中国红豆杉细胞紫杉醇合成期特异表达新基因TS1-FL的部分cDNA克隆

采用mRNA差异显示技术(DDRT—PCR)比较了悬浮培养的中国红豆杉细胞合成紫杉醇前后的基因表达差异,并从紫杉醇合成期细胞中分离出一个特异表达的cDNA克隆TS1．TS1长度为638bp,序列相似性分析结果表明它代表一新基因序列(Genbank登录号：AF426429),将此新基因命名为TS1-FL．开放读框分析结果表明Tsl拥有一个不完整的开放读框,蛋白质同源性检索没有发现与TS1翻译序列有较大同源性的蛋白质．对此基因的进一步研究可揭示它在紫杉醇生物合成中所扮演的角色．     

中国人CD59cDNA克隆、序列分析及其表达

用ＲＴ－ＰＣＲ方法从中国人胚胎总ｍＲＮＡ中扩增出４２０ｂｐ人补体终末阶段同源限制因子（ＣＤ５９）的ｃＤＮＡ，序列分析结果表明，所获得的ＣＤ５９ｃＤＮＡ与文献报道中的基因序列完全一致，含ＣＤ５９全长编码区．构建了真核表达质粒，在３Ｔ３细胞中得到了表达．     

p16蛋白对B型流感病毒诱导HeLa细胞凋亡的影响

以流感病毒 B/沪防 93- 1株感染 He L a细胞 ,通过 Hoechst332 5 8荧光染色、琼脂糖凝胶电泳分析检测细胞凋亡 ,并用免疫组化技术测定 p16蛋白的表达 ,探讨 p16蛋白表达对 He L a细胞凋亡的影响 .结果表明 ,B型流感病毒感染 He L a细胞可诱导其凋亡 ,感染 2 4h后 ,细胞凋亡数达 84.5 % ;He L a细胞凋亡伴随 p16蛋白的表达 ,2 4h达高峰 ,阳性率为 49.2 3± 1.70 .研究结果提示 ,B型流感病毒感染诱导 He L a细胞凋亡过程与 p16基因激活相关 ,p16蛋白可能是介导流感病毒诱导细胞凋亡的另一重要途径 .     

黑色素对流感病毒诱导细胞凋亡的抑制效应

用荧光染色技术及流式细胞仪分析方法研究了 Ａ１／京防８６１ 和 Ｂ／沪防９３１ 两株流感病毒感染与细胞凋亡的关系,探讨利用嗜麦芽假单胞菌黑色素抑制流感病毒诱导 Ｍ Ｄ Ｃ Ｋ 细胞凋亡的可能性 结果显示：黑色素在 １００ ｍ ｇ· Ｌ－ １ 浓度范围内,对 Ｍ Ｄ Ｃ Ｋ 细胞无细胞毒性; Ａ１／京防 ８６１ 和 Ｂ／沪防 ９３１ 两株流感病毒均可诱导 Ｍ Ｄ Ｃ Ｋ细胞凋亡,但二者存在毒力差异（ｐ＜ ０．０５）病毒感染１２ ｈ 后,荧光染色可观察到典型的凋亡核形态,流式细胞仪则可检测到病毒诱导 Ｍ Ｄ Ｃ Ｋ 细胞产生的凋亡峰,且细胞凋亡率分别为３７．０２％ 和 ２７２９％ ;２０ ｍ ｇ· Ｌ－ １ 的黑色素可有效抑制两株流感病毒诱导细胞凋亡,使细胞凋亡指数从２５％ ～３５％ 降至３％ 以下 结果表明,黑色素可以抑制 Ａ 和 Ｂ型流感病毒诱导细胞凋亡     

嗜盐细菌冷冻干燥保护剂的正交法优化

报道了利用正交试验设计的原理和方法，筛选冷冻干燥保藏盐生盐杆菌（Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｈａｌｏｂｉｕｍ）菌株Ｒ１的保护剂组成与最佳配比的结果．直接分析和方差分析的结果表明：在由ＮａＣｌ、水解乳蛋白、海藻糖和蔗糖４种成份组成的保护剂系统中，海藻糖对菌株Ｒ１冷冻干燥存活率影响最大，为主要因素；其次为蔗糖和ＮａＣｌ；水解乳蛋白影响最小，为次要因素．保护剂最优的水平组合为ＮａＣｌ１６％、水解乳蛋白４％、海藻糖６％、蔗糖１８％．采用正交法从传统“简单可比性”需８１次的实验减少到９次，并且正交法的综合可比性能在较短时间内找出最佳的水平组合．利用最佳组合的保护剂使冷冻干燥菌株Ｒ１存活率达到９１．８０％．从试验的结果可以认为只要选择适当的保护剂，用冷冻干燥法保藏嗜盐菌是安全可行的．     

极端嗜盐菌冻干保藏及其质检稳定性的研究

采用优化组合保护剂冷冻干燥２０株极端嗜盐菌，于４℃冷库保存２年，经复水测定，全部菌株保持较高存活性．用ＴＥＮＳ法对其中９株菌Ｒ１，ＲＦ１，Ｊ７，Ｓ９，Ｔ４～１，Ｊ６，Ｒ６～１，Ｒ６～７和Ｒ６～５作质粒稳定性检测，含质粒的菌株ＲＦ１，Ｊ７，Ｓ９，Ｔ４～１，Ｒ６～５于４℃保存２年后，质粒稳定存在；而菌株Ｒ１，Ｊ８，Ｒ６～１和Ｒ６～７冻干保存前后均末检测到质粒．结果表明：优化组合保护剂不仅能有效地用于极端嗜盐菌的冷冻干燥保藏，还能保持宿主质粒的稳定性．     

伪狂犬病毒TK基因转移载体构建及LacZ基因表达

在扩增、克隆PRVtk、gH基因的基础上,构建了包含tk和gH基因片段的转移载体质粒pTK2．5．以PRV糖蛋白gG启动子(PgG)为控制外源基因表达的启动子,以E．colilacZ为报道基因,用其替换pTK2．5质粒tk区的Sall与Xhol之间的序列,构建了转移载体质粒pTK．LacZ．瞬时表达证实,转染细胞的pTK—lacZ质粒在野生型PRV感染的情况下,能有效表达β-Gal酶活性．将pTK．1acZ转染BHK21细胞后再以PRV感染进行同源重组,在143TK-细胞上经5．溴脱氧尿苷选择,Vero细胞纯化,X-GaI染色,蓝斑筛选,分离到重组体PRV(rPRV)．rPRV与野生型PRV在细胞上具有类似的生长特性,且经过连续传代的rPRV仍能稳定的表达β-Gal酶活性．     

单纯疱疹二型病毒和口蹄疫病毒感染过程能量代谢的微量热研究

本论文采用LKB－2277生物活性检测器研究HeLa细胞在单纯疱疹Ⅱ型病毒感染和BHK－21细胞在口蹄疫病毒感染下的能量代谢过程，以及热疗及抗病毒药物干扰素对这一过程的能量代谢的影响。结果表明病毒感染细胞的代谢热功率大于未被感染的细胞并且被不同类型病毒感染的细胞之间代谢产热功率存在显著的差别；病毒感染是一个温度敏感的过程；干扰素对病毒感染过程有抑制作用。通过对不同贮存时间口蹄疫病毒感染BHK－21细胞的能量代谢产热曲线的分析表明长时间保存对病毒的毒力和感染能力产生了较明显的影响。这些结果都表明微量热法是研究病毒感染过程的一种有效方法。     

微流控芯片操纵传输及实时监测单细胞量子释放

微流控芯片技术用于细胞生化分析已引起了广泛关注.Harrison等首次在微流控芯片上对细胞群体进行操纵、传输及反应.yang等在微流控芯片上操纵细胞群体的排列,并用荧光检测细胞群体摄取钙的反应.至今还未见到微流控芯片对单个细胞进行操纵传输、定位及实时监测的报道.单细胞受激释放的监测对探索生物体神经传导具有重要意义.     

微量热法研究富勒烯衍生物对HL-60细胞代谢

用微量热法研究了两种水溶性富勒烯衍生物对 Ｈ Ｌ６０ 细胞系的作用,发现除０．５ ｍ ｇ／ Ｌ富勒烯衍生物（ Ｉ）对 Ｈ Ｌ６０ 细胞系有抑制作用以外,其它富勒烯衍生物对 Ｈ Ｌ６０ 细胞系的生长代谢有促进作用