二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药单链抗体的制备及广谱特异性

从分泌抗二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药(DPPs)单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞系(12C2)中提取了总RNA, 经RT-PCR反转录成cDNA, 设计带linker引物, 采用重叠延伸PCR制备单链抗体(scFv)基因, 将其克隆到噬菌体载体p3MH中, 构建成噬菌体单链抗体表达载体, 转化大肠杆菌表达出噬菌体表面展示scFv, 对经过Phage-ELISA鉴定的阳性克隆进行噬菌体外壳蛋白基因geneⅢ的去除, 用IPTG诱导其可溶性表达, 对表达产物进行SDS-PAGE, Western-Blot及ELISA鉴定, 并与亲本MAb进行性能对比. 结果表明, 可溶性表达的scFv分子量为27000; scFv与DPPs的交叉反应率比其亲本MAb提高了1.3~3.5倍, 表明其广谱特异性有所提高. 由于scFv与MAb相比具有诸多优点, 因此本研究为有机磷农药多残留检测方法的建立提供了一种更广谱、 更灵敏的新型识别分子.     

三聚氰胺单试剂荧光偏振免疫分析法

用三聚氰胺半抗原(MEL)与异硫氰酸荧光素乙二胺(EDF)反应合成了荧光示踪物MEL-EDF, 示踪物与三聚氰胺抗体反应得到稳定的单试剂免疫复合物, 考察了其结合动力学和置换动力学过程, 建立了一种三聚氰胺单试剂荧光偏振免疫分析方法(SR-FPIA). 该方法的检出限(LOD)为3.2 ng/mL, 半抑制浓度(IC₅₀)为157.1 ng/mL, 检测范围(IC₂₀~IC₈₀)为12.2~1012.4 ng/mL, 能够满足国家标准和国际食品法典委员会(CAC)对于食品中三聚氰胺最高残留限量的检测要求. 整个检测过程在15 min内完成, 并且单试剂免疫复合物在4℃下至少可稳定保存30 d以上. 本研究对开发三聚氰胺新型免疫检测方法具有重要意义.