寡核苷酸在石英金膜表面的固定及其分析性能

将巯基修饰的寡核苷酸探针通过自组装技术固定于以光刻溅射技术制作的石英金片上来制备核酸传感器探头,然后将探头与生物素标记的21个碱基目标寡核苷酸杂交,再利用生物素－亲合素的作用联入亲合素标记的碱性磷酸酯酶,酶催化底物AMPPD发光来达到测定寡核苷酸的目的,测得杂交清洗温度70℃时探头对错配碱基核酸的选择性最佳,探头的测定范围为0．1－100μg/L,最低检测浓度为0．1μg/L,重复测定的相对标准偏差为11．3％。     

化学发光核酸传感器的研制

用Ｎ－乙酰半胱氨酸金表面自组装技术,以及用１－乙基３－（３－二氨基）碳二亚胺盐酸盐（ＥＤＣ）、Ｎ－羟基硫代琥珀酰亚胺（ＮＨＳ）偶联剂把亲合素固定于金表面,再将生物素标记探针固定在亲合素上,来制备核酸传感器探头。然后将探头与目标ＤＮＡ和第二生物素标记探 针进行夹心式杂交,再利用生物素－亲合素的作用联入亲合素标记的碱性磷酸酯酶,用酶催化底物ＡＭＰＰＤ发光来达到测定ＤＮＡ的目的。测定也乙型肝炎病毒（ＨＢ     

新型脱氧核糖核酸光纤生物传感器的研制及其性能评价

研制了一种新型脱氧核糖核酸(DNA)光纤生物传感器,以带尾纤的脉冲半导体激光器为激发光源,结合流动进样系统,能够快速方便地对光纤传感器表面发生的DNA杂交反应进行测定.研究表明:通过链霉亲和素/生物素作用修饰到传感器表面的DNA探针对Dylight 680荧光标记的完全互补DNA有良好的响应,而对非互补的DNA基本没有响应.系统检测灵敏度可达到4.5×10-10 mol/L;线性范围为1×10-9～3×10-8 mol/L.光纤传感器具有良好的再生性能.     

基于双核酸适配体的夹心试纸条法在多菌灵检测中的应用研究

建立了一种胶体金标记核酸适配体的试纸条用于多菌灵的快速检测。将核酸适配体CZ13与AuNPs结合作为信号探针，生物素标记的核酸适配体CZ12固定在链霉亲和素包被膜上作为捕获探针。优化了影响灵敏度的实验条件，如信号探针制备中使用的NaCl和适配体的浓度，检测线上链霉亲和素与生物素标记的核酸适配体的摩尔比等。在最佳实验条件下，多菌灵检测范围为0.5～40μg/mL,检测限为0.45μg/mL。该方法可用于实际样品检测，检测时间为15 min,与果蔬中常见农残不存在交叉反应，方法准确、可靠、使用简便，适合样品的现场快速检测。     

γ-干扰素DNA传感器组装过程的表面等离子体子共振研究

自行设计并组装了一套简便实用的多波长表面等离子体子共振DNA传感装置,用于γ-干扰素DNA的检测。以人工合成γ-干扰素(interferongamma,IFN-γ)寡聚核苷酸片段作为DNA探针,用化学法标记生物素探针,利用生物素-亲和素系统相互作用在传感器表面固定DNA探针,使用该SPR传感装置实时监测了DNA探针的固定过程及DNA杂交反应的进行。用于IFN-γ寡聚核苷酸的检测,测定范围为50-400ng/mL;用于IFN-γ的聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)扩增产物的检测,其测定范围为5-40ng/mL。同时研究了DNA传感器的稳定性、可逆性及干扰情况。实验结果表明,该传感器可成功地用于检测目的DNA。     

链亲和素-磁性微粒的制备及其应用

通过物理吸附和共价作用机制, 制备两种链亲和素-磁性微粒, 即链亲和素-金磁微粒和链亲和素-氨基磁粒, 并对其在不同缓冲液中的稳定性进行研究; 采用酶抑制法测定两种链亲和素-磁性微粒对游离生物素的结合能力; 分别以紫外吸收和固相核酸杂交方法, 测定两种链亲和素-磁性微粒对生物素标记寡核苷酸探针的固定化容量及活性, 并与Dynabeads®M-270 Streptavidin进行比较. 结果表明: 通过物理吸附作用制备的链亲和素-金磁微粒, 适用于核酸杂交与检测常用的STE (Tris-NaCl-EDTA) 缓冲系统, 通过共价作用形成的链亲和素-氨基磁粒, 适用于STE和磷酸盐(PBS)缓冲系统; 1 mg链亲和素-金磁微粒和链亲和素-氨基磁粒对游离生物素的最大结合容量分别为4950和5115 pmol; 对生物素标记寡核苷酸探针(24 mer) 的结合容量分别为2839和2978 pmol, 测定结果均是Dynabeads®M-270 Streptavidin的6~7倍; 与FITC-标记互补寡核苷酸的杂交结果表明, 固定于链亲和素-磁性微粒表面的寡核苷酸探针保持了较好的生物学活性.     

核酸适配体识别-荧光法检测赭曲霉素A

建立了核酸适配体识别-荧光探针技术检测赭曲霉素A(OTA)的新方法.基于微孔板上固定的核酸适配子与目标物质OTA结合时构象发生变化,导致预先与其互补杂交的FAM标记短链DNA解离,引起荧光信号发生变化,据此可实现对OTA的定量检测.当微孔板包被亲和素浓度为25 mg/L、适配子浓度为50 nmol/L,FAM标记互补短...     

基于生物素-亲和素系统的压电免疫传感器检测相思子毒素研究

利用生物素-亲和素系统的放大作用和纳米金质量扩增效应,建立了压电免疫传感器检测相思子毒素的新方法.首先在石英晶体的金电极上依次组装二巯基丙酸、EDC和NHS进行表面修饰,然后通过亲和素固定生物素标记相思子毒素多抗来制备敏感膜,利用纳米金的质量扩增效应设计了一种"毒素-纳米金标记单抗"复合物,成功实现了对相思子毒素的检测,提高了传感器灵敏度和重现性.本传感器对相思子毒素响应的线性范围为0.05～5 mg/L; 回归方程为Δf＝50.81CAbrin+67.11(r=0.9903,n＝10,P<0.0001); 检测灵敏度为50.81 Hz · L/mg.     

生物素-亲和素放大酶联免疫吸附法测定氯胺酮

建立了检测氯胺酮的生物素-亲和素放大酶联免疫吸附测定法(BA-ELISA)。实验最佳测定条件:抗原包被浓度为2.0mg/L、氯胺酮单克隆抗体浓度为10.2mg/L,生物素化羊抗小鼠IgG(Biotin-IgG)和酶标链霉亲和素(SA-HRP)的最佳反应浓度分别为0.29和1.0mg/L。在此优化条件下,方法的线性范围为0.1～1000μg/L;检出限为0.03μg/L。氯胺酮生物样品的加标回收率为94%～102%。与酶标二抗体系ELISA法相比,BA-ELISA具有更高的灵敏度,适于低浓度氯胺酮的检测。     

基于磁性纳米颗粒和金纳米粒子构建DNA电化学生物传感技术

本文构建了一种基于纳米粒子、茎环DNA和丝网印刷电极(SPCE)的电化学生物传感技术用于乳腺癌基因的快速、灵敏检测。该传感技术中,探针DNA的两端分别标记了巯基和生物素,巯基用于与金纳米粒子(AuNPs)作用,生物素用于与磁性纳米颗粒(MNPs)表面修饰的链酶亲和素作用以达到富集的目的,之后利用SPCE进行电化学检测。无目标DNA存在时,双标记DNA保持茎环结构,使得生物素分子很难和MNPs上的亲和素接触。一旦加入目标DNA,茎环结构打开,生物素得以与MNPs上的链霉亲和素发生特异性结合,形成的复合物(MNPs-DNA-AuNPs)通过磁性富集到SPCE表面,从而获得AuNPs的电化学信号。该DNA电化学生物传感对单碱基错配有良好的分辨能力,完全互补DNA的检出限为8.0×10-13 mol/L。     

核酸探针技术

本文对核酸探针技术进行了较全面的综述，介绍了核探针的制备及非放射性标记方法，并对核酸的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转印杂交，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ转印杂交，ＩｎＳｉｔｕ转印杂交及斑点杂交法的原理及应用进行了简明的评述。     

基于SERS技术的核酸检测

表面增强拉曼散射（SERS）技术因其具有超灵敏和非破坏性的检测能力,在生命科学领域已经显示出巨大的应用潜力和研究价值。本文综述了SERS技术在核酸检测方面的最新研究进展,重点介绍了基于SERS技术的非标记型、标记型以及其他一些检测方法的原理及研究成果,并讨论了基于SERS的核酸检测技术有待进一步解决的关键问题。     

Pushing the Limits of Nucleic Acid Function

For many decades it was thought that information storage and information transfer were the main functions of nucleic acids. However, artificial evolution experiments have shown that the functional potential of DNA and RNA is much greater. Here I provide an overview of this technique and highlight recent advances which have increased its potency. I also describe how artificial evolution has been used to identify nucleic acids with extreme functions. These include deoxyribozymes that generate unusual products such as light, tiny motifs made up of fewer than ten nucleotides, ribozymes that catalyze complex reactions such as RNA polymerization, information-rich sequences that encode overlapping ribozymes, motifs that catalyze reactions at rates too fast to be followed by manual pipetting, and functional nucleic acids which are active in extreme conditions. Such motifs highlight the limits of our knowledge and provide clues about as of yet undiscovered functions of DNA and RNA.     

核酸含量的测定

分别用硝酸、高氯酸消化试样与硫酸、过氧化氢水化试样方法对比,采用定磷法测定样品中核酸含量。结果表明,两种试样消化方法不存在显著性差异（Ｐ〈０．０５）。     

Synthesis of Peptoid Nucleic Acid with Thymine as Nucleic Base

The sequence specific bonding of oligonucleotide to RNA or double stranded DNA hasattTacted wide attention as the antisense and antigene strategies for treatment of diseasesat the level of gene expression in medicinal chemistry'. Peptide nucleic acids designedas a chemira of nucleobases and polyamidic backbone bind with high affinity andsequence specifity to both comPlementary RNA and DNA and a number of templatefunctions are inhibited on forming PNAasA and PNA/DNA complex'-'. In the …     

Nucleic Acid Nanostructures and Topology

Knots, polyhedra, and Borromean rings with specific structural and topological features can be made from DNA. Biotechnologists have been exploiting the programmability of DNA intermolecular associations for a quarter of a century. These operations have now been applied successfully to branched DNA species to produce complex target structures (for example, the cube shown in the picture) and a nanomechanical device. The assembly of two-dimensional crystals with programmed topographic characteristics demonstrates the simplicity of translating design into surface structures.     

Nucleic Acid Based Logical Systems

Researchers increasingly visualize a significant role for artificial biochemical logical systems in biological engineering, much like digital logic circuits in electrical engineering. Those logical systems could be utilized as a type of servomechanism to control nanodevices in vitro, monitor chemical reactions in situ, or regulate gene expression in vivo. Nucleic acids (NA), as carriers of genetic information with well‐regulated and predictable structures, are promising materials for the design and engineering of biochemical circuits. A number of logical devices based on nucleic acids (NA) have been designed to handle various processes for technological or biotechnological purposes. This article focuses on the most recent and important developments in NA‐based logical devices and their evolution from in vitro, through cellular, even towards in vivo biological applications.