化学发光酶免疫法检测猪肉中氯丙嗪残留

采用棋盘滴定法确定包被抗原浓度和抗体稀释倍数,通过单因素实验优化了竞争反应时间、磷酸盐缓冲液浓度、甲醇含量、pH值等参数,建立了氯丙嗪的间接竞争化学发光酶免疫检测方法,并考察了方法的特异性、灵敏度和稳定性.结果表明,最佳反应条件为包被抗原浓度为0.05 μg/L;氯丙嗪抗体稀释32000倍;体系缓冲液为含10％甲醇、0.1 mol/L磷酸盐缓冲液(pH 7.0).本方法的IC50为0.12 μg/L;检出限为0.02 μg/L;线性范围0.02～24.78 μg/L;批内和批间相对标准偏差均小于10％.与其它结构类似物没有明显交叉反应.猪肉检测的平均回收率为87.4％～105.6％,与高效液相色谱方法的相关性良好.本方法具有较高的灵敏度和较好的稳定性.     

酶联免疫吸附分析法测定食品中的苏丹红I号

本研究建立了测定食品中苏丹红I号含量的间接竞争酶联免疫分析法。首先对苏丹红I号分子作了的修饰，再与载体蛋白交联制得免疫原和包被抗原，经动物免疫制得抗苏丹红I号的抗体。在包被抗原为100μg／L，抗体为1：100，000倍稀释，标记二抗为1：15000倍稀释的优化条件下，测得检出限为0．12μg／L，IC50值（标准曲线中吸光度抑制至最大吸光度值的50％时所对应的待测物浓度）为0．74μg／L。苏丹红I号在番茄酱和辣椒面中的回收率分别为106％和110％。样品仅需甲醇萃取再用缓冲液简单稀释就可以直接进行ELISA测定。     

呋喃它酮代谢物时间分辨荧光免疫分析法的建立与应用

建立了Eu3+标记的间接竞争时间分辨荧光免疫分析法( Indirect competitive time-resolved fluoroimmu-noassay , ic-TRFIA)用于鱼肉样品中呋喃它酮代谢物AMOZ的检测。通过单因素实验考察了包被抗原浓度、抗体稀释倍数、竞争反应时间等参数对方法灵敏度的影响。结果表明,ic-TRFIA的最佳反应条件为：包被抗原浓度为0.25μg/mL,抗体稀释5×104倍,最佳竞争时间为50 min。在优化的条件下,方法的检出限( LOD, IC10)为0.01 ng/mL,半抑制浓度(IC50)为0.26 ng/mL,线性范围(IC20~IC80)为0.025~2.83 ng/mL,对鱼样中AMOZ回收率在78.0%~86.0%之间,各样品变异系数均小于15%,与HPLC-MS/MS对比检测结果显示相关性良好。本方法灵敏度高、特异性好,能够满足实际样品的检测需求。     

化学发光酶免疫分析测定鱼肉中呋喃它酮代谢物方法研究

建立了呋喃它酮代谢物5-吗啉甲基-3-氨基-2-6唑烷基酮(AMOZ)间接竞争化学发光酶免疫分析(icCLEIA)检测方法,通过单因素实验优化了包被原浓度、抗体稀释倍数、反应缓冲体系及浓度、竞争反应时间等参数,结果表明icCLEIA最佳反应条件为:包被抗原浓度为10 ng/mL,抗体稀释60000倍,最佳竞争时间为50 min,体系缓冲液0.01 mol/L PBS(pH 7.4).在优化的条件下,本方法的线性检测范围为0.026 ～3.52 μg/L,IC50为0.29 μg/L,检出限(LOD,IC10)为0.012 μg/L.对鱼肉样品的平均添加回收率在101.4％～115.5％之间.建立的icCLEIA方法可用于实际样品中AMOZ残留检测.     

酶联免疫吸附分析法测定食品中的苏丹红Ⅰ号

本研究建立了测定食品中苏丹红Ⅰ号含量的间接竞争酶联免疫分析法。首先对苏丹红Ⅰ号分子作了的修饰,再与载体蛋白交联制得免疫原和包被抗原,经动物免疫制得抗苏丹红Ⅰ号的抗体。在包被抗原为100μg/L,抗体为1:100,000倍稀释,标记二抗为1:15000倍稀释的优化条件下,测得检出限为0.12μg/L,IC50值(标准曲线中吸光度抑制至最大吸光度值的50%时所对应的待测物浓度)为0.74μg/L。苏丹红Ⅰ号在番茄酱和辣椒面中的回收率分别为106%和110%。样品仅需甲醇萃取再用缓冲液简单稀释就可以直接进行ELISA测定。     

酶联免疫吸附分析法测定水中双氯芬酸钠

本研究报道一种高灵敏度的测定自来水和表面水中药物残留双氯芬酸钠含量的间接酶联吸附分析法(ELISA)。在包被抗原为20μg/L,抗体为1∶20000倍稀释,辣根过氧化物酶-羊抗兔IgG为1∶20000倍稀释的优化条件下,双氯芬酸钠的检出限(LOD)为0.004μg/L~0.008μg/L,IC50值(标准曲线中吸光度抑制至最大吸光度值的50%时所对应的待测物浓度)为0.03μg/L~0.12μg/L。双氯芬酸钠在自来水中和表面水中的回收率分别为96%和113%。表面水存在一定的基体效应,但仅需要简单过滤稀释就可以消除。     

生物素-亲和素放大酶联免疫吸附法测定双酚A

建立了可用于快速、灵敏地检测双酚A的生物素-亲和素放大酶联免疫吸附测定法,测得最佳实验条件为包被抗原浓度为13.8mg/L、抗体稀释为2.4×105倍,生物素化二抗和酶标亲和素的最佳稀释倍数分别为2000倍和500倍。在优化条件下,方法的线性范围0.2~1000μg/L;最低检出限0.05μg/L。所建立的方法用于食品和唾液中双酚A含量的测定,样品处理简单,结果满意。     

硅胶表面上聚酰胺-胺的合成及其对fe(ⅲ)的吸附

用硅烷偶联剂对硅胶表面进行氨基功能化,利用氨基与丙烯酸甲酯发生的Michael加成反应和乙二胺与酯进行的交换反应在硅胶表面合成了聚酰胺-胺树状大分子(PAMAM-SG). 利用红外光谱对PAMAM-SG的结构进行了表征. 研究了溶液pH值、浓度和温度对PAMAM-SG吸附 Fe(Ⅲ)的影响. 结果表明,溶液的最佳pH值为3.0～6.0;吸附速率随时间的增加而逐渐降低,随温度的升高显著升高;在40 ℃时具有较好的吸附性能,吸附3 h后均达到了完全吸附,吸附量达55.85 mg/g. 吸附容量随浓度的增大而增加直至平衡.各代PAMAM-SG的吸附量依次为2.0G＞1.0G＞1.5G＞0.5G＞0G.     

混合气体中SAPO-34上单个物种的表面浓度简

运用Langmuir等温线方程和理想吸附溶液理论（IAST）两种方法计算了SAPO-34在混合气体中的单个物种表面浓度,并对比了计算值与实验值的吻合程度. 考察了两个二元混合体系,分别为80 ℃的甲醇和二甲醚以及25 ℃的二甲醚和乙烯混合气,发现IAST计算值在实验压力范围内均与实验结果吻合;但是Langmuir理论计算值仅在酸性位覆盖率低于1/3时与实验值吻合较好,随着压力增加严重偏离实验值,而且Langmuir理论不能描述随压力增加低饱和吸附量物种覆盖率降低的现象. 因此,针对包含不同饱和吸附量组分的混合气,Langmuir理论仅适用于描述表面浓度低时的反应动力学,当表面浓度高时应该采用IAST方法.     

吡虫啉单克隆抗体的制备及其间接竞争化学发光酶联免疫分析方法的建立

以吡虫啉原药和3-巯基丙酸为原料,合成了吡虫啉半抗原,通过活泼酯法将其与载体蛋白钥孔血蓝蛋白（KLH）、牛血清白蛋白（BSA）偶联制备得到完全抗原,经免疫Balb/c雌性小鼠并与骨髓瘤细胞融合获得吡虫啉单克隆抗体,建立了用于吡虫啉检测的间接竞争化学发光酶联免疫分析方法（ic-CLEIA）。优化了方法的包被原稀释倍数、抗体稀释倍数、缓冲液种类、缓冲液的pH值、一抗竞争反应时间、酶标二抗稀释倍数等条件,最适条件为：包被原质量浓度62.50 ng/mL（稀释16 000倍）,抗体质量浓度103.12 ng/mL（稀释64 000倍）,缓冲液PBS（pH 7.4）,抗原与抗体竞争反应时间30 min,酶标二抗稀释倍数1∶7 000。结果表明,在最适条件下该方法的检出限（IC10）为0.03 ng/mL,IC50为0.57 ng/mL,线性检测范围（IC20 ~ IC80）为0.083 ~ 3.99 ng/mL。与氯噻啉的交叉反应率为2.2%,与噻虫胺、呋虫胺、啶虫脒、噻虫啉、噻虫嗪5种吡虫啉结构类似物无明显交叉反应。对黄瓜和苹果样品的加标回收率为82.0% ~ 112%,相对标准偏差小于15%。实际样品检测结果与HPLC仪器方法相关性良好（r2 = 0.989）。结果表明,所建立的ic-CLEIA方法具有特异性强、灵敏度高的特点,可用于食品中吡虫啉残留的快速检测。     

Development and validation of a highly sensitive ELISA for the determination of pharmaceutical indomethacin in water samples

The development and validation of a highly sensitive and specific indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of pharmaceutical indomethacin in water samples was presented. The immunogen and coating antigen were prepared by covalently linking indomethacin to bovine serum albumin and ovalbumin by anhydride ester method. Two rabbits were immunized by standard immunization processes and the superior antibody was characterized in terms of sensitivity, specificity, precision, accuracy and stability. Under optimal experimental conditions, the standard curve was constructed in the concentration range of 0.01-10 ng/mL. For 10 consecutive standard curves run in 2 weeks, IC₅₀ value (the concentration of analyte producing 50% of inhibition) were found within 0.10-0.25 ng/mL, and the detection limit (DL) at a signal-to-noise ratio of 3 (S/N = 3) was about 0.01 ng/mL. The antiserum recognized acemetacin, a precursor of indomethacin with 92.3% cross-reactivity, while the cross-reactivity values of antiserum with other tested compounds were very low. From the spiking experiments, the recoveries were found within 98-123%. The ELISA was applied for the determination of indomethacin in different water samples and the results were confirmed by conventional HPLC. The correlation coefficient of 0.988 was obtained, demonstrating a good correlation of ELISA with HPLC.     

An Indirect Competitive Enzyme-linked Immunosorbent Assay for Simultaneous Determination of Florfenicol and Thiamphenicol in Animal Meat and Urine

A high-affinity polyclonal antibody was prepared by immunizing animals with haptens FFD and FFM. Under the optimal combination of coating antigen and antibody, an indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (icELISA) for simultaneous detection of florfenicol and thiamphenicol residues in animal meat and urine samples was developed. The icELISA showed an IC₅₀ value of 1.32 ng mL^?1 for florfenicol and 2.13 ng mL^?1 for thiamphenicol, respectively. The linear ranges were from 0.31 to 5.61 ng mL^?1 with a limit of detection of 0.12 ng mL^?1 for florfenicol, and 0.41 to 11.2 ng mL^?1 with a limit of detection of 0.15 ng mL^?1 for thiamphenicol, respectively. The average recoveries of florfenicol and thiamphenicol in spiked samples ranged from 77.2% to 116.0% with a relative standard deviation of less than 15%. Therefore, this proposed icELISA provided a valid detection method for florfenicol and thiamphenicol residues in animal tissue and urine samples.     

S,S-氰戊菊酯间接竞争酶联免疫吸附分析方法研究

合成了S,S-氰戊菊酯的半抗原S-2-(4-氯苯基)-3-甲基丁酸-α-S-(N-丁酸基)-甲酰氨-(3-苯氧基)苄酯(Efvb).半抗原通过混合酸酐法与卵清蛋白(OVA)偶联作为包被抗原,活泼酯法与牛血清蛋白(BSA)偶联作为免疫抗原.用免疫抗原免疫新西兰大白兔,得到抗S,S-氰戊菊酯多克隆抗体.通过异源分析及检测条件优化,确立了间接竞争酶联免疫分析方法的最佳检测条件为pH 7.4,0.4 mol/L Na+、40％甲醇-PBS溶液,建立了S,S-氰戊菊酯酶联免疫分析方法.方法的抑制中浓度(IC50)值为(3.16±0.01)mg/L;检出限(IC10)为(0.0053±0.0012) mg/L.对甲氰菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯、三氟氯氰菊酯及其代谢物戊菊酸没有明显交叉反应.在自来水、河水和土壤样品中添加S,S-氰戊菊酯,其回收率分别为82.3％～108.2％,83.1％～109.2％和72.0％～91.2％.     

呋喃唑酮代谢物单克隆抗体制备及酶联免疫吸附分析方法

本研究针对呋喃唑酮代谢物(AOZ),设计合成了系列半抗原,进一步通过偶联牛血清白蛋白(BSA)免疫Balb/c小鼠、细胞融合、筛选和亚克隆等过程成功获得了源于新颖半抗原H3的具有高亲和力(亲和力常数6.68× 1010L/mol)和高特异性(与其它功能类似物交叉反应小于0.1％)抗AOZ单克隆抗体.同时,基于设计合成的系列同/异源半抗原/包被抗原,考察了不同结构包被原对ELISA方法灵敏度的影响.另外,采用最佳的特征结构异源包被原H5 -OVA,建立了以对硝基苯甲醛(p-NP)为衍生剂的AOZ间接竞争ELISA(icELISA)和直接竞争ELISA(deELISA)检测方法.结果表明:icELISA模式的AOZ检测IC50为0.503 μg/L,定量检测线性范围(IC20～IG80)为0.06～14.0 μg/L,检出限(IC10)达0.017 μg/L; dcELISA模式的AOZ检测IC50为1.19 μg/L,定量检测线性范围为0.14～23.6 μg/L,检出限为0.056 μg/L.两种方法对AOZ的检测灵敏度和定量线性范围均达到相关检测限量要求,可满足不同需求的实际样品检测.     

Enzyme-linked immunosorbent assays for the insecticide fenitrothion. Influence of hapten conformation and sample matrix on assay performance

This study aimed at developing competitive enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs) for the organophosphorus (OP) insecticide fenitrothion using a monoclonal antibody. The hapten used to obtain the antibody had an ideal structural feature that allowed minimal functional group sacrifice. By using the antibody and a coating antigen, a competitive indirect ELISA was developed, which showed an IC₅₀ of 14 ng mL⁻¹ with a detection limit of 3.0 ng mL⁻¹. A competitive direct ELISA using an enzyme tracer was also developed, which showed an IC₅₀ of 17 ng mL⁻¹ with a detection limit of 1.6 ng mL⁻¹. The antibodies in both assays showed negligible cross-reactivity with the metabolites of fenitrothion and other OP pesticides except with the insecticides parathion-methyl and parathion-ethyl. Recoveries of fenitrothion from fortified rice and lettuce samples were determined and the bias in the recovery values was rationalized by using the standard curves obtained in the matrix extract.     

酶联免疫吸附分析法测定水产品及水中孔雀石绿和无色孔雀石绿

本文报道一种同时测定水产品及水样中孔雀石绿(MG)和无色孔雀石绿(LMG)的间接竞争酶联免疫吸附分析法。对无色孔雀石绿分子进行修饰,使其与载体蛋白交联,得到免疫原和包被抗原,经过多次免疫动物制得抗无色孔雀石绿的多克隆抗体。在优化的实验条件下,IC50值(标准曲线中吸光度抑制至最大吸光度值的50%时所对应的待测物浓度)为0.9~2.6μg/L,检出限为0.02~0.10μg/L,无色孔雀石绿在水样及水产品中的回收率为76.2~95.0%,与孔雀石绿的交叉反应率为95.25%。真实样品测定中,两种食用鱼养殖水样及一个鱼样中未检出孔雀石绿和无色孔雀石绿,但在观赏鱼养殖水样及另一鱼样中检出孔雀石绿和无色孔雀石,浓度分别为1.84μg/L和1.38μg/L。     

噻虫嗪单克隆抗体制备及酶联免疫吸附分析方法的建立

通过化学修饰合成了噻虫嗪人工半抗原,采用碳二亚胺法将该半抗原与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,成功制备了分子结合比合理的免疫原和包被原。经过免疫原免疫6周龄Balb/c小鼠、PEG介导免疫鼠脾细胞和骨髓瘤细胞的融合和阳性杂交瘤细胞的筛选和克隆化,获得了效价高达1∶6.4×105的抗噻虫嗪单克隆抗体,抗体亚类为IgG1型。优化了ELISA实验条件,建立了基于单克隆抗体技术的噻虫嗪残留间接竞争ELISA方法。本方法的抑制中浓度(IC50)为0.0255mg/L,检测灵敏度(IC20)为0.0022mg/L,检出限(IC10)为0.001mg/L。除噻虫胺外,该抗体与其它噻虫嗪结构类似物无交叉反应。以自来水为基质的噻虫嗪添加回收实验显示,0.01,0.5和10.0mg/L添加水平的回收率均大于75%,且各添加水平重复测定8次的相对标准偏差均小于8%,说明所建立的间接竞争ELISA准确度高,重复性好,适合水中噻虫嗪残留的检测。     

细交链孢菌酮酸酶联免疫吸附分析方法研究

采用水合肼和乙醛酸依次对细交链孢菌酮酸(Tenuazonic acid,TeA)进行衍生化,设计合成了含有氮杂共轭双键偶联手臂,可增强免疫效果的半抗原TeAHGA.通过偶联载体蛋白BSA后的免疫原TeAHGABSA免疫新西兰大白兔,成功制备了特异性识别TeA水合肼衍生物TeAH的多克隆抗体;优化确立了ELISA最佳反应条件(TeAH-OVA为异源包被原、包被浓度0.156 μg/L、药物稀释及反应缓冲液为PBS、一抗反应时间40 min、二抗反应时间20 min),建立了TeA间接竞争ELISA(icELISA)检测方法,其抑制中浓度(IC50)为1.61 μg/L,检出限(LOD)为0.08 μg/L,定量线性检测范围为0.19～12.89 μg/L (IC20～IC80).番茄、面粉样品平均添加回收率分别为67.2％～89.8％和74.8％～93.7％.