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相似文献
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1.
栝楼蛋白(Trichobitacin)是从栝楼(Trichosanthes kirilowiiMaxim, Cucurbitaceae)中新发现的核糖体失活蛋白, 分子量为27,228; pI为9.6。应用基质辅助的激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和快原子轰击质谱法(FAB-MS)分别测定胰蛋白酶酶解栝楼蛋白和天花粉蛋白(Trichosanthin)的混合肽质谱, 通过比较发现了一些分子量相同的肽。由于这两种蛋白质都来源于栝楼块根, 同源性比较强, 所以这些肽序列在两种蛋白质中基本一样; 再结合蛋白N-端自动顺序仪测定栝楼蛋白N-端的结果, 确定了栝楼蛋白N-端38个氨基酸的顺序, 栝楼蛋白经胰蛋白酶酶解后所得肽段用HPLC分离纯化, 再用蛋白质自动顺序仪, DABITC/PITC双偶合手工法和质谱法共确定了栝楼蛋白N-端, C-端等100多个氨基酸残基的序列。  相似文献   

2.
栝楼蛋白 2: 栝楼蛋白部分化学结构的初步测定   总被引:5,自引:0,他引:5  
栝楼蛋白(Trichobitacin)是从栝楼(Trichosanthes kirilowiiMaxim, Cucurbitaceae)中新发现的核糖体失活蛋白, 分子量为27,228; pI为9.6。应用基质辅助的激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和快原子轰击质谱法(FAB-MS)分别测定胰蛋白酶酶解栝楼蛋白和天花粉蛋白(Trichosanthin)的混合肽质谱, 通过比较发现了一些分子量相同的肽。由于这两种蛋白质都来源于栝楼块根, 同源性比较强, 所以这些肽序列在两种蛋白质中基本一样; 再结合蛋白N-端自动顺序仪测定栝楼蛋白N-端的结果, 确定了栝楼蛋白N-端38个氨基酸的顺序, 栝楼蛋白经胰蛋白酶酶解后所得肽段用HPLC分离纯化, 再用蛋白质自动顺序仪, DABITC/PITC双偶合手工法和质谱法共确定了栝楼蛋白N-端, C-端等100多个氨基酸残基的序列。  相似文献   

3.
本文对大熊猫乳酸脱氢酶同工酶M_4的胰蛋白酶水解肽以及大部分糜蛋白酶水解肽和部分溴化氰切割的肽段进行了氨基酸残基的序列测定。根据重叠肽的位置并参考猪乳酸脱氢酶同工酶M亚基的已知序列,初步确定了大熊猫乳酸脱氢酶同工酶M亚基的一级结构,它由331个氨基酸残基组成,两者相比,出现十七个残基的差异,这些差异多数是同类氨基酸间的取代,并且绝大部分发生在与酶的活性中心无关的位置上。  相似文献   

4.
赵晓晓  胡昊  赵雯思  刘萍  谭敏佳 《色谱》2022,40(1):17-27
基于聚合物的蛋白质C端反向富集策略是用于研究蛋白质C端最为广泛的策略之一。目前,基于胰蛋白酶(trypsin)切割精氨酸残基C端(ArgC型酶切)的蛋白C端组学方法对蛋白质C端的鉴定深度仍有待提高。为解决这一问题,该研究对此方法进行了优化和评估:建立了基于“V型”过滤装置的“一锅法”富集流程,避免了副反应的干扰,缩短了样本的制备时间;优化了蛋白水平乙酰化反应条件,最大限度地降低了丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸残基上的副反应,提高了肽段鉴定的可信性;优化了基于固相萃取枪头膜片过滤柱(StageTip柱)的样品分离过程,使C端肽段的鉴定深度增加至原来的4倍。通过以上优化,按照肽段水平错误发现率(FDR)<0.01、离子分数(ion score)≥20,且C端带有乙醇胺修饰的数据筛选标准,从人HEK 293T细胞中共鉴定出696个蛋白质C端。若仅要求肽段水平FDR<0.01,鉴定数目进一步增加到933个,这是基于聚合物富集策略的蛋白质C端组学方法所得的最大数据集之一。探索了胰蛋白酶镜像酶(LysargiNase)切割精氨酸残基N端(ArgN型酶切)与不同肽段N端衍生化修饰组合对蛋白质C端鉴定数目和种类的影响,“LysargiNase酶切+肽段N端乙酰化”新策略在原有“胰蛋白酶酶切+肽段N端二甲基化”策略的基础上将鉴定蛋白质C端的种类提升了47%。综上,该研究通过对基于Arg型酶切的蛋白C端组学方法的优化,提升了C端肽段的鉴定深度,扩大了C端肽段鉴定的覆盖范围。该方法将有望成为系统性表征蛋白质C端的有力工具。  相似文献   

5.
天花粉蛋白一级结构的修正及不同产地天花粉蛋白的研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
胰蛋白酶酶解天花粉蛋白, 用高效液相色谱分离酶解肽段, 用顺序仪测定其有关肽段的顺序。用羧肽酶A, B, Y测定了天花粉蛋白C-端和天花粉蛋白溴化氰降解肽CB1的C-端顺序, 修正了我们1985年测定的天花粉蛋白一级结构, 证明天花粉蛋白由246(7)氨基酸残基所组成, 除C-端微观不均一外, 与Collins结果一致。同时比较了芜湖产天花粉蛋白一级结构与平湖产的天花粉蛋白一级结构, 没有发现两者的一级结构有差别。  相似文献   

6.
分析和比较疾病组及健康对照组的混合样品是血清多肽组生物标记物研究的常用方法,但对健康个体多肽组的差异和共性关注较少.本研究利用纳升液相色谱-高分辨四级杆飞行时间质谱鉴定健康人混合血清样品(20例)的多肽组,阐明血清多肽组的分子量分布等一般特征,进而选取6例个体样品单独分析并与混合样品的分析结果进行比较,说明正常健康样品之间的个体差异和共同成分.结果表明,可鉴定序列的血清多肽组的分子量范围在7000 Da以下,纤维蛋白原α链等蛋白质所属肽段的检出频率最高,肽段在蛋白质水平上分布具有不均一性,排在前10%的蛋白质占据了约50%的总肽段,而后40%的蛋白质只有1条检出肽段.此外,在所有样品中都检测到了来自于8个蛋白质的12个共同肽段,检测到了N端乙酰化、氨基酸氧化、磷酸化、脱氨化和脱水等翻译后修饰和明显的阶梯序列现象.本研究在肽段序列水平分析了血清多肽组的基本特征和个体差异,可为血清多肽组生物标志物研究提供参考.  相似文献   

7.
采用FAB-MS测定α-人心房肽片段的氨基酸序列。通过分析碎片离子的m/z值,可以明确表达各肽段的氨基酸序列。在分子离子区都是[M+H]~+峰,所有片段羰基的α断裂都有肽键断裂和碳碳键断裂两种方式。  相似文献   

8.
利用LTQ Orbitrap XL组合型傅立叶变换高分辨质谱系统分析了乳源蛋白主要组分肽指纹图谱。对南方水牛乳与不同来源的乳清蛋白的氨基酸序列研究结果表明,乳清蛋白经酶解后主要为α-乳白蛋白(α-La)和β-乳球蛋白(β-Lg)组分,乳清蛋白肽质指纹谱的分析显示水牛乳与荷斯坦奶乳清蛋白α-La氨基酸发生变异的比率明显少于山羊奶乳清蛋白α-La,说明荷斯坦奶α-La和水牛乳α-La的差异更小,同源性更强;而水牛乳β-Lg与荷斯坦乳β-Lg氨基酸发生变异的部位比率要多于山羊奶,水牛乳β-Lg与山羊奶同源性更强;乳源酪蛋白酶解后的肽段主要组分为αs1-CN,β-CN,κ-N,通过对水牛乳酪蛋白的氨基酸序列的差异性分析,不同品种的乳源酪蛋白的氨基酸序列明显存在差异。与乳清蛋白相比,奶牛品种差异导致乳蛋白发生氨基酸差异现象更显著,酪蛋白的氨基酸序列对比表明,水牛奶酪蛋白与山羊奶酪蛋白比与乳牛酪蛋白的差异更大。  相似文献   

9.
汪猷  孙小俭  钱诚  钱瑞卿  张伟君  顾天爵 《化学学报》1988,46(11):1125-1133
在初步用计算机辅助的羧肽酶法测定了天花粉蛋白C-端顺序的基础上, 进一步设计了两个计算机程序-DPS程序和CPA程序. 用合成小肽和天然的肽对这两个计算机程序进行模型实验证明, 运用这两个程序能分别满意地从羧肽酶的酶解动力学曲线中获得重要的C-端顺序信息, 并测定了天花粉蛋白分子中未知肽段CB-3的C-端顺序为: -SerAlaSerAlaLeuHserOH, 这一顺序后来已经其他实验结果所证实. 本法不仅使C-端顺序测定延长至七个氨基酸, 而且还基本上解决了多肽或蛋白质含有多种多次重复氨基酸残基的C-端顺序测定.  相似文献   

10.
采用噬菌体展示肽库技术筛选雷公藤内酯醇的靶蛋白,得到了一个肽段,并通过酶联免疫吸附(ELISA)和免疫共沉淀验证了该片段对雷公藤内酯醇的结合特异性。用Basic Local Alignment Search Tool(BLAST)进行序列对比后,找到了77个匹配序列,其中最为匹配的序列是人类类固醇生成因子-1(hSF-1),因此hSF-1可能是雷公藤内酯醇的一个潜在受体。在大肠杆菌中表达纯化了hSF-1的配体结合域(LBD),荧光光谱实验表明雷公藤内酯醇对hSF-1-LBD有荧光淬灭作用、等温滴定量热(ITC)实验表明雷公藤内酯醇与hSF-1-LBD发生焓驱动的特异性结合,表面等离子体共振(SPR)实验表明雷公藤内酯醇可以与hSF-1-LBD剂量依赖性结合,这些都证实了hSF-1与雷公藤内酯醇存在特异性相互作用。  相似文献   

11.
同位素质谱和无机质谱   总被引:2,自引:0,他引:2  
赵墨田 《分析试验室》1997,16(1):92-100
本文是《分析试验室》定期评述中“同位素质谱和无机质谱”的第四篇评述,评述的范围是1994年11月至1996年10月我国气体同位素质谱,热电离同位素质谱,加速器质谱,火花源质谱,电感耦合等离子体质谱,辉光放电质谱,同位素稀释质谱,二次离子质谱,激光共振电离子飞行时间质谱,电子探针,质子探针,激光探针和它们在地学,核科学,环境科学,材料学,计理学,医学和生命科学中的应用,引用文献149篇。  相似文献   

12.
The design of functional interfaces is central to both fundamental and applied research in materials science and energy technology. We introduce a new, broadly applicable technique for the precisely controlled high-throughput preparation of well-defined interfaces containing polyatomic species ranging from small ions to nanocrystals and large protein complexes. The mass-dispersive deposition of ions onto surfaces is achieved using a rotating-wall mass analyzer, a compact device which enables the separation of ions using low voltages and has a theoretically unlimited mass range. We demonstrate an efficient deposition of singly charged Au144(SC4H9)60 ions (33.7 kDa), which opens up exciting opportunities for the structural characterization of nanocrystals and their assemblies using transmission electron microscopy. Our approach also enables the high-throughput deposition of mass-selected ions from multicomponent mixtures, which is of interest to the controlled preparation of surface gradients and rapid screening of molecules in mixtures for a specific property.  相似文献   

13.
Over the last two decades, native mass spectrometry (MS) has emerged as a valuable tool to study intact proteins and noncovalent protein complexes. Studied experimental systems range from small-molecule (drug)–protein interactions, to nanomachineries such as the proteasome and ribosome, to even virus assembly. In native MS, ions attain high m/z values, requiring special mass analyzers for their detection. Depending on the particular mass analyzer used, instrumental mass resolution does often decrease at higher m/z but can still be above a couple of thousand at m/z 5000. However, the mass resolving power obtained on charge states of protein complexes in this m/z region is experimentally found to remain well below the inherent instrument resolution of the mass analyzers employed. Here, we inquire into reasons for this discrepancy and ask how native MS would benefit from higher instrumental mass resolution. To answer this question, we discuss advantages and shortcomings of mass analyzers used to study intact biomolecules and biomolecular complexes in their native state, and we review which other factors determine mass resolving power in native MS analyses. Recent examples from the literature are given to illustrate the current status and limitations.
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Mass defect is associated with the binding energy of the nucleus. It is a fundamental property of the nucleus and the principle behind nuclear energy. Mass defect has also entered into the mass spectrometry terminology with the availability of high resolution mass spectrometry and has found application in mass spectral analysis. In this application, isobaric masses are differentiated and identified by their mass defect. What is the relationship between nuclear mass defect and mass defect used in mass spectral analysis, and are they the same?
Graphical Abstract ?
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19.
Amyloid fibrils are self‐assembled protein structures with important roles in biology (either pathogenic or physiological), and are attracting increasing interest in nanotechnology. However, because of their high aspect ratio and the presence of some polymorphism, that is, the possibility to adopt various structures, their characterization is challenging and basic information such as their mass is unknown. Here we show that charge‐detection mass spectrometry, recently developed for large self‐assembled systems such as viruses, provides such information in a straightforward manner.  相似文献   

20.
Fourier transform ion cyclotron resonance (FTICR) mass spectrometry provides unparalleled mass measurement accuracy and resolving power. However, propagation of the technique into new analytical fields requires continued advances in instrument speed and sensitivity. Here, we describe a substantial redesign of our custom-built 9.4 tesla FTICR mass spectrometer that improves sensitivity, acquisition speed, and provides an optimized platform for future instrumentation development. The instrument was designed around custom vacuum chambers for improved ion optical alignment, minimized distance from the external ion trap to magnetic field center, and high conductance for effective differential pumping. The length of the transfer optics is 30% shorter than the prior system, for reduced time-of-flight mass discrimination and increased ion transmission and trapping efficiency at the ICR cell. The ICR cell, electrical vacuum feedthroughs, and cabling have been improved to reduce the detection circuit capacitance (and improve detection sensitivity) 2-fold. The design simplifies access to the ICR cell, and the modular vacuum flange accommodates new ICR cell technology, including linearized excitation, high surface area detection, and tunable electrostatic trapping potential.  相似文献   

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