一种标记物中的蛋白质测定

随着生物医学研究的迅速发展，在其相应的研究领域中也出现了许多新技术，蛋白质连接技术即是其一。本实验以自行合成时间分辨荧光免疫分析[TRFIA]双功能螯合剂4，7-二氯磺酰基苯基-1，10-菲绕啰啉-2，9-二羧酸（BCPDA）进行蛋白质连接技术研究，发现BCPDA在280nm处有比蛋白质更强的吸收，严重干扰了蛋白质测定。结合BCPDA标记牛血清白蛋白（BSA）实验，采用考马斯亮蓝染色建立了测定蛋白质方法。     

时间分辨激光荧光光谱分析技术研究 Ⅰ.长寿命荧光寿命测量

本文主要以测定样品中稀土元素含量为目的,为建立时间分辨激光荧光光谱分析手段而组装了微秒级激光荧光寿命测里装置。经反复实验,所测结果与其它荧光寿命测量仪器的测量结果进行了比较,证明我们自装的荧光寿命测量装置是可靠的。用本装置,我们测量了部分稀土配合物的荧光寿命,为我们开展时间分辨激光荧光光谱分析提供了依据。     

时间分辨激光荧光光谱分析方法研究——Ⅰ.铽、镝配合物共存时的分辨原理实验

本文对镝存在时铽的测定,进行了时间分辨激光荧光光谱分析方法的原理性实验。选择Tb、Dy-Sal乙醇溶液体系,测量了Tb~(3+)离子浓度范围为0.01～10μg/ml。Dy~(3+)离子浓度为0.1～100μg/ml范围内的荧光寿命。并得到了此范围内配合物离子浓度与荧光强度具有线性关系的结果。     

稀土螯合物BCPDA-Eu3+标记蛋白质研究

通过自制的双功能螯合剂 4 ,7 二氯磺基苯 1,10啡啉 2 ,9二羧酸 (BCPDA)标记牛血清白蛋白(BSA)实验 ,对于BCPDA标记蛋白质的条件进行研究。结果表明 :BCPDA在温和的条件下能与蛋白质反应 ,并在一定条件下与铕离子形成稳定的BSA BCPDA Eu3 标记物。利用自建的分析方法 ,测定了标记过程的有关参数。并对标记物的某些光学特性进行了研究。     

固相时间分辨荧光免疫标记技术研究

通过固相时间分辨荧光免疫分析双功能螯合剂4,7-二氯磺基苯-1,10菲罗啉-2,9-二羧酸标记抗-乙型肝炎表面抗体(HBsAb)IgG实验,对于BCPDA标记蛋白质的方法进行了研究。结果表明：BCPDA在相对温和条件下能与蛋白质反应,反应后蛋白质的相对生物活性高于78％,标记比为23～55,蛋白回收率达60％以上。在一定条件下与铕离子形成稳定的BCPDA-Eu^3 (HBsAb)IgG标记物。利用自建的分析方法,测定了标记过程的有关参数。并对标记物的某些光学特性进行了研究。     

铕螯合物的制备及光谱性质研究

稀土螯合物的制备是均相时间分辨荧光免疫分析中的关键部分,为了合成理想的稀土螯合物,以2,6-二(溴甲基)吡啶-3,5-二甲酸二乙酯为原料,首先优化合成了Li+⊂2,6-{N,N’,N,N’-[二(2,2’-联吡啶-6,6’-二甲基)]二(氨甲基)}-吡啶-二羧酸乙酯,使其产率明显提高。进一步选择乙腈和甲醇两种反应体系合成铕螯合物,并比较了不同反应体系下合成的铕螯合物的光谱性质。研究表明,乙腈和甲醇两种反应体系所得铕螯合物的激发光谱(最大激发波长为310 nm)、发射光谱(最大发射波长为616 nm)、量子产率基本相同,荧光强度在10-8～10-5 mol·L-1范围内与Eu3+浓度均成线性,相关系数分别为0.993 73和0.986 65,两种铕螯合物(c=2.5×10-5 mol·L-1)的荧光强度略有差异,荧光寿命分别为825和830 μs。因此,两种反应体系所得铕螯合物具有斯托克斯位移大、荧光强度强以及荧光寿命长等优点,并且此种穴状螯合剂结构中的吡啶-2,2-联吡啶可保护铕离子免受其他物质的干扰,是理想的稀土螯合物,可用于蛋白质、核酸等生物分子的标记。本研究不仅拓展了合成新型稀土螯合物的方法,而且为进一步建立均相时间分辨荧光免疫分析奠定了基础。     

均相时间分辨免疫分析铕穴状螯合剂的合成

以2,6-二（溴甲基）吡啶-3,5-二甲酸二乙酯为起始原料,经溴化、取代、加成及酸化反应合成了两种铕穴状荧光螯合剂Eu³⁺ 2,6-{N,N′,N,N′-[二（2,2′-联吡啶-6,6′-二甲基）]二（氨甲基）}-吡啶-二羧酸[Eu³⁺ bpy.bpy.py(CO₂H)₂, 1]和Eu³⁺2,6-{N,N′,N,N′-[二（2,2′ 联吡啶-6,6′-二甲基）]二（氨甲基）}-吡啶-二[N-(2-氨基乙基)酰胺]{Eu³⁺bpy.bpy.py[CONH(CH₂)₂NH₂]₂, 2},其结构和性能经¹H NMR, MS(ESI)和荧光光谱表征。结果表明：1的最佳激发波长为312 nm,发射特征峰位于598和615 nm,荧光寿命为1 064 μs,量子产量为10%。 2的最佳激发波长为311 nm,发射特征峰位于597和616 nm,荧光寿命为398 μs,量子产率为12.1%。     

磁性纳米氮化铝颗粒固定化β-葡萄糖苷酶的性质

以戊二醛为交联剂,研究了磁性纳米氮化铝颗粒固定化β-葡萄糖苷酶的条件及固定化酶的结构特征,并考察了固定化酶的某些酶学性质.结果表明,在4.5 ml磁性纳米氮化铝颗粒悬液(100 mg/ml)中加入0.5 ml戊二醛溶液(2%)超声波分散后,加入5 ml β-葡萄糖苷酶溶液(50 mg/ml),于20℃,pH 5.0和100 r/min条件下固载3.5 h,酶蛋白和酶活回收率分别为82.6%和78.4%.固定化β-葡萄糖苷酶的结构松散,不改变酶的结构特征.与游离酶相比,固定化酶对对硝基苯基-β-D-葡萄糖苷水解反应的最佳反应温度有所降低,最佳反应pH值有所升高,而米氏常数Km值有所增大,且具有良好的贮存稳定性和操作稳定性,表明磁性纳米氮化铝颗粒适合作为β-葡萄糖苷酶的固定化载体.     

2,6-双(3′-溴甲基-1′-吡唑基)-4-溴吡啶的合成与表征

以2,6-双(3′-甲基-1′-吡唑基)-4-氨基吡啶为原料,经重氮化,溴化合成了新型时间分辨荧光免疫分析双功能螯合剂中间体2,6-双(3′-溴甲基-1′-吡唑基)-4-溴吡啶.结构通过IR,MS,1H NMR和元素分析进行了表征,对合成条件进行了探讨.     

Sm_xLa_(1-x)P_5O_(14)和Dy_xY_(1-x)P_5O_(14)晶体的荧光寿命研究

本文用脉冲衰减法和时间分辨荧光光谱法测量了六种不同稀土离子浓度的Sm_xLa_(1-x)P_5O_4晶体的~4G_(5/2)→~6H_J(J=5/2,7/2,9/2,11/2)四个能级和七种不同稀土离子浓度的Dy_xY_(1-x)P_5O_(14)晶体的~4F_(9/2)→~6H_J(J=15/2,13/2,11/2,9/2)四个能级的荧光寿命和荧光强度。结果指出,在这类晶体中,Sm~(3+)和Dy~(3+)的荧光寿命随着离子的浓度增加而变短,存在着严重的荧光浓度猝灭现象。最后还讨论了浓度与寿命,寿命与荧光强度的关系。