手性高效液相色谱法检测恩替卡韦中光学异构体杂质的含量

采用Chiralpak AD-H手性柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm),建立了正相高效液相色谱(NP-HPLC)法直接拆分恩替卡韦与其光学异构体的方法.考察了流动相组成、酸碱性对柱效、分离度、保留时间等参数的影响.经优化,以正己烷-异丙醇-乙醇-三氟乙酸-三乙胺(70∶ 12∶ 18∶ 0.05∶ 0.05,V/V)为流动相,流速0.5 mL/min;检测波长261 nm.在此条件下,恩替卡韦与光学异构体分离度>4.2;光学异构体的检出限为0.12 mg/L,在0.25～4.0 mg/L浓度范围内有良好的线性关系;日内与日间精密度RSD<4.0%;按标准加入法计算,加样回收率在87.0%～100.8%之间; RSD<3.0%;按外标法计算,加样回收率在98.2%～110.4%之间; RSD<3.0%.本方法可作为恩替卡韦原料药中光学异构体杂质限量的控制方法.