一种新的玉米抗氧化肽的制备与结构表征

用酶法在受控条件下降解玉米醇溶蛋白,对酶解产物进行分离纯化,获得一种新的抗氧化肽;对其一级结构进行了表征,氨基酸组成和顺序为Leu-Asp-Tyr-Glu;从结构上分析了其可能的抗氧化机制.     

小分子玉米肽Leu-Asp-Tyr-Glu保护线粒体抗氧化损伤的研究

线粒体是细胞内氧代谢的主要场所,其膜上富含不饱和脂肪酸,使得线粒体成为自由基进攻的主要靶部位^[1].自由基作用于线粒体膜发生脂质过氧化损伤反应,引起膜的结构与功能改变,使得膜上一系列重要的酶空间排列紊乱,活性降低,膜的通透性改变,诱发多种疾病^[2].目前,抗氧化肽类作为一种非酶类自由基清除剂的研究正在兴起^[3].来源于玉米醇溶蛋白酶降解物中的低分子量肽具有许多重要的生理功能,如促进乙醇代谢、抗疲劳作用以及降血脂等功效^[4].而这些功能的实现主要依赖于其抗氧化活性^[5].最近,我们从玉米蛋白酶解物中获得了一种新的小分子抗氧化肽Leu-Asp-Tyr-Glu(LD YE,LD YE经文献检索为一种新的寡肽)^[6].     

碱性氨基酸对螺旋型抗菌肽生物活性的影响

以螺旋型抗菌肽HPRP-A1为模板,利用精氨酸(R)对HPRP-A1序列中的赖氨酸(K)进行不同位点、不同数量的取代,结合改造前后抗菌肽的螺旋度、疏水性及自聚集常数等理化性质,研究了螺旋型抗菌肽结构与活性的相关性.进一步结合脂质体模拟和细胞膜穿透实验,对螺旋型抗菌肽与不同类型细胞膜的相互作用过程进行了研究.结果表明,增加精氨酸的取代数量,会增强抗菌肽的疏水性和螺旋度,导致螺旋型抗菌肽对真核细胞的毒性增强;但精氨酸的增加会伴随着抗菌肽自聚集能力的降低以及抗菌肽对细菌细胞膜的渗透性降低,导致抗菌肽的抗菌活性降低.本研究对于设计和改造具有应用前景的螺旋型抗菌肽具有重要指导意义.     

螺旋型抗菌肽的疏水性对抗细菌与抗真菌活性的影响比较

α-螺旋型多肽HPRP-A1由15个氨基酸残基组成,来源于幽门螺杆菌核糖体蛋白L1的N端.本研究以HPRP-A1为模板,在其非极性面中心通过单个氨基酸定点取代的方法,形成一系列疏水性不同的多肽类似物,系统地研究疏水性对α-螺旋型多肽生物活性的影响.结果显示,多肽疏水性及所带净电荷对多肽生物活性起着重要的作用;HPRP-A1及疏水性相对较高的多肽类似物具有较好的广谱抗菌活性（包括革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌及真菌）,但也有相对较高的溶血活性;多肽的疏水性与所带净电荷的变化对多肽抗细菌活性与抗真菌活性所产生的影响有着相似的变化趋势和程度.这意味着多肽与细菌的作用机制和多肽与真菌的作用机制存在一定的相关性.多肽对细菌和真菌的抗菌活性存在特异性,为设计出具有临床应用前景的抗菌肽药物奠定了基础.     

净电荷对螺旋型抗癌肽生物活性的影响

以高活性两亲性α-螺旋型阳离子抗癌肽A12L/A20L(多肽P)为模板, 在其亲水面进行氨基酸定点取代, 获得了一系列带有不同净电荷的多肽类似物, 研究了净电荷对螺旋型抗癌肽生物活性的影响. 结果表明, 抗癌肽净电荷的改变对其溶血活性影响较小(最大差异为2倍), 而对抗癌活性和选择性的影响显著(最大差异为10倍). 抗癌肽P的净电荷最适范围为+7到+8, 分子间静电排斥作用的最佳数目为3~5个, 高于或低于此范围, 其抗癌活性和选择性均明显降低. 与人的正常细胞相比, 负电性的癌细胞膜对于抗癌肽的净电荷变化更敏感, 表明两亲性螺旋型抗癌肽针对癌细胞与正常细胞表现出良好的选择特异性.     

酶解鹿茸肽的制备、纯化及抗氧化活性

利用一种工业用碱性蛋白酶对新鲜梅花鹿鹿茸进行水解制备生物活性肽。首先,考察了酶用量、底物浓度和反应时间对水解反应的影响,确定了最佳水解条件为酶浓度1：150,底物浓度1：13,水解时间60 min。其次,利用硫酸胺分级沉淀法制备了鹿茸多肽粗提液,同时采用缓冲液保护其活性,再经Sephadex G-25凝胶层析柱进行分离纯化,得到了具有最强抗氧化活性的鹿茸肽组分（VAP-B）。最后,利用制备型高效液相色谱柱对VAP-B进一步纯化,得到了分子量在800以内的小肽活性组分（VAP-B1）,其蛋白含量为70.45%。在此基础上,对小肽活性组分VAP-B1进行了理化性质分析,检测其抗氧化活性,包括清除超氧阴离子,羟自由基以及抗脂质过氧化的能力和还原能力。实验结果表明,鹿茸肽VAP-B1浓度为20mg/ml时,对邻苯三酚自氧化的抑制率达到91.9%,有明显的清除超氧阴离子的作用;浓度为10mg/ml时,对羟基自由基的清除作用达到100%,且在一定的浓度范围内呈剂量依赖关系。此外,鹿茸肽VAP-B1具有一定的防止脂质过氧化和还原力作用。     

细胞粘附位点RGD前体二肽的化学合成与酯化

摘要利用一种新颖的化学法合成了细胞粘附位点RGD前体二肽GD(Gly-Asp). 并利用ROH-HCl法进一步完成了GD二肽乙酯化和甲酯化. 考察了GD二肽对乙醇/甲醇的摩尔比,  反应温度和反应时间对酯化收率的影响, 使GD二肽酯化的条件得到了优化, GD二肽对乙醇/甲醇的摩尔比为1∶40,  反应温度30℃,  反应时间1~2.5 h,   最大收率为80%~85%. 利用质谱分析法确证了两种GD二肽酯为Gly-Asp-(OEt)2 和Gly-Asp-(OMe)2.