雷公藤内酯醇靶蛋白的筛选及其结合的初步验证

采用噬菌体展示肽库技术筛选雷公藤内酯醇的靶蛋白,得到了一个肽段,并通过酶联免疫吸附(ELISA)和免疫共沉淀验证了该片段对雷公藤内酯醇的结合特异性。用Basic Local Alignment Search Tool(BLAST)进行序列对比后,找到了77个匹配序列,其中最为匹配的序列是人类类固醇生成因子-1(hSF-1),因此hSF-1可能是雷公藤内酯醇的一个潜在受体。在大肠杆菌中表达纯化了hSF-1的配体结合域(LBD),荧光光谱实验表明雷公藤内酯醇对hSF-1-LBD有荧光淬灭作用、等温滴定量热(ITC)实验表明雷公藤内酯醇与hSF-1-LBD发生焓驱动的特异性结合,表面等离子体共振(SPR)实验表明雷公藤内酯醇可以与hSF-1-LBD剂量依赖性结合,这些都证实了hSF-1与雷公藤内酯醇存在特异性相互作用。     

钙离子对HRPC结构和电催化活性影响的研究

通过比较辣根过氧化物酶同工酶C(HRPC)中Ca²⁺移除前后的HRPC的光谱和电化学特性,阐明了Ca²⁺的存在对HRPC的重要作用。移除Ca²⁺后HRPC的紫外-可见吸收光谱发生了变化,Soret带的最大特征吸收峰以及α带和β带特征吸收峰均发生不同程度的蓝移和峰强减弱,表明其血红素微环境及结构发生了变化。移除Ca²⁺后的HRPC也可在与聚L型赖氨酸共修饰的石墨电极上表现出对H₂O₂的催化响应,但是天然HRPC比去除Ca²⁺后的HRPC对H₂O₂表现出更低的检测限,更宽的检测范围,更高的灵敏度以及更好的稳定性。实验结果表明,Ca²⁺对HRPC血红素微环境的保持、催化活性和稳定性均有重要的作用。