金属离子抑制剂对酶法测定的影响

基于乳酸脱氢酶(LDH)催化乳酸和氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)的反应,在最佳酶反应条件下,研究了金属离子对酶催化的抑制作用.发现Cu2 对LDH的酶促反应有显著的抑制,抑制常数KQS为9.1靘ol/L,属非竞争性抑制.根据在抑制剂作用下的米氏方程,可以利用酶法对铜离子进行定量测定,通过加入金属离子络合剂乙二胺四乙酸(EDTA)可有效消除一定浓度的Cu2 对LDH酶促反应测定底物的干扰.     

乳酸的液态酶荧光毛细分析法研究

基于乳酸脱氢酶(LDH)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)氧化还原体系,提出了乳酸的液态酶荧光毛细分析方法(LE-FCA).在激发波长350nm、发射波长460nm奈件下,用LE-FCA法对乳酸进行了测定;其线性范围为0.2～1.0 mmol/L,r>0.9932,检出限为0.022 mmol/L,RSD<4.2%.LE-FCA能节省贵重的酶试剂,样品用量仅为18μL;可用于医药、卫生、工业、食品等含乳酸样品的测定.     

酶催化动力学光度法测定镉(Ⅱ)

基于醇脱氢酶(ADH)催化乙醇生成乙醛的反应中镉离子对于酶的抑制作用原理,通过测定还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)吸光度的变化率得出其酶促反应速度,对应于镉离子浓度而制得标准曲线.检出限为0.02μmol/L.讨论了pH、温度和共存离子对测定的影响.本方法具有快速、灵敏、干扰少的优点.     

水中汞量的酶法测定

提出用酶催化动力学光度法测定汞，是基于乳酸脱氢酶催化丙酮酸和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的反应，汞离子对于酶催化的抑制作用原理，通过测定还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸吸光度的变化率得出其酶促反应速度，对应于汞而制得标准曲线。检出限为0、18μg／L。讨论了pH值和共存离子对测定的影响。     

酶催化动力学光度法测定锌

近年来酶法在分析测定方面的研究非常活跃,酶法测定锌已有报道,基本为终点测定法。本文中的研究是基于LDH催化下列反应：丙酮酸＋NADH=乳酸＋NAD^＋（氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸）,锌离子的存在对酶催化反应具有抑制作用,反应速度的变化率与锌离子的浓度呈相关关系,从而可测定试样中的锌离子含量。本方法不需要底物转变完全,与终点测定法相比,可减少测定时间并节省酶量。     

酶法测定乳酸

利用乳酸在氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）存在的条件下,由乳酸脱氢酶（L-LDH）催化生成丙酮酸和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）。通过测定NADH吸光度的变化率可得出乳酸的酶促反应速度,并制得标准曲线。样品中的乳酸可由标准曲线求得。讨论了试剂用量、pH、温度和共存离子对测定的影响。     

稀土离子(La3+, Gd3+, Yb3+)对线粒体产生活性氧的影响

研究了稀土离子对分离的线粒体产生活性氧(ROS)的影响. 采用荧光光度法跟踪线粒体内H2O2生成的动力学, 发现三种稀土离子(La3+, Gd3+, Yb3+)均能降低线粒体H2O2的生成; 用黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系进一步证明稀土对超氧阴离子(·O-2)存在清除作用, 而对H2O2无清除作用; 测定了稀土对线粒体ROS代谢酶(谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶)的活性影响. 结果表明, 三种稀土离子对线粒体谷胱甘肽过氧化物酶的活性基本没有影响, 而Gd3+和Yb3+稀土离子能明显抑制线粒体超氧化物歧化酶的活性.     

新型乳酸固定化酶荧光毛细生物传感器

对长45 mm、内径0.9 mm的医用毛细管进行γ-氨丙基三乙氧基硅烷氨基化和戊二醛醛基化后,再将乳酸脱氢酶(LDH)的氨基与戊二醛的醛基结合,使其固定在毛细管内壁,构成一种新型固定化酶乳酸荧光毛细生物传感器(IE-LFCBS),实现了对乳酸的微量、快速测定.IE-LFCBS吸入辅酶Ⅰ与乳酸的混合液,在固定化酶催化下使乳酸与辅酶Ⅰ反应,生成荧光物质还原型辅酶Ⅰ;激发波长353 nm、发射波长466 nm.适用于IE-LFCBS的优化条件为:辅酶Ⅰ浓度4 mmol/L、用于固定化的LDH浓度60 kU/L、反应时间15 min、反应温度38 ℃、测定范围为1.0～5.0 mmol/L、回收率95%～98%,IE-LFCBS的相对标准偏差为RSD<1.5%(n=11),检出限为0.45 mmol/L.IE-LFCBS的试液用量极少(18 μL),并能重复使用,可望用于发酵食品、药品、血液标本等各类样品中乳酸的快速检测.     

锰(Ⅲ)离子与羧酸或α-羟基羧酸体系引发丙烯酰胺聚合

锰(Ⅲ)离子可以引发烯类单体自由基聚合。羧酸,α-羟基羧酸对丙烯酰胺聚合有促进作用,其活性顺序为羟基多元羧酸(柠檬酸)>羟基羧酸(乳酸)>羧酸(正丁酸)。测定了在较高酸性([H~+]=3.0M)的硫酸水溶液中,单独Mn~(3+),Nn~(3+)-乙醇酸,Mn~(3+)-乳酸引发丙烯酰胺聚合的活化能与动力学方程。     

脂肪酶催化乳酸与乙醇合成乳酸乙酯的反应动力学

对脂肪酶催化乳酸与乙醇合成乳酸乙酯反应的动力学进行了研究,根据乒乓机制和双底物抑制的特性建立了反应速率方程.反应时间常数(tR)和扩散时间常数(tD)的计算结果表明,酯化反应速率未受到明显的限制.反应速率方程可以很好地预测实验结果,由非线性拟合得到的动力学参数中,乳酸(A)和乙醇(B)的抑制常数分别为KiA=10.7mmol/L和KiB=275.0mmol/L.这说明乳酸作为短链极性脂肪酸,对酶的失活作用远大于乙醇.乳酸在微液层中聚集并产生了使酶失活的低pH值环境,同时在酯化反应中存在竞争性抑制作用.     

含离子液体［bmim］Cl的反应介质中马肝醇脱氢酶的催化特性

 研究了马肝醇脱氢酶(HLADH)在含离子液体1-丁基-3-甲基咪唑氯酸盐(［bmim］Cl)的反应介质中的催化特性. 以乙醇为底物时,该酶在［bmim］Cl含量≤0.15 g/ml的体系中的活力高于在不含离子液体的体系中的活力; 离子液体浓度过高(＞0.15 g/ml)对酶活性有明显的抑制作用. 反应温度和pH对含离子液体的反应介质中酶活力的影响规律与不含离子液体时的规律相似. 与不含离子液体的反应介质相比, HLADH在含0.05 g/ml ［bmim］Cl的体系中催化乙醇氧化的活化能下降,酶反应的Vmax和Km均升高. 反应体系中低浓度(≤0.1 g/ml)的离子液体能提高酶的热稳定性,但高浓度(＞0.1 g/ml)的离子液体可降低酶的热稳定性. 紫外二阶导数光谱显示,在含不同浓度离子液体的反应介质中酶分子构象的变化有较大的差异.     

离子排斥色谱法同时测定果汁中11种有机酸

 用离子排斥色谱法实现了对果汁中 11种有机酸 (草酸、柠檬酸、酒石酸、苹果酸、抗坏血酸、乳酸、琥珀酸、甲酸、乙酸、戊二酸、富马酸 )的分离测定。以 17mmol/L硫酸为淋洗液 ,样品在ICE ION 30 0离子排斥柱上分离后 ,用紫外检测器在 2 10nm处测定其中的有机酸。各组分质量浓度测定的相对标准偏差在 1.5 %～ 9.8% (n =10 )。     

高效液相色谱法测定改性聚乳酸制品中乳酸的含量北大核心CSCD

聚乳酸(PLA)是一种新型可生物降解的高分子材料,具有良好的生物降解性、机械性和成型加工性,成为应用较为广泛的生物降解高分子材料之一[1-2]。但是PLA热稳定性较差,脆性严重且价格昂贵,通常需要进一步改性才能应用到实际生活中[3]。乳酸的检测方法主要有离子色谱法[4-5]、气相色谱法[6]等,但是离子色谱法只适用于乳酸单体残留量的测定,而PLA水解液中阴离子种类较为复杂,离子色谱法很难将其分离和测定;此外乳酸在气相色谱仪气化室中易发生分解,在用气相色谱法测定时,一般需要先将乳酸转化为酯类衍生物[7-8],操作较为复杂。     

基于抑制作用的新型葡萄糖氧化酶传感器测定环境污染物汞离子的研究

本文提出了一种基于抑制作用的新型葡萄糖氧化酶生物传感器用于测定环境样品中二价汞离子。其工作原理是汞离子对电极上葡萄糖氧化酶分子的抑制作用引起响应电流的下降而产生一可测定信号。详细探讨了电极的氧化还原反应机理及测试性能。该传感器对汞离子的检出限是0．49ng／mL,抑制率和汞离子浓度的自然对数值在0．49～783．21ng／mL和783．21ng／mL-25．55μg／mL范围内分别呈良好的线性关系。酶电极在抑制后可以完全恢复活性。考察了铅(Ⅱ)、铜(Ⅱ)、镉(Ⅱ)和铬(Ⅲ)离子对汞离子测定的干扰。测定了汞离子在土壤浸出液中的回收率,结果良好。     

离子色谱法测定果汁中乳酸、富马酸、柠檬酸的含量

建立离子色谱测定果汁中的乳酸、富马酸、柠檬酸的分析方法。利用Onguard II RP柱进行预处理除去疏水性物质,使用IonPac AS19(250 mm×4 mm)色谱柱,IonPac AG19(250 mm×4 mm)保护柱,以氢氧化钾溶液梯度淋洗,采用自循环抑制电导检测的方法对苹果汁样品中的乳酸、富马酸、柠檬酸含量进行检测。该方法能够准确地测定果汁中乳酸、富马酸、柠檬酸的含量,线性方程的相关系数在0.999以上,样品的加标回收率为90.7%～102.8%,测定结果的相对标准偏差为0.41%～1.43%(n=6),样品的定量限分别为0.5,0.2,0.3 mg/L。该法操作简单,环境友好,灵敏度高,测定结果准确可靠,能满足果汁中有机酸含量的测定要求。     

离子色谱法同时测定牛瘤胃液中乳酸和挥发性脂肪酸含量

提出了同时测定牛瘤胃液中乳酸和挥发脂肪酸的离子色谱分析法.试验用IonPac RAS11-HC(4 mm×250 mm)分析柱带IonPac R AG11-HC(4 mm×50 mm)保护柱,电导检测器,抑制器类型为ASRS.以不同浓度的氢氧化钠溶液为流动相,梯度洗脱.该方法对乳酸、乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸的线性范围分别为0.36～36.0,0.10～50.0,0.11～23.0,0.05～8.7,0.15～36.0,0.11～19.0,0.06～23.5 mg·L-1,方法检出限(3S/N)依次为9.87,3.60,4.15,2.46,4.71,3.19,6.93μg·L-1.实样分析结果的相对标准偏差(n=7)在1.73%～5.66%之间.     

基于丙酮酸/还原型辅酶I/乳酸脱氢酶/氧化型辅酶I/乳酸正逆反应同时测定丙酮酸/乳酸的酶荧光毛细管分析

利用丙酮酸(PA)/还原型辅酶I(NADH)/乳酸脱氢酶(LDH)/氧化型辅酶I(NAD+)/乳酸(LA)荧光反应体系的正逆反应,建立了一种可直接用于临床检验、能同时测定血清中微量PA/LA的酶荧光毛细管分析法.本方法可在常规荧光光度计上,用普通玻璃毛细管同时实现了PA/LA的高灵敏分析,每次分析试剂和样品的用量仅9 ...     

稀土离子对烟草RuBPcase的抑制作用

采用硫酸铵沉淀和SephadexG-200柱层析分离纯化出烟草RuBPcase(1,5-二磷酸核酮糖羧化酶),并测定了稀土元素离子对酶活性抑制效果.在RuBPcase催化CO2固定的反应体系中,随着稀土元素离子浓度的增加,该酶对Mg2+的最大反应速度(vmax)不变,米氏常数(km)变大,并带有一个抑制剂常数(ki)的典型竞争性抑制.La3+,Ce3+,Gd3+的ki分别为26.3,34.3,200(mol*L-1,3种离子与Mg2+对RuBPcase竞争能力的大小顺序为La3+＞Ce3+Gd3+.     

酶解-离子色谱法测定烟草中的果胶

建立了一种测定烟草中果胶含量的酶解-离子色谱法,并对酶解条件进行了优化.即样品经快速溶剂萃取仪用80%乙醇除糖后,在47℃、pH4条件下用果胶酶酶解2 h,用离子色谱测定酶解液中的半乳糖醛酸含量.该法的线性相关系数为0.999 3,回收率98.3%～100.8%,RSD为3.43%.     

乳酸钴配合物与牛血清蛋白相互作用的研究

合成和表征了系列乳酸钴配合物,测定二水二乳酸钴配合物的结构,配合物中乳酸的羟基和羧基配位键平均键长分别为0.206 0(2)nm和0.206 8(2)nm。当[Co(Hlact)2(H2O)2](2)或[Co(Hlact)2(phen)].2H2O(4)配合物与牛血清白蛋白(BSA=Bovine SerumAlbumin)相互作用后,红外光谱显示乳酸或邻菲咯啉的特征吸收消失,钴离子与BSA出现新的配位,初步推定乳酸或邻菲咯啉配体被BSA中的强配体所取代。