直接竞争酶联免疫吸附分析法测定氰戊菊酯

采用活性酯法,将氰戊菊酯半抗原N-[2-(4-氯苯基)-3-甲基丁酰基]-4-氨基丁酸与载体蛋白共价偶联合成突出氰戊菊酯分子结构特征的人工抗原和包被原.以人工抗原免疫新西兰白兔制备抗血清,采用(NH4)2SO4分步盐析和DEAE纤维素柱层析法从抗血清中分离纯化对氰戊菊酯具特异性亲和力的抗体,采用活性酯法,以辣根过氧化物酶标记半抗原N-[2-(4-氯苯基)-3-甲基丁酰基]-6-氨基己酸.采用固定抗体、氰戊菊酯和酶标半抗原直接竞争结合固相抗体的模式, 建立对氰戊菊酯具高特异性的酶联免疫吸附分析方法.在优化条件下, 测定氰戊菊酯标样检测的线性浓度范围为0.001～10.0 mg/L; 检出限0.001 mg/L; 相对标准偏差(RSD, n=5)为9.19%.小白菜中分别添加0.10和5.0 mg/kg氰戊菊酯,直接竞争酶联免疫吸附分析法(ELISA)测定,重复6次,回收率分别为83.8%～109%和93.6%～110%; RSD分别为11.7%和7.25%.对实际样品的有效检出限为0.007 mg/L.其它常用拟除虫菊酯类杀虫剂(氯氰菊酯、溴氰菊脂、功夫菊酯、醚菊酯、联苯菊酯)不干扰氰戊菊酯的测定.     

烯效唑酶联免疫吸附分析方法研究

合成了半抗原烯效唑琥珀酸半酯,分别将半抗原与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联制备了免疫抗原和包被抗原,并成功建立了水和土壤中烯效唑残留的酶联免疫吸附分析法。用免疫抗原免疫新西兰大白兔得到多克隆抗体,抗体的效价达到1.02×106。方法的线性范围为0.005～10mg/L,检出限为1.82±0.83μg/L。除烯唑醇有一定的交叉反应外,与大部分三唑类杀菌剂都没有明显的交叉反应。在水和土壤中添加不同浓度的烯效唑,回收率分别在82.40%～105.92%和92.42%～100.08%之间。     

氨基甲酸酯类杀虫剂速灭威酶联免疫吸附分析方法研究

利用间-甲酚和β-丙氨酸合成了速灭威半抗原β-(间-甲基苯氧基羰基)氨基丙酸(HOM)。通过活泼酯法将HOM交联于牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)上;HOM-BSA为免疫原制备了速灭威的兔抗血清,ELISA法测得其效价高达1.28×106,交叉反应测定表明抗体方法特异性识别速灭威。对离子强度等影响因素进行了研究,确定了速灭威酶联免疫吸附分析方法(ELISA)的最佳工作条件,建立了定量测定速灭威的间接竞争ELISA方法,结果表明,该方法检测线性范围为1~10000μg/L;IC50为40.74μg/L;检出限为0.08~0.10μg/L;批内相对标准偏差为2.9%;批间相对标准偏差4.6%。土壤、稻谷和水中的平均添加回收率分别为80%、93.4%和107%。本研究建立了一种快速检测环境和农产品中速灭威残留的有效方法。     

联苯菊酯酶联免疫吸附分析方法研究

建立了定量测定联苯菊酯的间接竞争酶联免疫吸附分析方法(ic-ELISA)。利用联苯菊酯的代谢物联苯醇合成了联苯菊酯的半抗原LBc(2-甲基-3-苯基苄基氧基羰基丙酸)和LBy(2-甲基-3-苯基苯甲酸)。通过碳二亚胺法将LBc交联于牛血清蛋白(BSA)作为免疫抗原(LBc-BSA),通过活泼酯法将LBc和LBy分别交联于卵清蛋白(OVA)作为包被抗原(LBc-OVA和LBy-OVA),LBc-BSA为免疫原制备了联苯菊酯的兔抗血清,间接非竞争酶联免疫吸附分析方法测得其效价达5.12×104。通过同源异源分析,发现异源分析的灵敏度较高,对pH值、离子强度、甲醇含量等影响因素进行了研究,0.3mol/L钠离子强度的磷酸缓冲液(pH7.5)和30%的甲醇确定为联苯菊酯间接竞争酶联免疫吸附分析方法的最佳工作条件,该方法的IC50为2.16±0.32mg/L,检出限(LDL)为0.016±0.002mg/L。对大部分拟除虫菊酯,如三氟氯氰菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、甲氰菊酯和拟除虫菊酯的代谢物3-苯氧基苯甲酸没有明显的交叉反应。     

精吡氟禾草灵酶联免疫吸附分析方法研究

建立了定量测定精吡氟禾草灵的间接竞争酶联免疫吸附分析方法(ic-ELISA)。将精吡氟禾草灵在碱性条件下水解制得半抗原,再将半抗原与蛋白质偶联形成抗原后免疫新西兰大白兔,获得多克隆抗体。对其进行条件优化后,得到了精吡氟禾草灵的ic-ELISA方法的标准曲线。该方法的Ic50为0.553mg/L。检出限为0.0062mg/L。方法对其他芳氧苯氧基丙酸酯类除草剂没有明显交叉反应。精吡氟禾草灵在样品中的回收率为86.80%～103.41%,变异系数为3.96%～12.32%。表明本研究建立的精吡氟禾草灵的ELISA方法符合农药残留分析的要求。     

吡虫啉的酶联免疫吸附分析方法研究

通过碳二亚胺法将吡虫啉交联于牛血清蛋白(BSA)作为免疫抗原,混合酸酐法将吡虫啉交联于卵清蛋白(OVA)作为包被抗原,免疫Balb/c小鼠,采用B细胞杂交瘤技术,经免疫、融合、筛选、克隆,得到抗吡虫啉单克隆抗体,抗体亚类为IgG1,制备的单克隆抗体效价达1×107,确定了吡虫啉酶联免疫吸附分析方法(ELISA)的最佳工作条件,建立了定量测定吡虫啉的间接竞争ELISA方法。本方法的IC50为(15.12±1.28)μg/L,检出限为(1.76±0.02)μg/L。与其它吡虫啉结构类似物无交叉反应。批内相对标准偏差为4.5%;批间相对标准偏差5.1%,饮用水、重庆理工大学地下水和重庆市花溪河地表水平均添加回收率分别为102%,97%和85%。本研究建立了一种快速检测环境水中吡虫啉残留的方法。     

噻虫嗪单克隆抗体制备及酶联免疫吸附分析方法的建立

通过化学修饰合成了噻虫嗪人工半抗原,采用碳二亚胺法将该半抗原与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,成功制备了分子结合比合理的免疫原和包被原。经过免疫原免疫6周龄Balb/c小鼠、PEG介导免疫鼠脾细胞和骨髓瘤细胞的融合和阳性杂交瘤细胞的筛选和克隆化,获得了效价高达1∶6.4×105的抗噻虫嗪单克隆抗体,抗体亚类为IgG1型。优化了ELISA实验条件,建立了基于单克隆抗体技术的噻虫嗪残留间接竞争ELISA方法。本方法的抑制中浓度(IC50)为0.0255mg/L,检测灵敏度(IC20)为0.0022mg/L,检出限(IC10)为0.001mg/L。除噻虫胺外,该抗体与其它噻虫嗪结构类似物无交叉反应。以自来水为基质的噻虫嗪添加回收实验显示,0.01,0.5和10.0mg/L添加水平的回收率均大于75%,且各添加水平重复测定8次的相对标准偏差均小于8%,说明所建立的间接竞争ELISA准确度高,重复性好,适合水中噻虫嗪残留的检测。     

间接竞争酶联免疫分析方法检测青霉素G

本研究介绍了青霉素G残留的危害,并建立了间接竞争酶联免疫分析方法(Enzyme-linked Immunosor-bent Assay,ELISA)检测牛奶类样品中青霉素G的残留量.首先制备出青霉素G的单克隆抗体,在最优实验条件下,青霉素G浓度范围在1～1000 ng·mL-1内,所建立方法的灵敏度(IC50)为17....     

精恶唑禾草灵酶联免疫吸附分析方法研究

建立了测定精恶唑禾草灵的间接竞争酶联免疫吸附分析方法(ic-ELISA),合成了精恶唑禾草灵的半抗原精恶唑禾草酸(hapten).通过碳二亚胺法将精恶唑禾草酸交联于牛血清蛋白(BSA)作为免疫抗原,通过活泼酯法将精恶唑禾草酸交联于卵清蛋白(OVA)作为包被抗原,Hapten-BSA为免疫原制备了精恶唑禾草灵的兔抗血清,间接非竞争酶联免疫吸附分析方法测得其效价达1.024×105.确定了0.3 mol/L Na+强度的磷酸盐缓冲液(pH 7.5)和10%的甲醇为精恶唑禾草灵间接竞争酶联免疫吸附分析方法的最佳工作条件.本方法的IC50为(0.084±0.012)mg/L,检出限(IC10)为(0.0064±0.002)mg/L.对大部分芳氧苯氧基丙酸酯类除草剂,如精喹禾灵、氰氟草酯、高效吡氟甲禾灵没有明显的交叉反应,对于恶唑酰草胺有一定的交叉反应,这与两者的结构有关.     

人工雌激素己烯雌酚酶联免疫分析方法的建立

本实验旨在初步建立人工合成雌激素己烯雌酚（DES）的酶联免疫吸附分析（icELISA）方法。实验首先合成了己烯雌酚的两种半抗原正丁酸己烯雌酚单醚（DES-CP）、乙酸己烯雌酚单醚（DES-CME）。DES-CP与牛血清蛋白（BSA）偶联作为免疫原免疫BALB/c雌性小鼠并进一步制备了DES单克隆抗体，表征了单克隆抗体的亲和力和特异性。在ELISA优化的条件下，方法的抑制中浓度为 IC₅₀＝9.8 ng/mL，检测限 IC₂₀＝2.3 ng/mL，工作浓度范围为 2-42 ng/mL. 抗体与己烷雌酚、双烯雌酚的交叉反应分别为 44%, 27%，与天然雌激素雌二醇的交叉反应小于0.1%. 评估了分析缓冲液中盐离子浓度、pH、有机溶剂含量等因素对分析方法的影响。本分析方法应用于水样的添加实验，回收率符合分析精度要求。HPLC法对实验结果进行了确证，证明了ELISA应用于水样分析的可靠性。     

蓖麻毒素的间接酶联免疫快速检测

建立了间接酶联免疫法快速检测蓖麻毒素的方法。方法的线性范围在0.08~1.25 mg/L之间,相关系数r=0.992 3,检出限为0.02 mg/L。将该法用于检测实际水样、土壤、奶粉和血液蓖麻毒素加标样品,回收率在60%~98%范围。该方法简单、快速、假阳性率低,非常适合蓖麻毒素的快速筛选、定性和半定量分析。     

酶联免疫分析技术研究进展

酶联免疫吸附分析(ELISA)由于检测性能上的优越性使得其在医疗卫生、环境污染控制、食品安全监测等领域得以广泛应用,并且随着其他学科新技术的引进以及ELISA本身关键技术上的突破,ELISA的分析能力较以前有了巨大进步。本文综述了近年来在提高ELISA分析的敏感性、特异性以及稳定性等方面所采取的改进策略和方法,并对其发展方向进行了展望。     

酶联免疫吸附分析法检测花生过敏原的研究

本文利用自己研制的花生过敏原免疫新西兰大耳兔,获得效价为200 000的抗花生过敏原特异性抗体,建立了花生过敏原蛋白的间接竞争酶联免疫(ELISA)检测方法.结果表明:花生抗原在0.01～100 ng/mL范围内具有较好的线性关系,其竞争标准曲线为v=-0.1212x+0.9285(r=0.9819),IC50为34....     

酶联免疫吸附法直接测定血清雌二醇

本合成了３种不同载体蛋白的雌二醇抗原，研究了载体蛋白免疫原性对雌二醇抗体产生的影响。应用酶联免疫吸附分析法测定了血清中雌二醇，浓度范围为５－１６０ｎｇ／ｍｌ（１．８×１０＾－＾８－５．９×１０＾－＾７ｍｏｌ／Ｌ）．ＲＳＤ％小于１０．％，检测限为１．９７ｎｇ／ｍｌ，相当于９８．５ｐｇ／孔（按空白平均值的二倍标准偏差计算）。另外，本还建立了一种用考马斯亮蓝Ｇ－２５０测定半抗原与蛋白结合比的方法，提     

Preparation of Anti-Glycyrrhetinic Acid Monoclonal Antibody for Application in an Indirect Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay

Glycyrrhetinic acid is a major metabolite of glycyrrhizin, which is one of the main components of licorice roots and is considered to be one of the pharmacologically active substances in licorice. A new hybridoma cell line, named G-2A6, was generated by fusing mouse myeloma cells and splenocytes, which were immunized using glycyrrhetinic-acid–keyhole limpet hemocyanin to produce a monoclonal antibody (mAb) against glycyrrhetinic acid. Using the anti-glycyrrhetinic acid mAb, we attempted to develop a simple, rapid, and highly sensitive indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (icELISA). The developed icELISA had a range from 3.91 to 125?ng/mL with low coefficients of variation (less than 5%) and demonstrated a high recovery rate of glycyrrhetinic acid spiked into licorice powder (average?=?101.76%). In addition, the icELISA could determine the glycyrrhetinic acid concentration in glycyrrhetinic-acid-spiked human serum with simple pretreatment, which suggests that the developed ELISA system using anti-glycyrrhetinic acid mAb would prove to be an effective and useful tool for determining glycyrrhetinic acid in various fields such as the analysis of Glycyrrhiza plants and pharmacokinetic studies of glycyrrhetinic acid during the administration of glycyrrhetinic acid, glycyrrhizin, and/or licorice-based medical agents.     

An Indirect Competitive Enzyme-linked Immunosorbent Assay for Simultaneous Determination of Florfenicol and Thiamphenicol in Animal Meat and Urine

A high-affinity polyclonal antibody was prepared by immunizing animals with haptens FFD and FFM. Under the optimal combination of coating antigen and antibody, an indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (icELISA) for simultaneous detection of florfenicol and thiamphenicol residues in animal meat and urine samples was developed. The icELISA showed an IC₅₀ value of 1.32 ng mL^?1 for florfenicol and 2.13 ng mL^?1 for thiamphenicol, respectively. The linear ranges were from 0.31 to 5.61 ng mL^?1 with a limit of detection of 0.12 ng mL^?1 for florfenicol, and 0.41 to 11.2 ng mL^?1 with a limit of detection of 0.15 ng mL^?1 for thiamphenicol, respectively. The average recoveries of florfenicol and thiamphenicol in spiked samples ranged from 77.2% to 116.0% with a relative standard deviation of less than 15%. Therefore, this proposed icELISA provided a valid detection method for florfenicol and thiamphenicol residues in animal tissue and urine samples.