去甲斑蝥素对人真皮淋巴管内皮细胞体外三维培养淋巴管生成的影响及其机制

目的探讨去甲斑蝥素（NCTD）对人真皮淋巴管内皮细胞（HDLEC）体外三维培养淋巴管生成的影响及机制。方法建立HDLEC体外培养淋巴管生成模型,随机分为NCTD组（加1/3IC50NCTD40nM）与空白对照组,作用24h,观察两组淋巴管生成的形态变化;并采用免疫细胞化学、Westernblot试验和qPCR技术测定比较两组淋巴管生成因子（VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3）蛋白和基因表达。结果NCTD组的HDLEC细胞形态发生改变,很少形成管状结构,时间延长后细胞出现变圆、离壁、浮起、死亡;且NTCD组淋巴管生成（10.9±2.3）个,明显少于空白对照组（68.4±5.2）个（P＜0.01）。免疫细胞化学染色、Westernblot试验结果显示,NCTD对HDLEC三维培养淋巴管生成中的VEGF-C和VEGF-D的蛋白表达下调（P＜0.01）。qPCR检测显示,NCTD对VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3的基因表达明显降低（P＜0.01）。结论NCTD对通过下调淋巴管生成因子VEGF-C、VEGF-D的蛋白和基因表达,产生抗淋巴管生成的作用。