽的产率为５５％－８３％。化合物的物理学常数与用相应的Ｎ－保护－Ｌ－氨基酸或酯为羧基组合组分，分别用化学法或酶促法测定所得结果一致，研究结果表明，利用酶的立体专一性，在形成肽键的过程中进行立体选择可得到光学活性的产物而不需预先拆分；只要溶剂体系中     

阿奇沙坦酯的合成工艺研究

本文以3-硝基邻苯二甲酸-1-甲酯为起始原料,经羧基转为氨基、还原、环合、N-烷基化、缩合、闭环、水解、酯化共8步反应制得了降压药阿奇沙坦酯。所得目标化合物经元素分析、质谱、氢核磁共振确认,总收率达30%。     

修饰核糖核酸酶A的酶促合成模型研究

为研究Leu¹²¹-核糖核酸酶A(Leu¹²¹-RNaseA)的半合成制备了C-端去HAsp Ala SerValOH四肽核糖核酸酶A即RNase A(1—120),用固相合成法合成了C-端四肽的类似物HLeu Ala Ser Val OH及C¹⁴标记Leu(记为Leu^*)的四肽HLeu^* Ala Ser Val OH。在设计的小肤模型中,以Boc Val Phe OH和HLeu Ala OMe为底物,在含50%乙二醇,pH 4.50的醋酸缓冲溶液中,在胃蛋白酶的作用下成功地得到了四肤Boc Val Phe Leu Ala OMe,并研究了温度对宵蛋白酶酶促反应的影响。在RNase A(1-120)与H Leu Ala Ser Val OH四肤的胃蛋白酶酶促反应的初步研究中,用HPL C检测反应出现一个新峰。此峰的保留时间与预期产物的保留时间相一致。同位素标记酶促合成试验在高压纸电泳上出现一个新的同位素点,估计为预期的产物。本文还对酶促合成的一些问题进行了讨论。     

聚L-谷氨酸γ-苄酯的合成及其结晶结构的研究

利用L-谷氨酸苄酯与三光气反应制备了N-羧基-L-谷氨酸γ-苄酯-环内酸酐(NCA),以正已胺为引发剂,引发NCA开环聚合,合成了分子量为6700的聚L-谷氨酸γ-苄酯(PBLG).利用核磁共振仪(1 H-NMR)、凝胶渗透色谱(GPC)、傅里叶变换红外光谱(FTIR)以及一维大角X射线衍射仪(1D-WAXD)等表征手...     

肽键的酶促合成

所谓肽键的酶促合成,实际上是指利用蛋白水解酶的逆转反应或转肽反应来进行的肽键合成。近年来,本方法有了某些新发展。它作为多肽化学合成的一个辅助和补充的方法,已经成功地用于许多小肽以及像脑啡肽和增血压素等生物活性肽的合成,更成功地是用于某些蛋白质如胰岛素、胰蛋白酶抑制剂,牛胰核糖核酸酶A、葡萄球菌核酸酶和细胞色素C等的结构与功能关系的研究。本文就最近研究概况作一简单介绍。     

爱滋病病毒中肽段的酶促合成

为了进一步研究酶促合成在多肽合成中的实际应用,选择合成了爱滋病病毒(人类免疫缺损病毒,HIV-I)的gp41中氨基酸序列598-609的三个肽段,该部分是HIV-I中的2个抗原决定簇部分,H-Leu-Glg-Leu-Trp-Glg-cgs-Ser-Glg-Lgs-Leu-Ile-Cgs-OH可以作为抗原来检测HIV抗体.     

淀粉水解糖与L-精氨酸、谷氨酸反应物的气相色谱-质谱分析

1 引言 梅拉德反应又称棕色化反应，指还原糖与蛋白质非酶促缩合反应。产物对食品和烟草具有着色致香作用。自从1912年Maillard首次报道非酶棕化反应以来，人们对棕色化反应物已由低分子量物质的研究向复杂的高聚物方向拓展，并对食品致香等方面作了许多报道。本文报道了淀粉水解糖分别与L-精氨酸、谷氨酸进行缩合反应，产物用气相色谱-质谱(GC-MS)分析表征。2 实验部分2.1 主要仪器与试剂 QP-5000色谱质谱联用仪(日本岛津公司)；磁力搅拌器；L-精氨酸、谷氨酸(生化级)；淀粉水解糖(96％)；乙醚(分析纯)。