汉坦病毒感染宿主细胞后TRAIL受体的动态变化

两株汉坦病毒(HV 76/118株和H-114株)分别感染人胚肺成纤维细胞(HEPF)后,于感染后不同时间(6,24,96h)提取细胞总RNA,半定量RT-PCR的方法检测肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)的相关受体(TRAIL-R1～TRAIL-R4)在汉坦病毒感染细胞过程中的表达变化,以明确TRAIL受体在汉坦病毒感染细胞过程中的表达情况.结果显示,正常细胞内TRAIL-R4表达最高,其次为TRAIL-R2.汉坦病毒(HV 76/118株和H-114株)感染HEPF 6h时仅TRAIL-R1表达显著上升,TRAIL-R2、TRAIL-R4表达先下降后上升并在96h达到高峰.HV 76/118株感染HEPF细胞6h时TRAIL-R3表达减低并维持在低表达水平,而HV H-114感染后仅24h出现短暂下降.结果表明,TRAIL受体表达在汉坦病毒感染过程中呈动态变化,且不同毒株的变化趋势存在差异.     

信号转导抑制剂对TNF β诱导L929细胞凋亡的研究

本文采用FDA-PI荧光染色,DNA电泳和流式细胞仪等实验手段研究了本实验室自行重组并纯化的人TNF β对L929细胞的细胞毒效应,结果表明TNF β主要是诱导L929细胞以凋亡的形式死亡。实验还采用8种信号转导抑制剂,观察它们对TNF β杀伤L929细胞的影响,以探讨细胞凋亡的信号转导途径。初步研究表明：磷脂酶A2,Ca2+通道、丝氨酸蛋白酶的抑制剂能抑制TNF β对L929细胞的杀伤,而且抑制剂的持续存在能更有效地发挥这一抑制作用;相反地,蛋白激酶C和酪氨酸蛋白激酶的抑制剂可促进凋亡;而环加氧酶、磷脂酰肌醇-3激酶抑制剂则对细胞凋亡不起作用。     

信号转导抑制剂对TNFβ诱导L929细胞调亡的研究

本文采用FDA－PI荧光染色,DNA电泳和流式细胞仪等实验手段研究了本实验自行重组并纯化的人TNFβ对L929细胞的细胞毒效应,结果表明TNFβ主要是诱导L929细胞以调亡的形式死亡。实验还采用8种信号转导抑制剂,观察它们对TNFβ杀伤L9292细胞的影响,以探讨细胞凋亡的信号转导途径。初步研究表明：磷脂酶A2,Ca^2 通道、丝氨酸蛋白酶的抑制能抑制TNFβ对L929细胞的杀伤,而且抑制剂的持续存在能更有效地发挥这一抑制作用;相反地,蛋白激酶C和酪氨酸蛋白激酶的抑制剂可促进凋亡;而环加氧酶、磷脂酰肌醇－3激酶抑制则对细胞凋亡不起作用。     

重组可溶性人TRAIL抑制肿瘤细胞增殖

取健康人外周血得到总RNA，利用RT-PCR获取全长TRAILcDNA，以此为模板，在2对不同的引物下作PCR，得到不同长度的DNA片段，克隆到表达载体pET30a，得到重组质粒pET30a-TRAIL（114～281）和pET30a-TRAIL（120～281），转化E．coli BL21（DE3）pLySs表达并纯化了2种不同长度的可溶性蛋白，分别是TRAIL（114～281）（蛋白A），TRAIL（120～281）（蛋白B），经MTT（四甲基偶氮唑盐）实验表明蛋白B能在6h内抑制不同类型的肿瘤细胞增殖，但其活性明显弱于蛋白A。     

Mst1对结直肠癌SW480细胞增殖与凋亡的影响

MST1是死亡受体信号通路Hippo通路的核心成员,其基因表达异常多见于结直肠癌、肝癌、胃癌等肿瘤。为了探讨MST1表达对人结直肠癌SW480细胞增殖与凋亡的影响及其发生机制,采用PolyJet TM介导pEGFP-N1-Mst1及LipofectamineTM2000介导Mst1特异性-siRNA转染至SW480细胞,分别建立高低表达Mst1的细胞模型。对不同分组的细胞增殖、凋亡及凋亡相关蛋白的表达进行检测。结果显示,Mst1高表达组细胞增殖抑制、凋亡率及凋亡相关蛋白的表达显著增高,反之,Mst1低表达组细胞增殖加快,细胞凋亡率及凋亡相关蛋白的表达显著降低。结果提示,Mst1的靶向调控能较好地控制结直肠癌细胞的增殖与凋亡,可作为人结直肠癌防治的新研究靶点。 更多还原     

用宿主范围扩大的重组AcNPV在家蚕中表达TNF

用宿主范围扩大的核型多角体病毒双穿梭载体Bonpvid与重组转座质粒 pFast-TNF转座，使含有有TNF基因的表达盒插入Bonpvid的Tn7att的接受位点筛选阳性重组E.coli菌落，将提取的阳性重组子DNA分别转染家蚕BmN细胞和Sf-9细胞，获得了能表达TNF的重组病毒，SDS－PAGE和Western blot分析表明，TNF在上述两种细胞中得到表达，以家蚕作为生物反应器，将含有重组病毒的的细胞上清注射感染家蚕4龄幼虫，使TNF在蚕体表达，用BmN细胞中表达的TNF感梁肿瘤细胞，诱导细胞发生了凋亡。     

NGF受体TrkA与TGF-β受体相互作用

神经生长因子(nerve growth factor,NGF)是最早发现的神经营养因子家族成员,它主要通过细胞表面受体酪氨酸蛋白激酶A(tyrosine kinase A,TrkA)来介导复杂的生物学效应。TGF-β(transformation growth factor-β)是一个包含众多成员的细胞因子超家族,它们通过Smad介导的经典信号通路或者不依赖于Smad蛋白的信号通路发挥功能。有报导称,在鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞中,NGF可以激活Smad信号通路,但其具体分子机制依然不清楚。为了进一步了解NGF介导的信号与TGF-β信号之间的串话(crosstalk),采用GST-pulldown和免疫共沉淀-免疫杂交的方法,对NGF受体和TGF-β受体之间的相互作用进行了研究,发现NGF受体TrkA与TGF-β超家族的各种I型受体之间均存在相互作用;同时,TrkA也能与TGF-β超家族的Ⅱ型受体TβRII及ActRII结合,但并未检测到Tr-kA与另一个Ⅱ型受体BMPRII之间的相互作用。     

乳腺癌肿瘤抑制候选基因5基因启动子甲基化水平研究

探讨人正常乳腺细胞株及不同乳腺癌细胞株肿瘤抑制候选基因5启动子甲基化状态,并分析其与雌激素受体、孕激素受体、人类表皮生长因子受体2的表达相关性。运用焦磷酸测序分析4种乳腺癌细胞株和1种人类正常乳腺细胞株中TUSC5基因启动子甲基化状态,以及实时荧光定量逆转录聚合酶反应和Western印迹来检测这些细胞株中TUSC5基因mRNA和蛋白的表达。结果表明：正常人类乳腺细胞株存在TUSC5基因启动子低甲基化,而4种乳腺癌细胞株存在不同程度高甲基化;在4种乳腺癌细胞株中,激素受体及 HER-2表达阴性即三阴性乳腺癌细胞TUSC5基因启动子甲基化水平较非三阴性乳腺癌细胞低;并且乳腺癌的发生可能与TUSC5基因启动子高甲基化有关,乳腺癌TUSC5基因启动子甲基化水平与激素受体、HER-2表达具有一定相关性,其发生的机制需进一步研究探讨。     

对虾白斑综合征病毒VP28免疫后克氏原螯虾血清酶活性及中和活性

利用原核表达的对虾白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)结构蛋白VP28口服免疫克氏原螯虾,以酚氧化酶和溶菌酶指标来监测机体的免疫反应,并检测免疫后的螯虾血清对WSSV的中和能力.结果表明VP28能有效激起机体的免疫反应,酚氧化酶活性始终处于较低的水平,低于GST对照组和健康组,溶菌酶活性则高于GST对照组和健康组.中和实验表明免疫血清具有一定的中和活性,但其保护作用不是通过VP28进入体内与细胞受体结合,来阻止病毒进入,而可能是通过病毒蛋白进入虾体后刺激机体产生或分泌某种中和因子,从而阻止病毒进入细胞或进入细胞后阻止进一步传播.     

含酰肼结构荧光受体的合成及其阴离子识别研究

合成了一种新型的含蒽荧光基团和酰肼结构的阴离子受体,经过核磁共振氢谱(1HNMR)、质谱(MS)、红外光谱(IR)等检测方法证实其结构.用荧光光谱法研究了该阴离子受体与不同阴离子(AcO-,H2PO-4,Cl-,Br-,I-)的相互作用.结果表明:该阴离子受体与AcO-具有很好的选择性识别配位性能,对不同阴离子的络合选择性次序为:AcO->H2PO-4形成1∶1的络4 Cl-,Br-,I-.荧光光谱数据说明该阴离子受体可与AcO-,H2PO-合物.     

新疆金鸡菊多糖体外抗肿瘤活性的研究

采用Tetrazolium bromid(MTT)试验法和光学显微镜法,初步研究了金鸡菊多糖对肿瘤细胞增殖的抑制作用和对细胞形态及细胞凋亡的影响.结果表明:金鸡菊多糖对肝癌细胞BEL-7404、食道癌细胞Eca109和宫颈癌细胞HeLa增殖都有抑制作用,且随着药物(多糖)作用浓度和时间的增加,显示出较好的量效关系.通过Hoechst33258染色观察细胞形态,初步证明金鸡菊多糖能诱导HeLa细胞发生凋亡改变;倒置显微镜下观察发现经金鸡菊多糖处理的癌细胞数目有所减少,细胞较为分散,细胞间连接减少,产生圆缩脱落;乳酸脱氢酶LDH活力分析实验表明金鸡菊多糖诱导Hela细胞的凋亡要有适宜的浓度.     

穿心莲内酯诱导胃癌细胞周期抑制和内源性凋亡

研究了穿心莲内酯诱导胃癌细胞SGC-7901生长抑制、周期阻滞与细胞凋亡的作用机制.用梯度浓度的穿心莲内酯作用于SGC-7901细胞,以MTT法检测药物对细胞的生长抑制情况;以流式细胞技术检测SGC-7901的周期分布状况、胞内的ROS水平以及线粒体膜电位的变化;以Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡的水平;以Western blot检测不同加药浓度处理后的细胞内相关蛋白水平的变化.可知穿心莲内酯对SGC-7901细胞具有时间依赖和浓度依赖的抑制效果,48h的IC50约为24μg·mL-1;并且能够有效抑制G2/M期的周期进展,随后诱发内源性凋亡途径;与此同时,细胞内的ROS水平上升,线粒体膜电位下降;再加入NADPH之后,细胞内的GSH水平有所回升,周期阻滞得到缓解.细胞内的p53、p-CDC2、cleaved caspase-3/9、Bax等上调;bcl-2等水平下调.穿心莲内酯是通过上调胞内ROS水平并使线粒体膜电位崩溃而诱发G2/M期的周期阻滞与内源性凋亡,最终抑制SGC-7901细胞的生长.     

小鼠自身玫瑰花环形成试验条件及带瘤小鼠自身花环形成率的动态变化

本文研究了小鼠淋巴细胞自身玫瑰花环(AR)形成试验的条件,证明淋巴细胞与红细胞的比例以7:10,37℃温育后4℃自然沉降,不需加小牛血清,用自体或同种异体红细胞皆较适宜.对比小鼠的胸腺细胞与脾脏淋巴细胞,两者AR形成率无显著差异.检测小鼠带瘤过程中AR形成率的动态变化,证明早期带瘤鼠AR的数量与正常鼠接近;带瘤中期AR的数量显著降低,带瘤晚期AR的数量与正常值之间仍表现显著差异,但不再继续下降,基本保持中期的水平.文章认为,AR可以作为机体带瘤的一个参考性测定指标.文内讨论了AR的形成细胞作为胸腺后前体细胞,它在带瘤时的动态变化与淋巴细胞不同亚群的比势变化之间存在一定关系.     

重组真核表达载体pEGFP—C1／cecropin—XJ的构建及其在胃癌细胞MGC80—3中的表达

目的构建新疆家蚕抗菌肽（cecropin—XJ）基因的真核表达载体pEGFP—C1／cecropin—XJ（pEGFP—cec），检测其在肿瘤细胞中的表达情况，探讨抗菌肽对肿瘤细胞的作用机制和抗菌肽抑瘤作用效果．方法应用基因重组技术，将新疆家蚕抗菌肽（cecropin—XJ）基因克隆到真核表达载体pEGFP—C1，通过酶切和测序的方法鉴定重组质粒pEGFP—cec的正确性．将pEGFP—cec经脂质体法转染到胃癌细胞MGc80—3，48h后观察EGFP瞬时表达情况；72h后，应用RT—PCR，检测抗菌肽cecropin—XJ基因的表达；96h后，消化细胞，经台盼蓝染色，检测重组质粒pEGFP—cec表达产物对肿瘤细胞的影响．结果细胞转染48h后，荧光显微镜下可观察到EGFP的表达，发出绿色荧光；转染72h后，RT—PCR检测到胞内有抗菌肽cecropin—XJ基因的表达；表达产物能够抑制肿瘤细胞的生长．结论成功构建了真核表达载体pEGFP—cec，并在肿瘤细胞中可见抗菌肽cecropin—XJ和EGFP基因的有效表达以及表达产物具有显著的抗肿瘤活性．为深入开展抗菌肽抑制肿瘤的研究奠定基础．     

人结肠上皮细胞电阻率谱的数学模型分析

采用交流电阻抗方法测量了不同浓度人结肠细胞电阻率的实部和虚部. 通过Cole-Cole数学模型的数值计算, 对人结肠细胞复电阻率频谱和Nyquist图进行曲线拟合, 提取了人结肠细胞的Cole-Cole模型参数, 探讨细胞体积分数对人结肠细胞电学性能的影响. 结果表明: 细胞体积分数对人结肠细胞的电阻率频谱和Nyquist图皆有影响, 与体积分数呈线性关系的参数为电阻率实部低频值( )、电阻率实部高频值( )、电阻率增量( )和电阻率虚部峰值( )等; 特征频率( )与细胞体积分数无关, 来源于细胞膜的界面极化效应, 是人结肠细胞对交流电场响应的标志性参数.     

二十二碳六烯酸与恶性肿瘤

二十二碳六烯酸能抑制恶性肿瘤发生、发展、侵袭和转移，改善机体免疫功能，增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，减少化疗药物剂量，减轻毒副作用，延长肿瘤病人的生存时间．本文从流行病学水平、细胞分子水平、动物水平分层阐述二十二碳六烯酸诱导细胞凋亡、促进脂质过氧化反应及抑制肿瘤微血管生成等，并对二十二碳六烯酸的临床应用前景进行了展望．     

膜结合型TNF－α基因对人胃癌细胞生长的影响

探讨突变的膜结合型ＴＮＦ－α基因对人胃癌细胞生长的影响,方法：用突变的膜结合型ＴＮＦ－α基因作为目的基因,以逆转录病毒为载体将目的基因导入人胃癌细胞ＭＧＣ８０３,经Ｇ４１８筛选得到抗性克隆ＭＧＣ＾Ｔ８０３,结果：Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实目的基因已整合在ＭＧＣ＾Ｔ８０３细胞中,用ＥＬＩＳＡ方法检测ＭＧＣ＾Ｔ８０３细胞表面ＴＮＦ－α表达量明显增高,ＭＧＣ＾Ｔ８０３细胞形态,体外增殖能力无显著改变,裸鼠