酶联放大镧系螯合物发光法─辣根过氧化物酶(HRP)－铽－对羟基苯甲酸体系的研究及用于HRP和结核抗体的分析

酶联放大镧系螯合物发光法──辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）－铽－对羟基苯甲酸体系的研究及用于ＨＲＰ和结核抗体的分析谢剑炜,鄢远,彭学军,许金钩,陈国珍（厦门大学化学系、现代分析化学研究所,厦门,３６１００５）关键词酶联放大镧系螯合物发光法,辣根过氧化物酶,...     

联苯胺-H_2O_2-HRP伏安酶联免疫分析体系测定植物病毒TMV和TRSV

提出了联苯胺－Ｈ２Ｏ２－辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）伏安酶联免疫分析体系测定植物病毒烟草花叶病毒（ＴＭＶ）和烟草环斑病毒（ＴＲＳＶ）的新方法。ＨＲＰ标记的羊抗兔酶标记抗体ＩｇＧ－ＨＲＰ可以催化Ｈ２Ｏ２氧化联苯胺的反应,其氧化产物在Ｂｒｉｔｏｎ－Ｒｏｂｉｎｓｏｎ（ＢＲ）缓冲溶液中在－０．６２Ｖ（ＳＣＥ）左右产生灵敏的线性扫描二阶导数伏安峰,可以测定ＩｇＧ－ＨＲＰ。根据ＩｇＧ－ＨＲＰ与植物病毒及其抗血清的免疫反应,可以间接测定植物病毒。本法测定ＴＭＶ的检出限为０．２５ｎｇ／ｍＬ,线性范围为０．２５～５０００ｎｇ／ｍＬ;测定ＴＲＳＶ的检出限为１．５ｎｇ／ｍＬ,线性范围为１．５～３０００ｎｇ／ｍＬ;测定ＴＭＶ烟草病叶澄清液的最高稀释比为１∶１００００。检测灵敏度高于酶联免疫吸附显色光度法（ＥＬＩＳＡ）     

OAP-H2O2-HRP伏安酶联免疫分析新体系测定人血清总甲状腺素

提出邻氨基酚（ＯＡＰ）－Ｈ２Ｏ２－辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）发酶联免疫分析新体系并用于人血清中总甲状腺素的测定。本方法以线性扫描二阶导数伏安法检测ＨＲＰ催化Ｈ２Ｏ２氧化ＯＡＰ的产物,用于游离ＨＲＰ和ＨＲＰ标记物的测定,灵敏度的高于经典的ＥＬＩＳＡ显色光度法。测定游离ＨＲＰ的线性范围为１．０×１０＾１２￣４．０×１０＾－９ｇ／ｍＬ,检测限达６．０×１０＾１３ｇ／ｍＬ。本法对总甲状腺素测定的线性范围为１     

增强辣根过氧化物酶催化鲁米诺化学发光反应的新型增强剂四苯硼钠

报道了新型增强剂四苯硼钠对过氧化物酶催化鲁米诺－过氧化氢发光反应的增强作用，建立了流动注射化学发光测定或辣过氧化物酶（ＨＲＰ）的新体系。用该体系测定ＨＲＰ线性范围为１．０×１０－１２×１．２×１０－１３ｍｏｌ／Ｌ；检测限为０．６×１０－１３ｍｏｌ／Ｌ。对０．６×１０－１３ｍｍｏｌ／Ｌ的 ＨＲＰ进行１１次平行测定，相对标准偏差为 １． ５％。     

邻氨基酚-过氧化氢-辣根过氧化物酶伏安酶联免疫分析法测定人血清甲胎蛋白

提出了邻氨基酚（ＯＡＰ）－Ｈ２Ｏ２－辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）伏安酶联免疫分析法测定人血清甲胎蛋白（α－ＦＰ）的新方法．该方法是将ＨＲＰ催化Ｈ２Ｏ２氧化邻氨基酸的酶催化反应与邻氨基酚的氧化产物在滴汞电极上的还原反应相偶合，在ＢＲ缓冲溶液中，在－０．４３ Ｖ（ｖｓ．ＳＣＥ）左右产生灵敏的极谱波．根据测定标记在甲胎蛋白抗体上的ＨＲＰ的量，求得发生免疫反应的 α－ＦＰ的含量。该方法对甲胎蛋白测定的线性范围为 １． ２５～４００ ｍｇ／Ｌ。用所建立的方法对病人血清样品进行了测定，并与酶联免疫吸附测定光度法（ＥＬＩＳＡ）进行对照，二者相关性很好。     

PAP-H2O2-HRP酶促反应产物光谱及电化学研究

前文［１］首次提出了以对氨基酚（ＰＡＰ）为底物的ＰＡＰ－Ｈ２Ｏ２－辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）伏安酶联免疫分析新体系,并成功地应用于烟草花叶等植物病毒的血清学检测．在此之前,我们也曾报道过一些伏安酶联免疫分析新体系［２,３］．迄今,还没有人对 ＨＲＰ催化 Ｈ２Ｏ２氧化 ＰＡＰ的酶促反应进行过探讨．Ｐｒａｔｉ等［４］报道了在铜催化作用下,Ｏ２氧化对氨基酚生成３－［（４－个羟苯基）氨基」－４－（２－氨基－５－羟苯基）－６－［（４－羟苯基）亚胺基］－２,４－环己二烯基－１－酮．本文的实验结果与此文献不符． 为…     

OARP—H2O2—HRP伏安酶联免疫分析新体系测定人血清甲胎蛋白

本文提出邻氨基酚（ＯＡＰ－Ｈ２Ｏ２－辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）伏安酶联免疫分析体系并用于人血清中甲胎蛋白（αＦＰ）的测定。该方法是将ＨＲＰ催化Ｈ２Ｏ２氧化ＯＡＰ的酶催化反应与邻氨基酚的氧化中间产物（邻苯醌亚胺）在滴汞电极上的还原反应相偶合,在ＢＲ缓冲溶液中,在－０．８７Ｖ（ｖｓ,ＳＣＥ）左右产生灵敏的极谱波。根据测定标记在甲胎蛋白抗体上的ＨＲＰ的量,求得发生免疫反应的αＦＰ的含量。这该方法对甲胎蛋白测定的线性范围为１．２５－４００ｍｇ／Ｌ。用所建立的方法对病人的血清样品进行了测定,并与酶联免疫吸附测定光度法（ＥＬＩＳＡ）进行对照,二者相关性很好。     

硝基磺酚S作为酶联免疫分析中辣根过氧化物酶测定底物的研究

提出一种新的ＨＲＰ底物－硝基磺酚Ｓ,初步探讨了在ＨＲＰ催化下被过氧化氢氧化的机制,以硝基磺酚Ｓ为底物测定了酶促反应动力学常数Ｋｍ和Ｋｓ分别为４．５１×１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ和２８．１ｍｏｌ／Ｌ·ｓ＾－１。分别用于酶联免疫显色光度法和伏安酶联免疫分析法测定了ＩｇＧ－ＨＲＰ,其所能测定的最高稀释比分别为１：１．６×１０＾５和１：４．８×１０＾５。     

邻苯二胺-过氧化氢-辣根过氧化物酶酶联免疫示差脉冲伏安法测定人血清类风湿因子抗体

建立了邻苯二胺（ＯＰＤ）－Ｈ２Ｏ２－辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）酶联示差脉冲伏安分析体系并用于测定人血清中类风湿因子（ＲＦ），ＨＲＰ催化Ｈ２Ｏ２氧化ＯＰＤ所形成酶催化产物在ｐＨ２．０磷酸盐－枸橼酸缓冲溶液中于－０．１８ Ｖ左右产生一灵敏示差脉冲伏安峰，ＲＦ浓度在１．２５～２０．０ Ｕ／ｍＬ之间与峰电流呈线性关系，应用此峰检测人血清ＲＦ的检测限低至 ０．２８Ｕ／ｍＬ。该法较相同条件下ＥＬＩＳＡ显色光度测定法的灵敏度增加５倍，且受干扰较少。     

联本胺—H2O2—HRP伏安酶联免疫分析体系测定植物病毒TMV和TRSV

提出了联苯胺－Ｈ２Ｏ２－辣根过氧化物酶伏安酶联免疫分析体系测定植株病毒烟草花叶病毒（ＴＭＶ）和烟草环斑病毒（ＴＲＳＶ）的新方法。ＨＲＰ标记的间抗兔酶标记抗体ＩｇＧ－ＨＲＰ可以催化Ｈ２Ｏ２氧化联苯胺的反应，其氧化产物在Ｂｒｉｔｔｏｎ－Ｒｏｂｉｎｓｏｎ（ＢＲ）缓冲溶液中在－０．６２Ｖ（ＳＣＥ）左右产生灵敏的线性扫描二阶导数伏安峰，可以测定ＩｇＧ－ＨＲＰ。根据ＩｇＧ－ＨＲＰ与植物病毒及其抗血清的免疫反应     

辣根过氧化物酶的电化学固定化及其对H2O2的生物电催化还原作用

利用电化学固定化方法制备了聚吡咯/辣根过氧化物酶(PP/HRP)膜电极,并研究了其电化学行为。在除氧的磷酸盐缓冲液介质中,PP/HRP电极加速H₂O₂的还原,归因于酶加成物的直接电子传递。探索HRP与电子传递体K₄Fe(CN)₆在聚吡咯(PP)膜中的同时固定化条件及其膜电极的电化学行为,实验证实,K₄Fe(CN)₆在酶膜中的存在使得H₂O₂的还原电位强烈正移,在-0.05V的工作电位下能对H₂O₂进行检测,相应的电极过程可用间接氧化还原催化机理解释。     

辣根过氧化酶在磁性纳米修饰的离子注入电极上的电化学和电催化行为

辣根过氧化酶(HRP)在Co/NH2/ITO离子注入电极上有一对良好的氧化还原峰,峰电位分别为Epc=-0.2 V,Epa=-0.01 V(vsAg/AgCl)。该修饰电极对H2O2具有催化作用,可以用作H2O2的生物传感器,峰电流与H2O2的浓度分别在1.0×10-10~2.0×10-8mol/L和2.0×10-8~1.0×10-7mol/L范围内呈线性关系,线性回归方程分别为Ip(mA)=2.2986+0.06632c(nmol/L)和Ip(mA)=3.5788+7.3053E-4c(nmol/L),相关系数分别为0.9972和0.9688。检出限为1.0×10-10mol/L。     

1,4-二氧六环介质中辣根过氧化物酶电极的性能研究

用交联法制备辣根过氧化物酶(HRP)电极, 在1,4-二氧六环介质中研究其电化学行为。实验表明, 固定化的HRP在有机相中仍保持活性并可与电极进行直接电子传递, 因而能在没有其它电子传递体存在的条件下催化H~2O~2的电化学还原反应。当亚铁氰化物与酶共修饰至电极上之后, 它起着电子传递体的作用, 使HRP电极的性能大为改善。根据不同条件下得到的动力学参数, 讨论了影响酶电极性能的因素。     

辣根过氧化物酶／聚邻苯二胺膜电极的制备与性能研究

辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）／聚邻苯二胺（ＰＰＤ）膜电极由ｐＨ７．０磷酸盐缓冲溶液介质中邻苯二胺在玻碳电极上的电聚合而制得。讨论了ＨＲＰ电化学固定化的过程。所得酶电极呈现生物催化活性,可在没有电子传递体存在的情况下催化Ｈ＿Ｏ＿２还原。该反应发生在聚邻苯二胺氧化还原的电位区,聚合物参与了酶的电子转移过程。分析了旋转ＨＲＰ／ＰＰＤ电极上酶反应的动力学,讨论了动力学常数的影响因素。     

基于二氧化锆和碳纳米管协同作用的过氧化氢生物传感器

过氧化氢作为一种重要的化工产品在纺织行业、化工行业、造纸工业、环保行业、电子行业、食品卫生行业及其他领域得到广泛的应用~([1]).     

TiO2担载在新型载体上的光催化电极

介绍了一种将TiO₂光催化剂担载在新型载体上的光催化电极.新型载体是用炭质材料和聚四氟乙烯制备的,它具有电合成H₂O₂的功能.在电流密度为15mA/cm²时,光催化电极不仅具有高达80%的电合成H₂O₂的电流效率,而且该电极的电位处在0.02V(SCE)左右,使载体表面的TiO₂光催化剂获得了约+0.47V的阳极偏压(相对平带电势),对增加TiO₂光催化反应效率十分有益.在具有新型光催化电极的光反应体系中,水中的有机分子受到来自溶液中大量·OH自由基(H₂O₂被紫外光分解的中间产物)的均相氧化(即光化学氧化),以及来自TiO₂表面光生空穴的复相氧化(即光催化氧化).在光化学氧化和光催化氧化的联合作用下,有机分子的矿物化反应速度显著提高.     

Role of dissolved oxygen reduction in improvement inhibition performance of ascorbic acid during copper corrosion in 0.50 mol/L sulphuric acid

<正>The kinetics of dissolved O_2 reduction and hydrogen evolution reactions on copper surface was studied in naturally aerated and air and O_2-saturated 0.50 mol/L H_2SO_4 solutions using polarization measurements combined with the rotating disc electrode (RDE).The Koutecky-Levich plot indicated that the dissolved O_2 reduction at the copper electrode was an apparent four-electron process.A correlation between the presence of dissolved O_2 and the formation of Cu_2O,confirmed from XRD,was discussed. Ascorbic acid(AA) was tested as a safe inhibitor for copper corrosion in H_2SO_4 solutions at 25℃.Measurements were carried out as a function of dissolved oxygen concentration using Tafel polarization measurements.The addition of AA slowed down the reduction reaction of dissolved O_2 more effectively than the anodic reaction.Dissolved O_2 was found to enhance the inhibition performance of AA.Adsorption via hydrogen bonding was considered.     

临氢还原处理对Al2O3负载的CuO-MOx催化剂的影响

研究了Ｈ２预处理对Ａｌ２Ｏ３负载ＣｕＯ和ＣｕＯ－ＭＯｘ催化剂的作用。考察了Ｈ２处理时间、Ｈ２处理浓度以及多次还原氧化循环对ＣｕＯ系催化剂ＣＯ氧化活性的影响规律,并用原位还原氧化反应技术、ＸＰＳ对Ｈ２预处理的作用进行了研究。结果表明,ＣｕＯ－ＣｏＯ／Ａｌ２Ｏ３和ＣｕＯ－Ｃｅ２Ｏ３／Ａｌ２Ｏ３催化剂受Ｈ２还原处理后ＣＯ氧化活性明显增加,并随Ｈ２处理时间、处理浓度的增加而增强。而且催化剂的ＣＯ氧化活性还     

碳纳米管促进氧化还原蛋白质和酶的直接电子转移

将血红蛋白(Hb)、辣根过氧化物酶(HRP)和葡萄糖氧化酶(GOx)分别固定在经碳纳米管修饰的玻碳电极(CNT/GC)上,制成Hb CNT/GC、HRP CNT/GC和GOx CNT/GC电极.Hb、HRP和GOx在CNT/GC电极表面均能发生有效和稳定的直接电子转移反应,其相应的循环伏安曲线均显示出一对几近对称的氧化还原峰;在60mV/s下,其式量电位E0'分别为-0.343V、-0.319V和-0.456V(vs.SCE,pH6.9),且不随扫速而变;以上三者在CNT/GC电极表面直接电子转移的表观速率常数ks依次为1.25±0.25、2.07±0.56和1.74±0.42s-1;根据式量电位E0'随缓冲溶液pH值的变化关系,确知在CNT/GC电极上,Hb或HRP发生的直接电化学遵从(1e+1H+)电极过程机理,而GOx发生的直接电化学反应则遵从(2e+2H+)机理.此外,固定在CNT/GC电极表面的Hb、HRP和GOx也同时表现出对各自底物的生物电催化活性.由本文制备的碳纳米管修饰电极及其固定生物蛋白质(酶)的方法具有简单、易于操作等优点,并可用于对其它生物氧化还原蛋白质和酶的直接电子转移测试.     

SOD-二茂铁修饰电极的电化学行为

SOD(超氧化物歧化酶)广泛存在于自然界一切生物体内，是生物学前沿的研究课题之一，前人对其进行了深入的研究。本文将SOD和二茂铁用新鲜蛋清这种廉价、易得的膜固定剂代替BSA(牛血清白蛋白)修饰到电极上，研究它们在修饰电极上与过氧化氢的作用，并进一步证明SOD与二茂铁之间是否存在着协同效应。