预防伤寒及霍乱二价口服疫苗的构建

将含有产生无毒的霍乱毒素B亚单位基因之重组质粒pMM-CTB,转移至口服安全、有效的伤寒疫苗林Ty21a中。获得的Ty21a(pMM-CTB)这个菌株,能稳定地产生CT-B亚单位,分泌至胞外,具有与霍乱弧菌产生的CT-B亚单位有相同的抗原性,且它仍保持了伤寒疫苗株Ty21a的抗原性,对半乳糖的敏感性及在体内存留时间的生物特性。应用它与杀死的霍乱弧菌全细胞构建成二价疫苗,具有对伤寒和霍乱很好的免疫原性。     

志贺氏毒素B亚单位在大肠杆菌细胞表面表达的研究

本文通过寡核苷酸引导的定向诱变,将志贺氏毒素B亚单位的三个部分(Stx17B,Stx27B和StxB)融合至暴露在细菌表面的LamB蛋白的第153和154氨基酸之间的BamHⅠ位点。免疫印迹指出,B亚单位的三个部分作为与LamB的融合蛋白能在大肠杆菌中表达。间接免疫荧光和免疫电子显微镜分析表明:融合蛋白LamB/Stx17B和LamB/Stx27B能表达在大肠杆菌细胞表面,而融合蛋白LamB/StxB则不能在大肠杆菌表面表达,它聚集在细胞间质部分,对宿主细胞有毒性。将保护性抗原表达于细菌表面,这为构建预防志贺氏痢疾杆菌的菌苗后选株提供了一个新的途径。     

重组质粒对大肠杆菌HB101生长影响的微量热研究

用微量热方法研究了嗜麦芽假单胞菌AT18, 受体菌大肠杆菌HB101, mel基因工程菌——大肠杆菌HB101/pWSY8和携带克隆载体pUC18质粒的大肠杆菌HB101等的生长代谢过程. 实验结果从热化学和热动力学上阐明了细菌的生长速率常数与其所含质粒的大小呈负相关. 探讨了低温处理对含不同质粒大肠杆菌生长的影响, 发现低温处理对工程菌生长影响最大.     

产甘油基因工程菌的构建

利用途径工程的基本原理,在大肠杆菌中构建一条产甘油的新代谢途径。从酿酒酵母Sacchdromyces cerevisiae INVSc1菌株总DNA克隆3-磷酸甘油脱氢酶基因(gpdl)和3-磷酸甘油酯酶基因(hot2),构建由两个杂合启动子trc启动基因的双表达盒的重组质粒pGEM-Cgpd1-Chor2,后者转入E．coli JM109菌株,构建的重组菌株就具有一条直接将葡萄糖转化为甘油的新代谢途径,将该重组菌株以葡萄糖为底物进行摇瓶发酵,甘油产率为1．18g／L。该研究结果为进一步构建生产1,3-丙二醇工程菌打下了基础。     

霍乱弧菌无毒肠毒素A~-B~+基因在大肠杆菌的表达

应用DNA体外重组技术,成功地将霍乱弧菌毒素(CT)基因,在大肠杆菌中改建成CTA~-B~+基因克隆。组构的pMM-CTB重组质粒,在大肠杆菌中能高表达CTB亚单位,并能分泌到细胞外。     

DEPTO R蛋白的表达纯化条件及与mTOR-TRD2亚结构域的相互作用

测试并优化了哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)的FAT结构域及其亚结构域TRD2和DEPTOR蛋白在大肠杆菌中的表达条件,获得了TRD2和DEPTOR蛋白成功表达并大量纯化的条件.结果表明,麦芽糖结合蛋白(MBP)融合m TOR的TRD2亚结构域可以在菌株BL21(DE3)中大量表达.DEPTOR-G270P突变比野生型DEPTOR在BL21(DE3)中的表达量提高约5倍,且该突变并不影响DEPTOR自身的二级结构.通过凝胶过滤实验发现,m TOR的TRD2亚结构域和DEPTOR之间可能存在相互作用.     

苏云金芽胞杆菌含不同质粒和不同基因工程菌的生长代谢

用微量热法研究了世界上产量最大的微生物杀中心剂苏云芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis)野生菌株YBT－1463,无晶体突变株BMB160和无质粒、无晶体突变株BMB171以及含量不同杀虫蛋白基因工程菌BMB－304－171－A和BMB－304－171－B的生长代谢动力学变化。结果是,含有14个质粒的野生菌株YBT－1463的生长代谢热比无晶体含6个质粒的变株BMB160和无晶体、无质粒突变株BMB171低;将杀虫晶体蛋白基因vryⅠAc和cryⅠC分别转入受体菌BMB171中后,两个工程菌BMB－303－171－A和BMB－304－171－B生长代谢热与受体菌BMB171相比也吸显降低;表明质粒形成一个耗能过程,当受体菌BMB171转入杀虫晶体蛋白基因后,工菌比受茶杯菌的放热大幅度减少,表明基因编码杀虫晶体蛋白也是一个耗能过程,但是含基因cryⅠAc和cryⅠC工程菌BMB－304－171－A和BMB－304－171－B之间的生长代谢没有明显差异。首次报道这些热动力学变化,对杀虫剂发酵生产过程的代谢控有重要指导意义。     

苏云金芽胞杆菌含不同质粒和不同基因工程菌的生长代谢

用微量热法研究了世界上产量最大的微生物杀中心剂苏云芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis)野生菌株YBT－1463,无晶体突变株BMB160和无质粒、无晶体突变株BMB171以及含量不同杀虫蛋白基因工程菌BMB－304－171－A和BMB－304－171－B的生长代谢动力学变化。结果是,含有14个质粒的野生菌株YBT－1463的生长代谢热比无晶体含6个质粒的变株BMB160和无晶体、无质粒突变株BMB171低;将杀虫晶体蛋白基因vryⅠAc和cryⅠC分别转入受体菌BMB171中后,两个工程菌BMB－303－171－A和BMB－304－171－B生长代谢热与受体菌BMB171相比也吸显降低;表明质粒形成一个耗能过程,当受体菌BMB171转入杀虫晶体蛋白基因后,工菌比受茶杯菌的放热大幅度减少,表明基因编码杀虫晶体蛋白也是一个耗能过程,但是含基因cryⅠAc和cryⅠC工程菌BMB－304－171－A和BMB－304－171－B之间的生长代谢没有明显差异。首次报道这些热动力学变化,对杀虫剂发酵生产过程的代谢控有重要指导意义。     

磺胺在碳纳米管修饰玻碳电极上的电化学行为

磺胺类抗菌药是一类允许在饲料中添加的兽用广谱抗菌药.它被广泛用于治疗家畜呼吸道、消化道细菌感染、猪萎缩性鼻炎、禽霍乱、伤寒等疾病[1].停药期用药或用药不当将导致动物食品中抗菌药残留超标.人们长期食用含磺胺类抗菌药残留超标的动物产品,将导致肝肾损伤和体内耐药菌株产生,危害到人们的身体健康和疾病治疗.     

通过保罗酸的加成提高保罗霉素的稳定性

保罗霉素(paulomycin)是由链霉菌产生的糖苷类抗生素,不仅对革兰氏阳性细菌有很好的抗菌活性,也具有良好的抗肿瘤活性.其结构中保罗酸基团是造成该类化合物不稳定的主要原因之一.本研究旨在提高保罗霉素的稳定性.通过向保罗霉素产生菌的发酵液中添加小分子硫醇类化合物N-乙酰半胱胺(SNAC),经发酵分离及结构解析,获得了新结构的保罗霉素衍生物palsimycins A、B、C、D.抗菌活性实验表明,palsimycin A、palsimycin B对测试菌株的最小抑菌浓度(MIC)与paulomycin A、paulomycin B的MIC值处于同一水平.酸碱稳定性实验揭示,相同条件下,palsimycins A、B、C、D均比paulomycin A、paulomycin B更加稳定.因此,在不影响抗菌活性的前提下,本研究通过保罗酸部位的加成,提高了保罗霉素的稳定性,为该类化合物的进一步应用研究奠定了基础.     

固定化烟草核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶的解离及重组作用

本文将共价偶联于CNBr活化的Sepharose 4B上的烟草核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶用不同浓度尿素处理后,发现2—2.5mol/L尿素可将小亚单位解离下来而大亚单位仍偶联在载体上。3mol/L以上尿素可将大亚单位8聚体,L_8进一步解离为单体。因此,酶是通过大亚单位上的ε-氨基与载体相偶联的。小亚单位的解离量与酶活性的下降呈线性相关。将解离酶的尿素浓度稀释至0.5mol/L,解离的小亚单位几乎全部结合到残缺小亚单位的固相酶上,酶的活性也接近全部恢复。重组小亚单位量与酶活性增加亦呈线性相关。结果表明:除大亚单位外,小亚单位对维持酶的活性也有重要的作用。     

aprE基因表达的分子生物学和微量热法分析

利用分子生物学方法(SDS-PAGE和酶活检测法)未检测到所克隆的aprE基因在大肠杆菌中的表达产物(碱性蛋白酶), 而微量热法检测结果发现: 重组菌株的生长代谢产热曲线之间存在明显的差异. 根据这些差异, 分析了该基因的上、下游调控序列对该基因在大肠杆菌中表达的重要作用, 从而进一步对该基因进行了亚克隆, 得到了生物学方法可检测到的表达产物. 由此推测, 微量热技术有可能为检测外源基因表达及其调控, 以及为指导进一步基因工程操作提供一种新的快速灵敏的技术和方法.     

来源于Alcaligenes A-6的D-氨基酰化酶基因的合成与融合表达

将来源于Alcaligenes A-6的D-氨基酰化酶基因用大肠杆菌中的丰沛密码子替换, 利用化学和基于聚合酶链反应(PCR)技术的酶促方法进行基因全合成, 利用pET-32a构建重组表达载体pET-dan, 转化进E.coil BL21(DE3)中进行融合表达. 经SDS-PAGE电泳、 Western-blot检测和活性测定发现, D-ANase可在大肠杆菌中高效表达, 目的蛋白可达到菌体总蛋白的69.2%, 密码子优化后基因构建的工程菌发酵活性为96 U/mL, 重组蛋白经超声细胞破碎及Ni²⁺柱亲和层析纯化, 比活可达1692.3 U/mg, 纯度可达95%以上.     

基于甲基葡萄糖醛酸钠诱导下大肠杆菌的光度法快速检测研究

建立了一种快速检测大肠杆菌的光度分析法。在脱氧胆酸钠(DOC)培养基中,大肠杆菌被甲基葡萄糖醛酸钠(m ethyl-β-D-glucuron ide sod ium,M etG lu)诱导,在细菌体内产生特异性葡萄糖醛酸酶(-βD-glucu-ron idase)。通过膜渗透剂Polymyxin B nonapeptide hydrochloride(PBN)和Lysozym e对大肠杆菌细胞膜的作用,葡萄糖醛酸酶从大肠杆菌细胞中释放出来。葡萄糖醛酸酶能够催化分解底物p-N itrophenyl--βD-glucu-ron ide(PNPG)而产生对硝基酚,而对硝基酚的量与溶液中大肠杆菌的浓度成正比。对硝基酚对波长为400nm的可见光有最大吸收。根据吸光度值的大小与对硝基酚的浓度成很好的线性关系,通过测定400 nm处对硝基酚的吸光度值,实现了对大肠杆菌的快速定量检测。     

具有优异热稳定性的磷修饰氧化钛及其对水中污染物的降解

通过水热法制得磷修饰氧化钛,它在亚甲基蓝和对氯苯酚的降解以及消除大肠杆菌的实验中都表现出高于纯氧化钛的优异活性,甚至优于商品化催化剂P25.在捕获剂中降解亚甲基蓝的实验证实羟基自由基是最主要的活性氧物种,并且磷修饰氧化钛在光照下拥有较强的产生羟基自由基的能力,同时,磷修饰氧化钛具有非常高的热稳定性,直到950℃才会发生...     

兽疫链球菌变异株产生的透明质酸的纯化及表征

用N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(NTG)对兽疫链球菌进行诱变,获得高产菌株.经过对该菌株的发酵培养,将产生的多糖经Savage法、季铵复合物沉淀法、DEAE-纤维素(DE52)离子交换层析法及SephadexG-75凝胶过滤法分离纯化.纯化的多糖结构经化学组成分析、核磁共振波谱、红外光谱及圆二色谱鉴定,证明了诱变得到的高产菌株(StreptococcuszooepidemicusJ18)再经发酵,得到的多糖为透明质酸.通过刚果红实验证明了透明质酸的构象为单股螺旋结构,其平均分子量约为1.16×10⁶.     

微量热法研究载银B2 O3 -SiO2 -Na2 O玻璃对大肠杆菌的抑制作用

采用微量热法研究了载银B20,-SiO：-N％0玻璃对大肠杆菌作用的热功率输出曲线,得到了大肠杆菌在不同的抗菌剂浓度下的生长速率常数k,抑制率I等参数,定量说明了载银B2O3-SiO2-Na2O玻璃对大肠杆菌有很强的抑制作用。     

磷酸银复合材料在催化及抗菌方面的研究进展

综述了磷酸银复合材料在化学及相关领域的研究,主要集中在光催化降解污染物、环境药物、杀菌消毒和光解水等方面。光催化在降解污染物方面,尤其是在降解有机染料方面表现突出,如罗丹明B溶液、亚甲基蓝溶液等;光催化降解环境药物方面,磷酸银复合材料对阿拉特津、甲磺酸吉米沙星等药物的降解率可达到90%以上;抗菌性能方面,磷酸银对大肠杆菌有较强的抑制作用,对金黄色葡萄球菌也有一定的抑制作用。简单说明了磷酸银光催化的原理,磷酸银带隙较窄,价电子激发后产生光生电子-空穴对,光生空穴具有强氧化性,光生电子则具有强还原性,迁移到磷酸银的表面后,参与物质的氧化还原反应。最后对磷酸银的改进方法和发展前景进行了总结。     

用细菌合成人胰岛素链

这是用化学合成的人工基因在遗传工程研究中取得成功的第二个实例。实验设计的原理和步骤与第一个实例即生长激素释放抑制因子(Somatostatin)的完全相同(见本刊1978年第4期第147页):先用有机化学方法分别合成人工胰岛素的A链、B链的结构基因,然后用一系列DNA重组技术分别连接到大肠杆菌质粒上,这些质粒含有产生β-半乳糖苷酶的乳糖操纵子。当这些质粒转化至大肠杆菌以后,就可以使A、B链的结构基团都在乳糖操纵子调控系统下得到表达合成分别含有A链、B链的多肽分子,用溴化氰处理这些多肽链可以将A链、B链从β-台乳糖苷酶链上切除下来,A链、B链再分别纯化的。最后象我们在人工合成胰岛素工作中一样,将A链、B链通过二硫键联结成完整的胰岛素分子。迄今遗传工程在实际应用领域中所取得的这二个辉煌成果都是借助于有机合成的人工基因,这一事实对我们有机化学工作者是值得引起重视的。     

抗人IgG重链单克隆抗体和抗人IgG亚类限制性单克隆抗体的鉴定

本文对前获得的4株针对人IgG重链杂交瘤细胞株(1B3,2D5,2A4和2B6)所分泌的单克隆抗体(McAbs)用琼脂糖免疫双扩散试验进行初步分析,发现该4种McAbs是针对人IgG上的三个不同抗原决定簇.利用ELISA竞争试验得到进一步证实.用人IgG亚类免疫球蛋白分析4种McAbs,证明1B3 McAb可与IgG的所有4个亚类反应.其他3种 McAbs为 IgG亚类限制性 McAbs,2B6和 2D5不与 IgG4反应,称缺-IgG4 McAb; 2A4不与 IgG3反应,称缺-IgG3 McAb. 在琼脂糖免疫双扩散试验证实:(1)单独一种McAb 与抗原反应仅能出现透明沉淀线,但在琼脂糖中加入2% PEG 6000可出现常规所见的乳白色沉淀线;(2)将两个McAbs加入同一抗体孔内与抗原反应,当两个McAbs不同时(如2A4与2D5)则出现乳白色沉淀线.上述结果提示可用乳白色沉淀线的出现与否来初步鉴别两种McAbs的异同. 以上亚类限制性McAbs,在未获得亚类特异性McAb以前,可用于制备和纯化人 IgG3和 IgG4,亦可用于研究人 IgG的抗原分析。